自主性细小病毒非结构蛋白NS1对转化细胞的毒性及其调控DNA复制和转录的机制

自主性细小病毒具有对转化细胞专一的毒性,它的非结构蛋白ＮＳ１在其中起着重要的作用．在病毒生活周期中ＮＳ１有着多种功能,包括调控ＤＮＡ 的复制和转录．其机制包括ＮＳ１对ＤＮＡ 复制的反式抑制、对基因表达的反式抑制和对转录的反式激活     

一种非洲番茄黄化曲叶病毒DNA的克隆

用ＰＣＲ获得了非洲塞内加尔番茄黄化曲叶病毒（ＴＹＬＣＶ－ＳＥＮ）的全长ＤＮＡＡ，并进行了克隆和部分序列分析，ＤＮＡ序列分析的序列并１３５９ｂｐ，包括外壳蛋白基因，ＡＶ１基因，基因间区（ＩＲ）及部分复制酶基因，计算机分析显示：ＴＹＬＣＶ－ＳＥＮ与其他亚组ＩＩＩ及生理病毒相比，外壳蛋白氨基酸同源性为６７％～８３．４％，ＡＶ１基物氨基酸同源性为６１％～８４％，ＩＲ最大同源性为６０％～６８％，且与非洲和中     

人肿瘤细胞株中细小病毒H—1的DNA扩增与非结构蛋白NS—1基因的表达

研究三株人癌细胞和两株对照细胞对细小病毒Ｈ－１杀伤作用敏感性的分子机制．表明了在感染复数ｍｏｉ（ｍｕｌｔｉｐｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）为５ｐｆｕ（ｐｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）／细胞的情况下，作为Ｈ—１病毒复制受纳细胞的人肝癌细胞株ＯＧＹ－７７０３和人胃癌细胞株ＳＧＣ—７９０１，能够支持病毒ＤＮＡ扩增和非结构蛋白ＮＳ—１基因的表达，这和作为阳性对照的由ＳＶ４０转化的新生儿肾细胞株ＮＢ—Ｋ一样，但对Ｈ—１病毒感染有抗性的人肾癌细胞株ＯＵＲ—１０和它的对照人胎肾细胞株ＨｕＫ—１，并不支持病毒ＤＮＡ扩增和ＮＳ—１蛋白的表达．本文结果指出，细小病毒Ｈ—１的杀伤作用与细胞中的病毒ＤＮＡ扩增及ＮＳ—１基因表达的程度相关．     

模板甲基化水平对鼠肝RNA聚合酶体外转录活性…

利用＾３Ｈ－ＵＴＰ同位素参入法，研究了大鼠肝细胞ＲＮＡ聚合酶在核内外的转录活性。结果表明：在细胞核内的转录活性明显低于在无核抽提物中的转录活性。利用自身的ＤＮ模板，优于利用外加的ＤＮＡ模板。并比较了没ＤＮＡ甲基化水平的模板对ＲＮＡ聚合酶体外转录活性的影响。发现模板的甲基化水平与其体外转录水平呈反相关。     

人肿瘤细胞株中细小病毒H—1的DNA扩增与非结构蛋白NS—1基因…

研究三株人癌细胞和两株对照细胞对细小病毒Ｈ－１杀伤作用第三性的分子机制，表明了感染复ｍｏｉ（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）为５ｐｆｕ（ｐｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）／细胞的情况下，作为Ｈ－１病毒复制受纲细胞的人癌细胞株ＱＧＹ－７７０３和人胃癌细胞株ＳＧＣ－７９０１，能够支持病毒ＤＮＡ扩增和非结构蛋白ＮＳ－１基因的表达，这和作为阳性对照的由ＳＶ４０转化的新生儿肾细胞株ＮＢ－Ｋ     

反义多聚TAR对人免疫缺陷病毒I型TAT蛋白…

以ＨＩＶ－１ＴＡＲ的ＰＣＲ引物为自身模板，用ＰＣＲ法直接扩增得到多拷贝的ＴＡＲＤＮＡ同向串连体；构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲ片段为启动子，含有４．８和１５个拷贝的ＴＡＲＤＮＡ反主表达质粒；以荧光素酶基因为报告基因，检测了瞬时共转染体系中不同拷贝数的反义ＴＡＲＤＮＡ转录产和对Ｔａｔ反式激活作用的抑制作用，结果表明，反义多聚ＴＡＲＲＮＡ对Ｔａｔ自古以来生具有很强的抑制作用，其抑制程度与反义ＴＡＲ中联体的     

河南西峡恐龙18srDNA片段质颖

按照ｒＤＮＡ的结构特点，将ＤＡ１８Ｓ１，７与其他８种生物的ｒＤＮＡ序列进行排列比较，结果表明这２上序列不是恐龙ｒＤＮＡ片段ＤＡ１８Ｓ７看来更接近一种植物ｒＤＮＡ片段，而ＤＡ１８Ｓ１与２种参与比较的真菌ｒＤＮＡ序列有很高的同源性，它们与脊椎动物ｒＤＮＡ的同源性分别只在６７．８％－７４．１％之间。     

