干用辣椒RAPD—PCR反应体系正交优化的研究

以干用辣椒幼苗为材料,研究了干用辣椒RAPD分析过程中的Taq酶、Mg^2＋,dNTPs、引物、模板DNA浓度、退火温度等影响因素,建立适合干用辣椒RAPD反应的PCR体系,即25μL反应体系中含有解体Taq酶1．5U、Mg^2＋2．5mmol／L,dNTPs0．6mmol／L、引物0．8μmol／L、模板DNA60ng．扩增程序为：94℃预变性4min;94℃变性1min,37℃退火1min,72％延伸1．5min,40个循环;最后72℃副延伸5min．     

朱鹮RAPD反应体系优化研究

目的研究朱鹮RAPD反应中Mg2 浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量等几种因素对扩增结果的影响,并探讨反应的最优条件。方法以朱鹮DNA为材料进行RAPD试验,对Mg2 浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量进行梯度设置,每次仅改变一个参数,并保持其他条件不变。结果建立了一套适用于朱鹮的RAPD反应体系。结论优化后的朱鹮RAPD反应条件为:反应总体积25μL,其中含Mg2 (25 mM)2.5μL,10×Buffer2.5μL,dNTPs(10mM)0.5μL,引物(8μmol/L)1.0μL,Tag酶(3 U/μL)0.4μL,DNA模板(10 ng/μL)3.0μL;PCR循环中复性温度为37℃。     

正交设计优化芥菜ISSR反应体系研究

利用正交实验设计,对芥菜ISSR-PCR反应的5因素4个水平进行研究,建立了芥菜ISSR—PCR反应的最佳体系,即在20μL反应体系中,模板DNA40ng,引物10pmol,10×反应缓冲液,dNTPs为0．5m mol／L,TaqDNA聚合酶1U,Mg^2＋ 2．0mmol／L．并进一步进行梯度退火实验,找到了芥菜ISSR最适的退火温度为51℃．     

栉孔扇贝RAPD反应体系的优化

在研究栉孔扇贝不同地理野生种群的遗传多样性时 ,对RAPD反应中的模板浓度、引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度等影响反应结果的因素进行了系统分析 ,并在此基础上 ,建立了栉孔扇贝RAPD实验室研究的最佳反应体系 :2 5 μl反应体系中 ,模板浓度为 2 5ng ,引物浓度为 2 5ng,dNTPs为 10 0 μM ,TaqDNA酶 1个单位 ,10×Buffer 2 5 μl,镁离子浓度 2mM .PCR循环参数为 :94℃预变性 5min ,然后 94℃变性 0 5min ,36℃退火 1min ,72℃延伸 1min ,共进行 45个循环 ,最后 72℃延伸 10min .     

椭圆食粉螨ISSR-PCR反应体系正交优化试验设计

以椭圆食粉螨基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,建立椭圆食粉螨的ISSR最佳反应体系.优化得到的反应体系为:Mg2 浓度1.0 mmol/L、Taq DNA聚合酶1.0 U、dNTPs浓度0.2 μmol/L、引物浓度0.3 μmol/L、模版DNA量40 ng.反应程序为:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性1 min,48℃、50℃、52 ℃(不同引物退火温度各异)复性1 min,72 ℃延伸1.5 min,35个循环;72 ℃延伸5 min;4 ℃保存.通过梯度退火试验,确定不同引物的最适退火温度.     

柳树RAPD反应体系均匀设计试验研究

从柳树幼苗的嫩叶中提取基因组DNA作为模板,运用均匀设计方法,获得;柳树RAPD扩增反应的优化体系：25μL反应体系中,DNA模板用量70 ng,引物浓度0.5mmol.L-1,Mg2＋浓度3mmol.L-1,TaqDNA聚合酶用量1.0 U,dNTP浓度0.3mmol.L-1.用16条引物进行验证,证实该体系重复性好、结果稳定.     

均匀设计在樟树RAPD反应体系优化中的应用

以樟树[Cinnamomun camphora(L.)Presl]为材料,运用均匀试验设计,对影响RAPD标记的多个因素,包括Mg2 、dNTP、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶浓度等,优化得到适合于樟树RAPD标记的反应体系为:20μL反应体系中,含1. 5 mmol/L MgCl2,0.2 mmol/L dNTP,0.2 μmol/L 引物,8 ng/μL模板DNA,1 U Taq DNA聚合酶.研究结果表明:均匀试验设计可以应用于RAPD反应体系的优化.     

濒危植物刺桫椤RAPD反应体系的优化

以高盐SDS法提取濒危植物刺桫椤(Alsophila spinulosa)嫩叶总DNA，进行RAPD分析，分别研究了模板DNA、引物、dNTP、Mg^2 和Taq DNA聚合酶用量以及反应体积对反应结果的影响．筛选并建立了适合于利桫椤RAPD扩增的反应体系：反应体积10μL，内含2ng/μL模板DNA，2．0mmo1/L MgCl2,0．3μmo1／L引物，300μmo1／L dNTP，0．5u Taq DNA聚合酶．     

梨ISSR-PCR反应体系的正交优化研究

以‘饼子梨’为试材,利用正交设计L16(45)研究了反应体系中引物、模板DNA浓度等5个因素4个水平对梨反应体系的影响,PCR结果应用极差分析和MINITAB软件对扩增结果进行方差分析.梨最佳ISSR-PCR反应体系:25μL反应体系中含2.5μL 10×Buffer,2.0mmol/L Mg2+,0.25mmol/L dNTPs,0.25μmol/L引物,60ng模板DNA,0.75UTaq DNA聚合酶.优化的ISSR-PCR反应体系稳定性高和重复性较好,为梨品种指纹图谱构建和遗传多样性分析奠定基础.     

