猪口蹄病毒VP1活性肽融合蛋白的纯化

在猪口蹄疫病毒活性肽ＶＰ１融合蛋白基因工程菌Ｅ．ｃｏｌｉＣ５００构建成功的基础上，确定了融合蛋白的分子质量约为７１．０ｋｕ。     

异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂的优化筛选

利用噬菌体肽库筛选与计算机模拟分子对接技术, 优化异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂的筛选. 先通过噬菌体肽库筛选出与异柠檬酸裂解酶（ICL）具有高亲和力的结合肽, 再利用Discovery Studio 2.1模拟多肽与ICL蛋白晶体（1F8I）的分子对接, 最后用Fmoc固相合成法合成多肽, 并对其生物活性进行检测. 实验结果表明, 通过噬菌体肽库筛选得到了29条七肽序列, 其中12条可与ICL蛋白晶体成功对接. 体外生物活性检测结果显示, 得到的12条七肽均对ICL的活性有明显抑制作用（抑制率均超过50%）.     

尿激酶短肽抑制剂的初步研究

以尿激酶为目标蛋白, 在噬菌体表面展示六肽库中对尿激酶的短肽类抑制剂进行了三轮特异性筛选. 提高噬菌体与尿激酶的比例及缩短作用时间从而提高筛选压力后, 与尿激酶亲和结合的噬菌体得到富集. 通过对第三轮筛选到的重组噬菌体的DNA序列分析, 获得一组相对保守的肽序列. 相应的合成短肽 NEPKAN 和VSPKVL 对尿激酶的抑制常数分别为32.5 μmol/L和88.6 μmol/L.     

新城疫病毒中国标准强毒F48E8株融合蛋白的结构

对新城疫病毒（ＮＤＶ）中国标准强毒Ｆ４８Ｅ８株融合蛋白的结构进行了分析。该融合蛋白的前体Ｆ０由５５３个氨基酸组成，在第１１６和１１７位氨基酸处被酶切成Ｆ１和Ｆ２亚单位。酶切激活部位序列为ＲＲＱＲＲ↓Ｆ，第１１７位氨基酸为Ｆ，具有ＮＤＶ强毒的特征，Ｆ０上有３个疏水区，其功能分别代表信号肽区、融合诱导区和跨膜结构区。Ｆ０的可糖基化部位有６个，并比较了Ｆ４８Ｅ８株和国外强毒株的氨基酸同源性，与Ｍｉｙａｄ     

米糠蛋白肽酸奶的研制

以奶粉为原料,添加自制米糠蛋白肽,对米糠蛋白肽添加阶段、甜味剂筛选、稳定剂复合、酸奶发酵工艺等进行了探讨,开发了具有营养保健功效的、口感纯正的发酵型米糠蛋白肽酸奶.结果表明,在巴氏杀菌后添加米糠肽液,制备出的酸奶品质较好;复合稳定剂为黄原胶、果胶、海藻酸钠,最佳配比2∶3∶1;米糠蛋白肽酸奶的最佳工艺:奶粉添加量12.0％,肽液添加量4.0％,木糖醇添加量7.0％,复合稳定剂添加量0.1％,接菌量5.0％,发酵时间5h,发酵温度42℃,可制得优质米糠蛋白肽酸奶成品.     

基于小热休克蛋白-细胞穿膜肽蛋白纳米粒的siRNA递送系统

利用大肠杆菌表达系统原核表达并纯化小热休克蛋白-细胞穿膜肽融合蛋白(Hsp-Tat);用动态光散射和透射电镜成像分析Hsp-Tat纳米粒的粒径和形貌;用噻唑蓝(MTT)法和活/死细胞染色法研究蛋白纳米粒的细胞相容性;用凝胶阻滞实验检测纳米粒的小干扰RNA(siRNA)复合特性;用激光共聚焦荧光显微镜成像研究蛋白纳米粒的...     

异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂结构的修饰

利用Fmoc固相多肽合成法, 按已知异柠檬酸裂解酶抑制剂的直链肽氨基酸序列合成首尾相连的环肽抑制剂. 经色谱纯化和质谱鉴定, 其相对分子质量的实测值与理论值相符. 抑制率实验结果表明, 合成的环肽对异柠檬酸裂解酶有明显抑制作用, 抑制率大于50%. 采用高效液相色谱法分别检测直链肽和环肽在血浆中的半衰期, 实验
结果表明, 环肽在血浆中的半衰期为11 min, 比直链肽的半衰期延长175%.     