维甲酸激活表达的人肺腺癌细胞分化相关基因的筛选

通过对维甲酸诱导的人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２ ｃＤＮＡ消减文库的筛选，获得２个特异存在于维甲酸诱导１天ｃＤＮＡ文库中的ｃＤＮＡ片段ＲＡ９７及ＲＡ１０７，测序后与最新ＧｅｎＢａｎｋ提供的序列比较，ＲＡ９７与人２２号染色体臂１３区ＰＡＣ４０８Ｎ２３同源性很强，其中一段与ＰＡＣ４０８Ｎ２３完全同源，此片段与可能的肿瘤抑制基因ＳＮＣ６同源性也相当强，其中一段与ＳＮＣ６完全同源，提示这一ｃＤＮＡ片段可能与肿瘤     

论“SDNA位移”

提出了“ＤＮＡ复制新假说”，并以此假说分析基因交换、转位、外源基因插入及染色体易位、重复、倒位、缺失等遗传性变异，即“ＳＤＮＡ位移”．认为这些遗传性变异具有相同的发生机理，且发生于ＤＮＡ复制后期．     

抗－DNA免疫复合物性质的研究

用聚乙二醇（ＰＥＧ）和硫酸铵从系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血清中分离出免疫复合物（ＩＣ）和血浆核酸（ＰＮＡ）。分析结果表明，ＰＮＡ的主要成分是ＲＮＡ，仅有少量ＤＮＡ存在，并且ＰＮＡ中ＤＮＡ的ｄＧ＋ｄＣ含量（５５％）明显高于正常值（４２％）。一旦经过ＲＮａｓｅ处理，ＰＮＡ抑制抗－ＤＮＡ抗体结合ＤＮＡ的能力降低，说明抗－ＤＮＡ抗体和ＲＮＡ有交叉反应。动力学研究观察到，抗－ＤＮＡ免疫复合物中抗原抗体的分子比是１：１，结合能为３７ｋＪ／ｍｏｌ。这提示，除ＤＮＡ／抗－ＤＮＡ外，其他抗－ＤＮＡ免疫复合物也可能同ＳＬＥ患者的组织损伤有关。     

Y^3＋,Sm^3＋,La^3＋离子对DNA热变性的影响

报道了小牛胸腺ＤＮＡ黄盐与Ｙ＾３＋，Ｓｍ＾３＋，Ｌａ＾３＋离子分别在摩尔比为１：０．５，１：１，１：２，１：４时，熔解温度ｔｍ的变化，实验结果表明，此３种稀土离子对ＤＮＡ的ｔｍ影响表现为：在低浓度时ｔｍ变化不大，当摩尔比为２．０以上时，ｔｍ明显降低３种离子使小牛胸腺ＤＮＡ的ｔｍ下降的趋势为：Ｓｍ＾３＋〉Ｌａ＾３＋〉Ｙ＾３＋，此外，还发现Ｌａ＾３＋对ＤＮＡ的双螺旋结构影响与其它稀土离子相异。     

在SDS存在下以利凡诺为荧光探针测定DNA

建立了在ＳＤＳ存在下, 以利凡诺（ＲＶＮ） 为荧光探针测定ＤＮＡ 的新方法． 在适量ＳＤＳ存在下, ＲＶＮ 的荧光被强烈地猝灭直至最低值． 但于上述ＲＶＮ－ ＳＤＳ体系中加入ＤＮＡ 后, 体系的荧光强度增强, 且荧光光谱发生移动． 在一定条件下, 荧光强度增强值与加入ＤＮＡ 的量在一定浓度范围内呈现良好的线性关系．     

小菜蛾颗粒体病毒DNA限制性酶切分析及基因组DNA片段克隆

小菜蛾颗粒体病毒ＤＮＡ用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ酶切，经０．７５％琼脂糖凝胶电泳，分别得到１２条带和８条带，平均分子量为１１３．０ｋｂ。用Ｓｕｐｅｒｃｏｓ１ Ｃｏｓｍｉｄ作载体，将Ｓａｕ３ＡＩ部分消化的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ随机片段插入该载体的ＢａｍＨＩ酶切位点，转化于ＸＬ１－Ｂｌｕｅ受体菌，经Ａｍｐ平板筛选转子，挑出２５６个Ａｍｐ＾＋菌落，以＾３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的ＰｘＧＶ－ＤＡＮ为探针，斑点杂交筛选得到     

