人胚肝细胞分离培养研究

目的 探讨体外优化培养人胚肝细胞的方法：方法采用胰蛋白酶和聚乙烯吡咯烷酮(pvp)，胶原酶，胶原酶和pvp消化法分离人胚肝细胞，并比较3种方法对分离人胚肝细胞的效果。结果运用这三种方法均能成功地培养出原代肝细胞，并能够传代；但胶原酶和pvp消化法分离细胞效果最好，细胞贴壁生长能力强。三种消化方法其细胞存活率从高到低依次为胶原酶和pvp消化法、胶原酶消化法、胰蛋白酶和pvp消化法。结论人胚肝细胞的分离首选胶原酶和pvp消化法，使用该法在体外培养的人胚肝细胞生长良好，可用于肝细胞移植和生物人工肝等方面的研究。     

绵羊毛囊细胞分离培养的观察

应用0．25％与0．125％的胰酶分离绵羊毛囊细胞，获得2种不同形态的毛囊细胞；其次，对比分析了热消化法与冷消化法对分离毛囊细胞的影响，结果表明：热消化法优于冷消化法；同时，观察到新疆细毛羊与阿勒泰羊的毛囊细胞形态基本一致。     

甲型肝炎病毒(H2株)在三种细胞中的感染性滴度比较

本文用恒河猴胚肾传代细胞（MEK）、人胚肺成纤维二倍体细胞（KMB17和2BS）对HAV-H     

小鼠早期胚胎的全胚原位杂交技术

目的:探索一种适合于早期胚胎基因表达型检测的全胚原位杂交技术.方法:收集小鼠囊胚、固定;制备VASP、IL1R2基因特异性地高辛标记的cRNA探针;对囊胚进行杂交前处理、全胚原位杂交、抗体处理、显色以及显色后处理与镜检.结果:VASP、IL1R2特异性表达在囊胚的内细胞团细胞和滋养层细胞中.结论:小鼠早期胚胎全胚原位杂交技术适用于早期胚胎基因时空表达型的检测.     

甲型肝炎减毒活疫苗毒种

中型肝炎减毒活疫苗毒种(H2减毒株)的选育包括:用新生猴肾细胞(NMK)直接分离人粪便中的肝病毒(HAV);HAV在NMK细胞上的连续传代;低温传代;低温适应于人胚肺二倍体细胞(KMB17);减毒株特征研究;发现猕猴对HAV易感并建立用猕猴筛选减毒株;在KMB17细胞上制备合格的人用疫苗;疫苗安全性的考核、疫苗效果的考核等。     

猪白细胞干扰素的制备及四种纯化方法的比较

本文以猪白细胞—鸭新城疫病毒Ⅱ系(NDVⅡ)为诱生系统探讨了猪白细胞干扰素(PLeIFN)诱生条件,并比较了四种方法纯化PLeIFN的效果。实验表明:(1)每毫升猪白细胞悬液加入40～80HA的NDVⅡ,产生PLeIFN效价>1500 u/ml;(2)猪白细胞经低浓度PLeIFN预处理可增强其产生PLeIFN能力,(3)PLeIFN预处理时间以3小时为宜;(4)猪白细胞干扰素在猪肾细胞上的抗病毒活性高于在鸡胚细胞上的活性;(5)四种方法中以硫氰酸钾—冷乙醇法纯化效果为好,该法去除杂蛋白能力高于其它方法;(6)用未酸化处理的PLeIFN粗制品可提高硫氰酸钾—冷乙醇法的纯化效果。     

栉孔扇贝（Chlamys（Azumapecten）farreri）消化盲囊的组织学和组织化学的研究

运用石蜡切片法，透射电镜技术及组织化学方法，对栉孔扇贝的消化盲 囊进行了研究，结果表明，消化盲囊的腺上皮由消化（吸收）细胞和分泌细胞组成，消化（吸收）细胞顶端有微绒毛，细胞内有酸性磷酸酶，碱笥磷酸酶，脂酶和酯酶活性，还含有糖原和脂肪，是进行食物的细胞内消化和营养物质吸收的主要场所，并有储存能量的功能，分泌细胞内含粗面内质网，高尔基体和分泌颗粒，具有酸性磷酸酶和碱民生磷酸酶活性，并含有丰富的RNA和蛋白质，有分泌化酶的功能，消化盲囊导管上皮细顶端有纤毛和微绒毛，细胸内有酸性磷酸酶，碱性磷酸酶及脂酶活性，也能分泌消化酶，消化（吸收）细胞浅细胞质及及其释放到盲囊腔中的质团中含铁，各部位不含钙。     

