氨基酸碘业已实现虾病可治的突破--访惠州市营养医学研究所曾雄飞所长

本刊2003年第5期(总118期),以“病毒的强力杀手氨基酸碘在广东研制成功”为题,公布了我省化学家曾雄飞在资金奇缺的条件下,经过十年的艰苦攻关所取得的发明成果。在我国已经持续了十年的病毒性虾病由曾所长攻克,而去年爆发的非典型肺炎(SARS),今年爆发的禽流感,都是病毒病。因此,本刊记者目前就病毒病的防治问题再访惠州市营养医学研究所曾雄飞所长(以下简称“曾”)。     

广东:创新的沃土——访共和国科技奇才曾雄飞

曾雄飞,1994年从国防战线退休后,于1997年回到家乡惠州,自筹资金创办惠州市三宝生物化学科技有限公司.荣归故里,曾老未曾半刻赋闲:瞄准地方需要,继续跟踪始于1993年爆发的对虾病毒病,历时十年攻关,终于获得了虾病可防可治的成功,发明了可同时高效杀灭病毒、致病菌和滴虫的氨基酸碘络合物,取得了中国和美国的发明专利权,取得了农业部颁发的新兽药证书和批准文号,写出了深受养虾业界欢迎的专著<营养医学在病毒性虾病中的应用研究--虾病十年启示录>.     

AsiaⅠ型口蹄疫病毒基因工程多肽疫苗的构建及其免疫原性分析

为了构建Asia Ⅰ型口蹄疫病毒多肽疫苗,用反转录PCR方法扩增VPI基因并测得该基因的核苷酸序列．将VPI（133AA-163AA）、VP2（1AA～33AA）抗原表位基因分别与卢一半乳糖苷酶基因（简称LacZ＇）3’末端相连构建表达质粒LacZ’-VIP和LacZ’-VP2．化学合成VP1（133AA～163AA）-VP2（1AA～33AA）-VPl（133AA～163AA）串联重复抗原表位DNA,然后分别连接在β-半乳糖苷酶基因和IgG重链恒定区基因的3’末端,构建两种重组表达质粒LacZ’-VPl（133AA--163AA）-VP）2（1AA～33AA）-VP1（133AA-163AA）（命名为pTl）和IgGvPl（133AA～163AA）-VP2（1AA～33AA）-VPl（133AA-163AA）（命名为pT2）．通过Westernblot、血清中和抗体效价测定、T细胞增殖反应及豚鼠抗病毒保护实验分析所构建疫苗的免疫原性及有效性．结果显示pT1、pT2表达的融合蛋白能够诱发豚鼠产生较高的中和抗体及刺激豚鼠T细胞增殖．pT1、pT2两种融合蛋白分别2次免疫豚鼠后,100％的豚鼠能抵抗100 ID50 AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻击．pT2融合蛋白1次免疫豚鼠后70％的豚鼠能抵抗100 ID50 AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻击．     

走中国特色的新药发明之路--从上海抗过敏新药看广东氨基酸碘发明,本刊再访曾雄飞

通过对虾病的系统而深入的研究,曾雄飞提出营养医学、营养素药物新概念,发明了第一个营养素药物:氨基酸碘.其目的除了这个顽固的病毒性虾病外,还瞄准了艾滋病这个恶魔.     

导电性聚席夫碱的研究——Ⅳ.碘掺杂含硫聚席夫碱的反应机理

通过XPS和FT-IR测试分析,探索了碘掺杂含硫聚席夫碱过程的反应机理,确定了含硫聚席夫碱-碘CT络合物的电子供受关系及其结构。结果表明,聚合物经过碘掺杂后,形成CT络合物而使导电性增加,聚合物中的氮原子供出电子形成=(?)—及=(?)=结构,而掺杂剂碘接受电子形成Ⅰ~-、Ⅰ_3~-和Ⅰ_5~-。CT络合物经二甲胺水溶液脱掺杂后,聚合物可基本回复到其起始态。     

西西里病毒抑制Ⅰ型干扰素的产生机制

西西里病毒属布尼亚病毒科白蛉病毒属.在病毒感染机体过程中,病毒非结构蛋白可特异性靶向细胞内相关因子,阻断或抑制宿主天然免疫信号通路的激活.利用双报告基因检测系统,发现西西里病毒非结构蛋白可抑制Ⅰ型干扰素的产生,通过免疫共沉淀分析,证实该现象不依赖于TBK1,并首次发现了西西里病毒非结构蛋白通过蛋白酶体依赖的途径降解宿主相关因子,进而抑制Ⅰ型干扰素表达这一机制.这一结果为更好地了解西西里病毒致病机理及相关治疗药物的研发提供了理论支持.     

