用酵母双杂合系统筛选与人血小板生成素受体c-Mpl相互作用的蛋白质的初报

血小板生成素（ｔｈｒｏｍ ｂｏｐｏｉｅｔｉｎ, ＴＰＯ）是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体ｃ－Ｍｐｌ介导．利用酵母双杂合系统（ｔｗ ｏ－ｈｙｂｒｉｄ ｓｙｓｔｅｍ ）筛选与ｃ－Ｍｐｌ相互作用的蛋白质因子,以Ｇａｌ４ ＢＤ融合ｃ－Ｍｐｌ膜内部分ｃＤＮＡ 的ｐＡＳＭＭ 为靶蛋白质粒,筛选了人胎盘ｃＤＮＡ 文库,分离到人波形纤维蛋白（ｖｉｍ ｅｎｔｉｎ）的部分编码序列,首次检测到波形纤维蛋白与ＴＰＯ 受体之间的相互作用,这提示细胞骨架蛋白可能在ＴＰＯ 的信号转导过程中起着重要的作用     

人血清中真核复制起始区DNA（Ors12DNA）结合蛋白的鉴定和纯化

利用含有真核细胞复制起始区（ＯｒｉｇｉｎｏｆＤＮＡＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）的Ｏｒｓ１２ＤＮＡ作为探针，检测了人血清中与Ｏｒｓ１２ＤＮＡ特异结合的蛋白质。凝胶电泳迁移率改变实验表明人血清中存在特异Ｏｒｓ１２ＤＮＡ结合蛋白。实验还对影响Ｏｒｓ１２ＤＮＡ与蛋白质最适宜结合的各种因素进行了研究。苯酚处理反应体系及限制性内切酶的酶切位点保护实验都证实了Ｏｒｓ１２ＤＮＡ－蛋白质复合物的存在。利用硫酸铵盐析及ＤＮＡ亲和层析，对血清中的Ｏｒｓ１２ＤＮＡ结合蛋白进行了部分纯化，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，Ｏｒｓ１２ＤＮＡ结合蛋白为一组非均一的蛋白质，亚基分子量分别为６４ｋＤ、４４ｋＤ和２４ｋＤ。     

Bc1-2 基因加强表达对 OA 诱发的细胞编程死亡的效应

ＯＡ能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞进行编程死亡．死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ有控降解成约２００ｂｐ左右的片段，且这一过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）抑制．将编码Ｂｃ１－２全长蛋白质的ｃＤＮＡ植入ｐＸＪ４１ｎｅｏ载体中，使其表达由ＨＣＭＶ病毒启动子控制．形成的顺义（ｐＢｃｌ－２－Ｓ）及反义（ｐＢｃｌ－２－ＡＳ）表达质粒经转染导入ＳＫ细胞中获得稳定转染子，Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹表明顺义转染子表达较大量的２６ｋｄＢｃ１－２蛋白，而反义转染子则不表达．增强表达的Ｂｃ１－２基因产物对ＯＡ引ＳＫ细胞编程死亡无抑制效应．     

胞内型磷脂酶A2基因亚克隆与基因表达

目的 研究花生四稀酸在细胞中的释放及前列腺素的合成,构建与花生四稀酸释放相关的表达系统。即胞内型磷脂酶Ａ２（ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ ｃＰＬＡ２）ｃＤＮＡ－ｐＲＣ／ＣＭＶ。方法 从克隆载体ｐＭＴ２用Ｓａｌ１制备ｃＰＡＬ２ｃＤＮＡ;平末端连接ｃＰＡＬ２－ｐＲＣ／ＣＭＶ;转染鼠巨噬细胞及筛选正向阳性克隆;ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｃＰＬＡ２ ｃＤＮＡ基因表达。结果 人ｃＰＬＡ     