人血清中真核复制起始区DNA（Ors12DNA）结合蛋白的鉴定和纯化

利用含有真核细胞复制起始区（ＯｒｉｇｉｎｏｆＤＮＡＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）的Ｏｒｓ１２ＤＮＡ作为探针，检测了人血清中与Ｏｒｓ１２ＤＮＡ特异结合的蛋白质。凝胶电泳迁移率改变实验表明人血清中存在特异Ｏｒｓ１２ＤＮＡ结合蛋白。实验还对影响Ｏｒｓ１２ＤＮＡ与蛋白质最适宜结合的各种因素进行了研究。苯酚处理反应体系及限制性内切酶的酶切位点保护实验都证实了Ｏｒｓ１２ＤＮＡ－蛋白质复合物的存在。利用硫酸铵盐析及ＤＮＡ亲和层析，对血清中的Ｏｒｓ１２ＤＮＡ结合蛋白进行了部分纯化，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，Ｏｒｓ１２ＤＮＡ结合蛋白为一组非均一的蛋白质，亚基分子量分别为６４ｋＤ、４４ｋＤ和２４ｋＤ。     

青鳉鱼早期胚胎中外源DNA的复制行为的研究

利用显微注射技术将外源ＤＮＡ与标有生物素的ｄＡＴＰ一起导入处于１细胞期的青鱼（Ｍｅｄａｋａ）受精卵细胞质中，鱼卵在２５℃孵化一天至胚孔封闭期，从胚胎细胞质中提取ＤＮＡ，经分子杂交发现外源ＤＮＡ在胚胎中可进行复制。ＤＮＡ样品再经核酸电镜分析，发现了几种类型的复制分子，并发现多复制叉及成熟前复制现象。由此认为外源ＤＮＡ可以多种方式在青鱼早期胚胎细胞质中进行复制。     

微丝重组对PKⅡ和PKA活性的影响

利用微丝解聚药物──细胞松弛素Ｂ（ＣＢ）对Ｇ０期小鼠Ｃ３Ｈ（１０）Ｔ１／２成纤维细胞进行预处理，就微丝重组对细胞进入Ｓ期，进行ＤＮＡ合成及蛋白激酶Ⅱ（ＰＫⅡ）和蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）的活性变化进行了研究。ＣＢ处理可促进细胞进入Ｓ期，增强ＤＮＡ合成。当细胞进入晚Ｇ１期时，ＰＫⅡ活性显著上升，且核内ＰＫⅡ活性上升速度更快，超过细胞质部分。细胞进入Ｓ期后，ＰＫⅡ活性维持在晚Ｇ１期的高水平上，而ＰＫＡ的活性变化趋势与ＰＫⅡ相反，细胞进入Ｓ期后，其活性明显下降。ＣＢ预处理可刺激ＰＫⅡ活性，抑制ＰＫＡ活性，表明ＣＢ处理刺激细胞进入Ｓ期可能与ＰＫⅡ和ＰＫＡ在细胞周期进程中的活性变化有关，ＰＫⅡ与ＰＫＡ之间可能以相互颉抗方式参与调节。     

模板甲基化水平对鼠肝RNA聚合酶体外转录活性的影响

利用３Ｈ－ＵＴＰ同位素参入法，研究了大鼠肝细胞ＲＮＡ聚合酶在核内外的转录活性，结果表明：在细胞核内的转录活性明显低于在无核抽提物中的转录活性。利用自身的ＤＮＡ模板，优于利用外加的ＤＮＡ模板。并比较了不同ＤＮＡ甲基化水平的模板对ＲＮＡ聚合酶体外转录活性的影响，发现模板的甲基化水平与其体外转录水平呈反相关。     

固氮酶中N2和N2O结合位的一种新的鉴定方法

采用ＧＣ和ＧＣ－ＦＴＩＲ法，研究了Ｎ２和Ｎ２Ｏ对固氮酶催化Ｃ２Ｄ２还原活性及产物二氘代乙烯的反式－／顺式－异构体比值的影响。结果表明，Ｎ２和Ｎ２Ｏ均抑制Ｃ２Ｄ２的还原作用，并引起反式／－顺式－１，２－二氘代乙烯比值的增加。     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＣＲ１）性的方法,提高化疗效。本采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡ＭＤＲ１－ＡＳ ＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＾＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳ ＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的     

铅化合物体外诱导人的淋巴细胞DNA损伤的遗传毒性

在体外对人的淋巴细胞，用不同浓度的硝酸铅Ｐｂ（ＮＯ３）２和硫酸铅ＰｂＳＯ４处理１小时，ＤＮＡ损伤的程度采用单细胞琼脂糖凝胶电泳技术进行比较研究．这两种铅化物均不同程度的显示了剂量反应关系．ＤＮＡ损伤的程度从８×１０－４ｍｏｌ／Ｌ起与空白对照相比，呈现有意义的增加（ｐ＜０．０５）．细胞ＤＮＡ断裂频率的增加与毒性呈现为线性增长的关系即为试验试剂的浓度愈高，则出现彗尾的细胞个数愈多，两种化合物在同样的实验条件下显示了相似的分裂剂的潜能．该试验初步证明铅化合物具有一定的遗传毒性