水稻病毒病虫媒传染的研究

总结讨论本研究是关于日本发生的4种水稻病毒病,从传染病学的立场出发,分别对虫的传毒、病毒的寄主植物、稻的感染与发病、病毒的越冬等问题进行实验,探明病毒的侵染途径。4种病毒的共同点是病毒由特定虫传染。为此,特别对虫的传染力进行了详细的实验。这里,比较4种病毒病作进一步的讨论。     

以寨卡病毒NS3解旋酶为靶点的海洋天然产物库的虚拟筛选与成药性评价

寨卡病毒病自2015年在巴西等南美洲国家爆发后,已成为影响全球公共卫生的重大问题,但至今仍无可用于治疗该病的获批特效药.运用基于结构的药物虚拟筛选技术,以寨卡病毒NS3解旋酶的2个最新报道的结合位点为口袋,通过海洋天然产物库进行分子对接,初步得到divanchrobactin、bromophenol、2-hydroxy-1′-methylzeatin、garveatin E、aromatic polyketides、dimeric terrestrols等10个化合物,它们能很好地靶向寨卡病毒NS3解旋酶,从而可能成为对寨卡病毒病具有潜在治疗作用的海洋天然产物.同时,利用薛定谔软件套装中的ADMET预测模块对结合较好的化合物展开初步的成药性评价,发现除Divanchrobactin有较严重的成药性问题外,其他化合物均满足药物开发的基本要求,这为后期的实验研究提供了理论基础.     

生物信息学及其在病毒研究中的应用

介绍生物信息学的原理与方法及其在病毒研究中的应用。保守序列承担着极其重要的功能，通过多重序列对齐搜寻保守序列，是生物信息学方法的基础；敏感位点是一种反映蛋白质或核酸功能的特定模式，因此，通过数量关系的优化推导敏感位点，可用于分离病毒蛋白质与核酸相互作用位点；核苷酸和氨基酸序列只有形成了三级或四级结构才能表现功能，通过同源建模预测蛋白质的高级结构，有助于疫苗的研制、抗病毒药物的筛选以及药物的分子设计。预测RNA的三级结构大多从RNA折叠入手．病毒蛋白质三级结构预测比较成功的是日本脑炎病毒包膜糖蛋白的三级结构。     

利用弱病毒防除作物病毒病

植物的病毒病不论过去还是现在,都是属于一种难治的病害。以往通常采用切断传染联来行进防治,不仅方法繁琐,而且效果甚少。至今较能奏效的防治措施还是采用抗病品种,但是,目前能在生产上应用的品种却很少。为此,利用弱病毒防治作物病毒病的研究日益发展,其中,尤其是利用弱病毒来防治番茄的病毒病已经在生产中取得了实效。     

马铃薯卷叶病毒RT-PCR-RFLP的检测分析

马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)是马铃薯生产上的主要病毒病原之一,侵染马铃薯后,造成减产和品质退化.采自云南、内蒙古和贵州的马铃薯样品经过DAS-ELISA检测为PLRV阳性,经RT-PCR扩增出约350 bp的DNA片段表明感染了马铃薯卷叶病毒.进一步用HaeⅢ和StuⅠ限制性内切酶对马铃薯卷叶病毒的RT-PCR产物进行Restriction fragment length polymorphism (RFLP)分析,RFLP图谱与预期图谱相符.证实RT-PCR-RFLP方法是1种快速、准确的检测方法.     

中西医综合治疗肠炎型犬细小病毒病

犬细小病毒病感染又称为犬传染性出血性肠炎,是由犬细小病毒属的DNA型病毒引起犬的一种急性传染病。临床表现为肠炎型和心肌型两种类型,但以肠炎型细小病毒病更为常见。一般情况下,对肠炎型细小病毒病多数兽医工作者常采用单一的西医治疗,治疗效月龄30例,1～2岁29例,2岁以上10例,治愈127例,治愈率达91.36%,取得了理想的治疗效果。     

水稻白叶枯病菌luxR同源基因的克隆和表达

luxR基因是革兰氏阴性菌感应反应（Quorum Sensing,QS）LuxR／Luxl环路中起重要作用的基因．从水稻白叶枯病菌中分离到一个luxR同源基因,命名为xooR．xooR全长765bp,编码一个由254个氨基酸残基组成的转录因子,分子质量和等电点分别为28．3ku和8．72．XooR蛋白的N一端15AA-171AA是一个Autoindbind结构域,C-端191AA-245AA是一个HTH（helix-turn-helix）结合DNA结构域利用原核表达载体pET-24a（＋）和gfp基因构建融合蛋白表达系统,Western blot分析表明XooR-GFP融合蛋白大小为54ku,xooR基因成功地在E．coliB1．21中实现了表达．     