人血小板生成因子（TPO）的cDNA克隆及促血小板生成效应

用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从人胎肝总ＲＮＡ中扩增得到约１．１ｋｂ人ＴＰＯｃＤＮＡ编码顺序，并进行分子克隆．将其中一个克隆（ｐＴＰＯ４７）亚克隆到Ｍ１３载体，测定全部ＤＮＡ顺序．它的碱基顺序与已报道的顺序完全相同，有一个１０５９ｂＰ的开放阅读框架可编码３５３个氨基酸．ｐＴＰＯ４７亚克隆到哺乳动物表达载体ｐＣＥＰ４，在哺乳动物２９３细胞系瞬时表达后，进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，结果显示有约１．４ｋｂ的转录产物．瞬时表达培养液腹腔注射小鼠后，可提高血小板计数４２．３％．血小板生成因子的克隆对进一步研究血小板生成调节以及该因子作用的分子机理具有重要意义．     

GHRP—scu—PA—32K突变体的构建,表达及纯化产物的部分性 …

在ｓｃｕ－ＰＡ３２Ｋ的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变,在Ｎ端紧接Ｌｅｕ＾１以前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ）,构建了ＧＨＲＰ－ｓｃｕ－ＰＡ－３２Ｋ的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ＾－细胞。筛选到的稳定表达株在无 清培养基的表达量为５８０ＩＲ／（１０＾６细胞．２４ｈ）。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为一蛋     

ORL1受体在SK-N-SH细胞中的功能性表达及其跨膜信号传导

一种新型的阿片受体ＯＲＬ１（ｏｐｉｏｉｄ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｌｉｋｅ１ｒｅｃｅｐｔｏｒ）及最近发现的ＯＲＬ１的内源性激动剂（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ）在痛觉的调制机制中扮演着某种重要角色．通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术在人的神经母细胞ＳＫ－Ｎ－ＳＨ中检测到ＯＲＬ１受体ｍＲＮＡ的天然高量表达；ｃＡＭＰ放射免疫测定技术发现，在经ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ处理的ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞中，由环甘酸环化酶激活剂（Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）引起的细胞内ｃＡＭＰ水平的升高受到抑制，其ＩＣ５０为６０±１５ｎｍｏｌ／Ｌ，最大抑制率为７０％．同时，用ｄｅｌｔａ阿片受体ＤＯＲ激动剂（ＤＰＤＰＥ）、Ｍｕ阿片受体ＭＯＲ激动剂（ＤＡＧＯ）分别处理ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞，也产生了不同程度的抑制，但抑制率均不如ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ．发现阿片受体的广谱拮抗剂（ｎａｌｏｘｏｎｅ），可使ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ及ＤＰＤＰＥ的抑制作用反转；用ＤＯＲ的特异性拮抗剂（ｎａｌｔｒｉｎｄｏｌｅ）只能使ＤＰＤＰＥ的抑制反转，而不能影响ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ的抑制作用．用５μｍｏｌ／Ｌ的ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ对ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞进行２０ｍｉｎ（３７℃）的预处理，可引起细胞对ｎｏｃｉｃｅｐｔｉ     

多能硫杆菌RubisCO基因（rbcL－rbcS）的克隆及限制性内切酶图谱分析

以光合细菌圆球状红杆菌Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒｓｐｈａｅｒｏｉｏｄｅｓ的ｒｂｃＬ－ｒｂｃＳ基因为探针，与多能硫杆菌（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓｖｅｒｓｕｔｕｓ）染色体ＤＮＡ酶切谱带进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，检测到了ｒｂｃＬ－ｒｂｃＳ基因的同源序列，又以ｐＵＣ９为载体，克隆了Ｔ．ｖｅｒｓｕｔｕｓ染色体ＤＮＡＰｓｔＩ酶切片段，构建成Ｔ．ｖｅｒｓｕｔｕｓ基因文库，并从这个基因文库中筛选到了含有ＲｕｂｉｓＣＯ基因的重组质粒，将其命名为ｐＳＤＬＳ－１０，进一步对ｐＳＤＬＳ－１０进行了限制性酶切分析，作出了ｐＳＤＬＳ－１０限制性内切酶图谱     

人血小板生成素在COS—7细胞中的暂时表达

利用反转录ＰＣＲ获得的全长人ＴＰＯ ｃＤＮＡ克隆入真核表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ的ＮｈｅＩ位点，用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法将其导入ＣＯＳ－７细胞中。。实验表明，所构建的表达质粒在ＣＯＳ－７细胞中转录水平表达，ｈＴＰＯ在真核系统中的稳定表达正在研究中。     