米糠蛋白活性肽的制备工艺研究

初步研究酶法水解米糠蛋白制备米糠活性肽的工艺条件,同时探讨了不同料液比、pH值、温度和提取时间对蛋白水解率的影响.通过正交优化实验得出酶水解米糠蛋白的最佳条件是:酶解温度37℃,加酶量为0.5%,酶解时间是3h,酶解pH值为9.结果表明碱性蛋白酶酶解法和三氯乙酸酸溶法相结合,是一种很理想又有效的制备蛋白肽的方法.     

吲哚类微管蛋白秋水仙碱结合位点抑制剂的研究进展

癌症威胁着人类健康和生命,开发安全有效的抗肿瘤药物尤为重要.由α-微管蛋白(α-tubulin)与β-微管蛋白(β-tubulin)组装而成的微管是细胞内骨架的主要构成部分,在维持细胞形状、有丝分裂和运动中起着关键作用,是抗肿瘤药物研发的重要靶点之一.本文就吲哚类微管蛋白聚集抑制剂的研究进展进行分类、归纳并总结,期望为...     

一种新型天蚕素杂合肽AD和aFGF突变体融合蛋白S的构建及表达

目的：构建和表达一种带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD和人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)突变体的融合蛋白S,在创伤皮肤表面应用时能自动裂解成有抗感染功能的天蚕素杂合肽AD和皮肤修复功能的aFGF突变体。方法：利用P(R技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD基因和aFGF突变体基因。再利用两作为模板,用PCR方法扩增出编码融合蛋白S的DNA。将该DNA片段插入到载体pPICZaA中,并利用电转法将质粒转入毕赤酵母smd1168中,Zeocin抗性筛选重组转化子。甲醇诱导72h,SDS-PAGE电泳检测融合蛋白S的表达,并用Western-blot杂交检测融合蛋白S的免疫原性。结果：筛选出的重组转化株在甲醇诱导后能表达相对分子质量约为19000的融合蛋白S,而该蛋白能与aFGF抗体产生免疫反应。结论：用PCR方法获得编码含凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD和aFGF突变体的融合蛋白SDNA,并在毕赤酵母中实现了表达。     

利用噬菌体展示筛选结合水稻条叶枯病毒S蛋白的短肽

利用噬菌体展示技术在随机7肽库中筛选到结合水稻条叶枯病毒（rice stripe virus ,RSV）病害特异蛋白（stripe disease-specific protein,S蛋白）的6个短肽,并进行了序列测定,ELISA结果表明,6个短肽和S蛋白具有一定的亲和能力,筛选到的短肽对今后S蛋白功能分析、转基因抗RSV和水稻条叶枯病的诊断提供了条件。     

肽泡的形态特征及其成膜蛋白的特性

小麦(Triticum aestivum)贮存蛋白经过纯化获得其中35kD一种蛋白质。该蛋白质在一定浓度的有机溶剂系统中经过超声波处理或搅拌,可以制成囊泡,并能包裹分子量从0.4～150kD的不同化合物(染料及抗体)。这种肽泡具有良好的稳定性,经低温冷冻干燥后,可成鳞片状,加水后复溶仍然保持肽泡的稳定性。这种特性称为DRV(Dehydration Rehydration Vesicles)性质。该蛋白质经修饰制定肽泡能包裹水溶性化合物,如水溶性染料,或不经修饰可包裹脂溶性化合物。这种蛋白质是由16种疏水性氨基酸残基组成,其N-末端为苯丙氨酸。     

融合蛋白链间连接肽的优化设计探讨

以单链抗体为元件构建的基因工程双价抗体分子在肿瘤的治疗方面显示出良好的应用前景,但融合蛋白的亲和性及抗肿瘤活性分别较衍生因子的功能及活性有所变化．合适的链间连接肽（Linker）可以赋予单链双特异性抗体更适于临床应用需求的生物学活性,如何优化选择或设计Linker则成为构建单链双特异性抗体的关键步骤．在对影响融合蛋白亲和性及抗肿瘤活性的主要因素进行分析的基础上,文中提出采用生物信息学方法,同源模建后分析衍生因子的构效关系、衍生因子分子之间相互影响的空间位置关系,并综合考虑影响融合蛋白生物学活性的相关因素,尝试运用改进的遗传算法进行Linker的优化设计．对未来的研究工作进行了展望．     

基于遗传算法的RR抑制剂的二维定量构效关系研究

利用遗传算法,结合多元线性回归和交叉验证方法,对一系列Schiff碱类核糖核苷酸还原酶抑制剂作了二维定量构效关系的研究.计算得到了一组效果较好的定量构效关系模型(R2、Rcv2最高分别可达0.909和0.883).模型不仅具有良好的回归能力,而且还具有良好的预测能力.同时,通过分析在遗传优化过程中分子参数出现的频度,还得到了可能对活性影响较大的几个重要分子参数,它们分别是水/辛醇分配系数(ALogP98)、指示因子(Ⅰ)以及电性拓扑态指数(S_sOH).对该类抑制剂的设计和改造提供了指导.     