酵母微量元素测定中样品消化方法的研究

本文比较研究了酵母和奶粉样品的四种消化方法，在ＨＮＯ３－Ｈ２ＳＯ４，ＨＮＯ３－ＨＣｌＯ４和ＨＮＯ３－Ｈ２Ｏ２三种凯氏瓶法中，ＨＮＯ３－Ｈ２Ｏ２法较好，而在ＨＮＯ３－Ｈ２Ｏ２的凯氏瓶和微波炉ＰＴＦＥ高压密封罐消化法中，微波炉消化法的速度快、简便、准确度好。     

石灰干式消化工艺参数优化选择

采用小型间歇消化装置,用正交试验法研究消化参数对石灰干式消化速度及消石灰结构性能的影响.实验结果表明,消化参数对消化结果的影响从大到小排序为:消化时间＞水灰比＞搅拌速度＞消化水初始温度.优化后的工艺参数:消化时间为5～10 min;水灰比(摩尔比)为1.3～1.6;搅拌速度为250～300 r/min;消化水初始温度为25～45℃.优化工艺参数下制备的消石灰比表面和孔隙率最大可达25.69m2·g-1和75.09％.     

脂肪来源的间充质干细胞分离方法的改进

目的:从供体年龄、取材部位、提取方法3方面来研究稳定的脂肪间充质干细胞(ADMSCs)分离提取方法.方法: 从兔颈背部皮下、肌间以及腹股沟皮下的脂肪组织取材,分别采用一次消化收集法和多次消化收集法分离提取ADMSCs,单层传代培养.分别比较不同提取方法,老年兔、壮年兔与幼年兔,同一供体不同部位的脂肪组织,所分离的ADMSCs产量和生物学特性.结果: 运用多次消化收集法能从脂肪组织中稳定分离出生长旺盛的ADMSCs,与一次消化收集法相比能显著提高所获取的的细胞产量.从老年兔、壮年兔、幼年兔以及同一供体的不同部位脂肪组织中所提取的ADMSCs生长增殖活性无明显差异,但从单位体积脂肪组织提取得到的ADMSCs产量显著不同.结论: 多次消化收集法能显著提高分离获得的ADMSCs产量,是对传统的一次消化收集法的改进.选择不同供体年龄和取材部位提取ADMSCs,对细胞的生物学活性影响不大,但对细胞产量有明显影响.     

干细胞研究进展

由于干细胞具有自我更新和多向分化潜能的功能,使得人们用干细胞治疗多种疾病成为可能.就干细胞的研究概况、研究技术、干细胞技术的市场前景以及干细胞研究面临的问题等作一概述.     

温度对重组BHK细胞生长、代谢和vWF蛋白表达的影响

通过重组幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)在不同温度下的批培养和脉冲培养,研究了温度对重组BHK细胞生长、代谢以及血管性血友病因子(vWF)蛋白表达的影响。相对于37℃,升高和降低温度的培养都降低了细胞的生长速率和密度,降温的作用更明显,主要表现为延长了细胞生长的迟滞期。在不同温度的脉冲培养中,细胞的比生长速率变化不大,表明进入对数生长期后,细胞生长对一定范围的温度变化不敏感。培养温度对细胞群体中处于S期的细胞比例影响不大,但在33℃和39℃下培养,细胞群体中处于G0/G1期的细胞比例有明显升高,处于G2/M期的细胞比例下降。当培养温度降低到33℃时,细胞群体中发生凋亡的细胞数随着温度升高而增加。温度的降低能显著提高单个细胞的vWF蛋白表达能力,在33℃下培养,vWF平均比生产速率提高了45%。     

间质干细胞来源、鉴定、可塑性和应用前景(综述)

间质干细胞(MSCs)存在于骨髓、肌肉、骨、软骨等部位，可分化为中胚层的细胞，如成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞等，亦可分化为内胚层、外胚层的细胞，如神经细胞、肝脏细胞、肾脏细胞等，同时由于来源广、易于分离扩增和基因转染，在临床、科研上有很大的潜在应用价值。     

细胞工程的研究进展及前景展望

简介了细胞工程的概念及基本操作,论述了其在若干重要领域研究取得的重大进展,并展望了其发展前景。     

橙皮苷对人食管癌Eca9706细胞增殖的抑制研究

本文通过MTT法和流式细胞术研究橙皮苷对人食管癌Eca9706细胞增殖的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响,结果显示:不同浓度橙皮苷能有效抑制Eca9706细胞增殖,且呈剂量依赖性(P<0.01),IC50为84μg/mL;22、43、84μg/mL的橙皮苷作用于Eca9706细胞48h,细胞周期在S期的比例分别为25.16%、30.13%、31.05%,比对照组明显升高(P<0.002);细胞凋亡率分别为6.23%、8.19%、10.62%,与对照组相比细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).以上结果说明,橙皮苷通过干预细胞周期和凋亡抑制食管癌Eca9706细胞增殖.     