碘的氧化电位溶出法测定

在有过量的Cu(Ⅱ)存在时,将痕量的碘离子Ⅰ~-以难溶化合物CuⅠ形式电沉积在汞膜电极上,然后以Fe(Ⅲ)或Hg(Ⅱ)为氧化剂进行氧化电位溶出法测定,可检出1.0×10~(-10)M的Ⅰ~-。用此法测得紫菜中碘的含量为3.3％(g/g),与分光光度法结果一致。     

A型口蹄疫病毒VP1免疫活性肽基因串联片段的化学合成及克隆与表达

A型口蹄疫病毒（FMDV）VP1蛋白的141～160和200～213位氨基酸序列是决定FMDV免疫原性的抗原决定簇片断．人工合成一个免疫活性肽基因的串连片段（20AA－14AA-20AA）、全部选用大肠杆菌偏爱密码子．在5’端带有EcoR1位点和一个起始密码子ATG，在3’端带有BamH1位点和一个终止密码子TGA．利用这两个酶切位点把该基因连接到pWR590质粒上．并筛选高表达的菌株．结果表明该融合蛋白在大肠杆菌JM101中能高表达．经斑点ELISA实验证明．大肠杆菌细胞中表达的融合蛋白有A型FMDV抗原活性．     

埃博拉病毒感染的实验室诊断方法研究进展

 埃博拉病毒病是由埃博拉病毒引起的一种急性出血性传染病,具有极高的传染性,病死率高达90%,世界卫生组织已将埃博拉病毒列为对人类危害最严重的病毒之一,目前虽有一个被美国食品和药物管理局(FDA)批准用于紧急治疗的实验药物TKM-Ebola,但尚无批准上市的用于预防埃博拉病毒的疫苗.建立快速、准确、简便的实验室检测方法对及时进行临床诊断救治、开展流行病学调查并最终控制其传播流行具有重要意义.本文综述埃博拉病毒实验室检测方法的原理、应用及进展,介绍病毒分离、电子显微镜观察、逆转录聚合酶链反应法、抗原检测试验、抗体酶联免疫吸附试验、血清中和试验及其他检测方法.     

肌二磷(5’—IDP)和胞二磷(5’—CDP)的化学合成

肌二磷和胞二磷是生物化学和医学研究中的重要试剂,是合成多聚核苷酸的原料。多聚肌苷酸和多聚胞苷酸的双链(poly I:C)为防治一些病毒病及肿瘤的有前途的合成药物,它可能导致机体产生一种“干扰素”的蛋白质,或通过其他途径,对病毒及肿瘤产生影响,从而可能达到防治有关疾病的功能。     

常规RT-PCR快速检测诺如病毒方法的建立

目的建立一种可同时检测GⅠ、GⅡ型诺如病毒(Norovirus,NOV)的常规RT-PCR方法.方法针对GⅠ、GⅡ型诺如病毒RdRp区域的基因进行引物设计,优化PCR反应体系及条件,评价该方法的灵敏度、特异度.结果该引物对诺如病毒的特异度强,同一体系内的GⅠ、GⅡ型诺如病毒相互之间无干扰,与轮状病毒、星状病毒、肠道腺病毒、甲型肝炎病毒同时检测无交叉反应;对GⅠ、GⅡ型诺如病毒核酸的最低检测限值是10~3拷贝/μL.结论本研究建立常规RT-PCR检测方法对GⅠ、GⅡ型诺如病毒进行快速检测,具有很好的灵敏度和特异性.     

靶向SARS-CoV-2的纳米抗体研究进展

席卷全球的新型冠状病毒病(corona virus disease 2019,COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的,SARS-CoV-2是继严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus, SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(middle east respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)后人类发现的第三种引起全球大流行的冠状病毒.刺突蛋白(spike protein, S)的受体结合域(receptor binding domain, RBD)可以与细胞表面的血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme2,ACE2)结合,进而入侵细胞内部,启动病毒的复制.为了预防和治疗新冠病毒肺炎,研究人员研发了多种疫苗、小分子药物及抗体药物.纳米抗体(nanobodies, Nbs)是可识别抗原的最小结...     

近十年中国新城疫病毒F蛋白氨基酸变异分析

为了研究近十年来中国发现的新城疫毒株的致病性,我们选取2000—2011年间在中国发现的主要为Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ5种基因型的NDV,对其F蛋白氨基酸变异情况进行了分析．结果表明：中国的新城疫病毒的不同基因型的F蛋白氨基酸均出现了不同的变异,不同基因型相同的位点也发生了变异,这些变异造成新城疫病毒的爆发流行．因此,本文为研究NDVF蛋白与其致病性的关系提供了理论依据．