耶尔森菌外膜蛋白H酪氨酸磷酸酶中药抑制剂的筛选

以大肠杆菌为宿主, 将含有蛋白质酪氨酸磷酸酶YopH催化结构域(ΔYopH)的质粒转入其中, 高效表达了ΔYopH. 分离纯化后, 以ΔYopH为靶标, 应用体外酶促反应动力学实验, 研究111种中药水提液的抑制效果, 筛选出对ΔYopH有明显抑制作用的五倍子、 石榴皮和地榆, 并进一步研究其半数抑制浓度（IC₅₀值）及抑制类型.     

酶解牦牛乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

目的:乳清蛋白是牦牛乳中的重要成分,其经酶解制备的乳源性ACE抑制肽以安全性高和无副作用等优点在高血压的防治中具有重要的研究和应用价值.本实验研究利用乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺技术.方法:本实验对从耗牛乳中提取的乳清蛋白,分别根据碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶各自的最适pH及温度,采用酶解法制备ACE抑制肽,以ACE抑制活性为指标初步筛选出最佳水解酶,并探究最佳酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳反应条件.结果:碱性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳水解酶,英最佳反应条件为:pH8.5、温度60℃、E/S为5.5％、水解6h.制备的ACE抑制肽抑制率可达到85.2％.结论:碱性蛋白酶为最佳酶选,用碱性蛋白酶制备的ACE抑制肽体外抑制率较高,符合工业生产要求.这为进一步优化乳清蛋白降血压肽的制备工艺提供依据.     

新城疫病毒F 蛋白七肽重复序列（HR）三螺旋HR212蛋白的抗体抑制病毒和细胞融合

膜融合是囊膜病毒侵染过程中的一个关键步骤,新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)中两个高度保守的七肽重复序列—HR1和HR2是病毒膜融合过程中的重要功能结构域,在膜融合不同时期表现出不同的构象,因此可能是产生中和抗体反应的潜在的靶目标．作者曾发现HR2多肽和稳定的三螺旋蛋白HR2-HR1-HR2(HR212)能够抑制新城疫病毒(NDV)与细胞的融合．文中证实HR212蛋白在家兔中能引发很强的免疫反应,所产生的抗体可识别HR1和HR2多肽序列,并能抑制NDV和鸡红细胞的血凝反应,以及抑制病毒和细胞的融合．研究结果说明NDV HR212复合体在作为病毒和细胞融合的抑制物的同时,所产生的抗体也可以阻断病毒的侵染．     

α-synuclein蛋白与A-β肽和β-synuclein蛋白相互作用位点的预测

α-synuclein蛋白的异常聚集是引起帕金森病的重要因素.实验研究发现,α-synuclein蛋白能与多个蛋白相互作用.在相互作用的蛋白质中,有的可以促进α-synuclein的异常聚集,如A-β肽;有的可以抑制α-synuclein的异常聚集,如β-synuclein蛋白,但促进或抑制α-synuclein异常聚集的机理并不明确.利用SYBYL和AUTODOK软件模拟α-synuclein蛋白与A-β肽和β-synuclein的相互作用,找到其相互作用位点,为进一步研究α-synuclein蛋白的异常聚集提供理论依据.     

基于遗传算法优化的BP神经网络的PEMFC动态特性仿真研究

针对一辆小型燃料电池电动车的2 kW质子交换膜燃料电池(PEMFC)动力系统,利用遗传算法优化的BP神经网络建立其电压输出特性模型,将PEMFC部分实测数据作为遗传算法优化的BP神经网络的训练样本对其进行训练,利用训练好的神经网络对电堆电压输出特性进行预测,并与实验数据进行对比,结果显示:网络预测的输出电压与实测输出电压之间的最大相对误差均保持在4;之内.     

重组人干扰素内皮抑制肽融合蛋白抗肿瘤药效的研究

目的 考察融合蛋白I30肽抗肿瘤的效果,为I30肽后续开发提供实验支持。方法 使用NIH小鼠,取4只小鼠腹腔注射H22瘤株,1周时处死所有小鼠,取腹水。另取40只小鼠,每只腋下注射腹水0.2 mL,细胞浓度为1×106个/mL。接种后4 h开始给药。将腋下注射小鼠随机分为4组:IFN组,皮下注射干扰素9×105IU/只;I30高剂量组,皮下注射I30 80 μg/只;I30低剂量组,皮下注射I30 30 μg/只;阴性对照组,皮下注射等体积生理盐水。连续给药16 d。停药后2 h,处死所有动物,再解剖皮下瘤块称重。结果 I30给药组具有明显的治疗效果,且具有显著性差异(P<0.05)。结论 I30肽具有抗肿瘤的作用。