欧洲甜樱桃RAPD反应体系的建立与优化

以欧洲甜樱桃萨米托品种为研究对象,利用改进的CTAB法提取基因组DNA,并通过单因素多水平梯度试验,筛选了模板、Mg2＋、TaqE、dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立了欧洲甜樱桃RAPD技术扩增体系．研究结果表明,在25出反应体系中,各组分最佳的浓度分别为：10×Buffer2．5μl,2．5mmol·L^-1Mg2＋2．5μl,Taq E0．06U·μl^-1,0．2mmol·L^-1dNTPs,0．2μmol·L^-1Primer,模板DNAl．2ng·μl^-1．PCR循环程序为：94℃预变性4min。94℃变性40s,36℃退火45s,72℃延伸1min,共36个循环,最后72℃延伸7min．     

水稻基因组DNA的RAPD扩增研究

通过对水稻RAPD反应条件比较研究,建立了对除草剂敏感致死水稻RAPD的最适反应体系和反应扩增程序,即在25μl反应体系中,含10 mM Tris-HCl(pH8.0),10 mM KCl,8 mM(NH4)2SO4,0.05%NP-40,2.0 mM MgCl2,0.1 mM(each)dTNPs,20 ng引物,20ng基因组DNA,1.5 U的Taq酶.反应扩增程序为:94℃变性2 min;扩增40个循环,每循环包括:94℃变性10 s,40℃退火30 s,72℃延伸1.5 min;最终延伸5 min.     

水稻基因组DNA的RAPD扩增研究

通过对水稻RAPD反应条件比较研究，建立了对除草剂敏感致死水稻RAPD的最适反应体系和反应扩增程序，即在25止反应体系中，含10mmol／LTris-HCl(pH8．0)，10mmol／LKCI，8mmol／L(NH4)2804，0．05％NP-40，2．0mmol／LMgCl2，0．1mmol／L(each)dTNPs，20ng引物，20ng基因组DNA，1．5U的Taq酶。反应扩增程序为：94℃变性2min；扩增40个循环，每循环包括：94℃变性10s，40℃退火30s，72℃延伸1．5min；最终延伸5min。     

采用正交设计和响应曲面设计法优化芦苇随机扩增多态DNA体系

采用正交设计和响应曲面设计(RSD)优化适合于芦苇[Phragmites australis (Cav.)Trin.ex steud]增多态DNA(RAPD)的反应体系,结果确定芦苇RAPD反应体系的最佳方案为：在PCR扩增程序,冷启动,94℃变性1min,36℃复性90s,72℃延伸2min,40个循环;72℃延伸7min,4℃保存;25μl反应体系包括模板DNA 60ng、三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)7．5mmol、Taq酶1．5u、引物5pmol。     

黄连基因组DNA提取与RAPD-PCR体系的正交优化研究

采用改进的SDS方法提取黄连基因组DNA,利用正交设计研究方法建立黄连RAPD分析的PCR反应体系,成功地进行了RAPD扩增,筛选出黄连RAPD的最佳方案为:25μL反应体系中包括dNTPs0.12mmol.L-1,引物0.2μmol.μL-1,模板DNA 40ng,Taq酶1U,Mg2+2mmol.L-1,10×buffer缓冲液2.5μL,其余部分用无菌超纯水补平.PCR扩增循环为95℃3m in,38℃1m in,72℃2m in 1次循环;94℃1m in,38℃1m in,72℃2m in,45次循环,最后72℃延伸10m in.     

苔藓植物RAPD应体系的建立及遗传多样性分析

以多枝青藓为材料优化RAPD反应条件,在此基础上对11种苔藓植物进行遗传多样性分析.结果表明:苔藓植物RAPD反应(25μl体系)的最佳条件为,Taq酶,1.0U;Mg2+浓度,2.0 mmol/L;dNTP浓度,0.2 mmol/L;模板DNA,60 ng;引物浓度,10 pmol.用40条引物进行扩增筛选,有6条引物扩增条带清晰,重复性好,共扩增出77条带.通过SPSS11.5分析软件对扩增结果进行聚类分析,结果与形态学分类基本一致,说明RAPD技术可用于苔藓植物的遗传多样性研究.     

唐菖蒲RAPD分析体系的优化研究

本文采用L9(34)正交试验设计 ,快速、有效地确定了适合唐菖蒲的最佳扩增条件 (包括对dNTP、引物、Mg2 、TaqDNA聚合酶等浓度的最佳组合 )。并通过试验确定了省时的RAPD—PCR反应程序。最终得到了一个较理想的唐菖蒲RAPD技术体系     

核桃DNA的提取及RAPD体系的优化

采用CTAB法和改进的CTAB法，从叶片中提取核桃基因组DNA，比较其分离效果，结果表明：改进的CTAB法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染，并以此为模板进行RAPD反应，对RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验，建立适合于核桃的RAPD-PCR反应体系，以进行该树种的分子标记研究。