泛素连接酶Nedd4调控人前列腺癌细胞的增殖与凋亡

为了研究泛素连接酶Nedd4对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,利用小RNA干扰技术,通过慢病毒包装,侵染前列腺癌细胞DU145,达到下调Nedd4表达的目的.MTT检测表明,下调Nedd4表达可以抑制DU145细胞的增殖;DAPI染色发现,下调Nedd4表达的DU145细胞对星形孢菌素诱导的细胞凋亡更加敏感.这些结果都说明,下调Nedd4的表达不仅可以抑制DU145肿瘤细胞增殖,而且可以促进细胞凋亡.     

小鼠胚肝基质细胞在体外培养中的动态演化

胚肝基质细胞是研究胚肝造血调控的重要工具，本实验对小鼠胚肝基质细胞在体外培养过程中的生长、细胞类型组成及其组成比例的演变过程进行了观察．实验显示小鼠原代培养初期基质细胞是由平滑肌样上皮细胞、巨噬细胞以及成纤维样细胞、树突状细胞、内皮细胞构成的，经过多次传代后，巨噬细胞等类型的细胞逐渐丢失，平滑肌样上皮细胞和成纤维样细胞成为主体，表明体外培养的小鼠胚肝基质细胞在4代以内都能较真实的反映体内造血微环境的构成，适用于胚肝造血研究．此为进一步研究胚肝基质细胞在胚胎期造血过程中的作用奠定了工作基础．     

新生大鼠神经干细胞分离培养及缺氧损伤模型的建立

目的建立缺氧损伤模型,观察缺氧损伤对神经干细胞分化的影响。方法用MTT,LDH等方法比较95%N2,5%CO2比率的缺氧气体分别培养1,2,4,6,8 h神经干细胞的变化。结果三天内的大鼠海马存在大量神经干细胞,可分化为神经元、胶质细胞等神经细胞类型,95%N2,5%CO2比率的缺氧气体培养6 h后神经干细胞OD值由缺氧前0.369±0.352降至0.270±0.229,LDH 漏出量由缺氧前10.374±0.390 unit/ml.min增加到14.710±1.337 unit/ml.min,差异显著。结论证实了新生大鼠海马内提取的细胞为神经干细胞,神经干细胞缺氧培养6 h可以建立神经干细胞缺氧损伤模型,但短时间缺氧培养对细胞分化类型无明显改变。     

合欢花水提物对大鼠脑胶质瘤C6细胞株的增殖抑制与凋亡诱导作用

采用MTT法检测合欢花水提物对C6细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测该水提物对C6细胞的诱导凋亡作用.结果表明:合欢花水提物能抑制C6细胞的增殖,且具有剂量和时间依赖性,其在24 h、48 h、72 h时对C6细胞的半数抑制率(LD50)分别为:305 μg/mL、50 μg/mL、15 μg/mL.流式细胞术结果显示:200 tμg/mL、300μg/mL合欢花水提物均可诱导C6细胞发生早期凋亡,与对照组细胞相比,早期凋亡率分别由对照组的0.7％增加到了4.3％、14.3％.提示合欢花水提物抑制C6细胞增殖机理与诱导细胞凋亡途径有关.     

细胞芯片制备仪的研制及应用

目的 研制快速、简单、方便的细胞芯片制备仪,并验证其功能.方法 制备仪由相互配合的阵列管固定板和内芯固定板组成,在阵列管固定板上按行列方式设有多根带微孔的阵列管,在内芯固定板上设有多根与阵列管固定板上各阵列管对位配合的阵列管内芯.工作中通过阵列管及内芯间形成的空腔结构,将细胞样本通过琼脂糖包埋于空腔内,使之在带微孔的阵列管空间进行脱水、透明、浸蜡等处理,进而制成细胞芯片石蜡包埋块,再经过切片、染色后即可完成细胞芯片的制备.结果 细胞芯片制备仪能够迅速制备出27种细胞的细胞芯片,肉眼观点阵完整,分布均一,经HE切片及免疫组化染色证实,染色效果良好,结果可靠.结论 细胞芯片制备仪构造简单,操作方便,能够迅速成型制备出多种不同细胞类型的细胞芯片,适用于推广使用.