人血小板生成因子（TPO）的cDNA克隆在小板生成效应

用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从人胎肝总ＲＮＡ中扩增得到约１．１ｋｂ人ＴＰＯ ｃＤＮＡ编码顺序，并进行分子克隆，将其中一个克隆（ｐＴＰＯ４７）亚克隆到Ｍ１３载体，测定全部ＤＮＡ顺序。它的碱基顺序与已报道的顺序完全相同，有一个１０５９ｂｐ的开放阅读框架可编码３５３个氨基酸。ｐＴＰＯ４７亚克隆到哺乳动物表达载体ｐＣＥＰ４，在哺乳动物２９３细胞系瞬时表达后，进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，结果显示有约１．４ｋｂ的转录产     

捕食线虫真菌自发产生捕食器官的菌株筛选

在Ｃｚａｐｅｋ,ＰＤＡ,ＣＭＡ,ＷＡ四种培养基上,从２１株捕食线虫真菌中筛选到７株在无线虫诱导条件下能自发形成捕食器官的真菌,这些菌株是：Ｊ８－１（Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ ｌｌｉｇｏｓｐｏｒａ ｖａｒ．ｏｌｉｇｏｓｐｏｒａ）,ＭＷ１７－２（Ａ．ｊａｖａｎｉｃａ）,Ｊ３１－１（Ａ．ｖｅｒｍｉｃｏｌａ）,Ｊ３４－１（Ｄａｃｔｙｌｅｌｌａ ｌｅｐｔｏｓｐｏｒａ）,ＸＺ９－２,ＸＳ２－２,Ｏ１－１（Ａ．     

人Cu,Zn-SOD在酵母系统中的表达

甲醇酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）是一种理想的真核蛋白高水平表达系统。将人Ｃｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ基因克隆到酵母整合型质粒载体ｐＰＩＣ３．５Ｋ，经转化ｈｉｓ４缺陷型酵母ＧＳ１１５，用ＭＤ培养基及ＰＣＲ方法筛选阳性转化子，并用含Ｇ４１８的ＹＰＤ培养基筛选多拷贝转化子，经甲醇诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的人Ｃｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ，经计算机扫描分析，表达量占酵母可溶性     

核酸的分子静电势（I）──C－DNA的分子静电势

对于序列聚（ｄＧ－ｎｒ）和聚（ｄＡ－ｄＴ）来说，本文介始了Ｃ－ＤＮＡ活性位置的分子静电势（ＭｏｌｅｃｕｌｅｒＥｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃＰｏｔｅｎｔｉａｌ）的计算方法和结果［１］．描述了双螺旋表面外壳（ＳｕｒｆａｃｅＥｎｖｅｌｏｐｅｓ）上势的分布，并将其与Ｂ－ＤＮＡ有关结果［２－４］作了比较．     

人红细胞生成素受体膜外结构域在大肠杆菌中的融合表达及其纯化

将插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｂｅ的人红细胞生成素受体ｃＤＮＡ,用ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶解,分离得到的基因片段,插入到经ＥｃｏＲＩ和ＲａｍＨＩ消解的表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ中,得到重组表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ。重组质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ含有ｔａｃ启动子,ＥＰＯＲ膜外结构域基因５端与谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）编码基因融合,阳性重组子在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ｈＥＰＯＲ,重组表达菌裂解上清液经ＧＳＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱一步纯化,能除去绝大部分杂蛋白,基本达到纯化的效果。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫杂交分析显示,重组表达产物确系人红细胞生成素受体     

中国人群DMD基因含外显子片段的限制性带型和RFLPs研究（Ⅰ）：Bgl…

采用ＤＭＤ基因的全长ｃＤＮＡ（１４ｋｂ）为杂交探针，分析了中国人群ＤＭＤ基因含外显子片（ｅｘｏｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｆｒａｇｍｅｎｔ）的ＢｇｌⅡ限制性片段和ＲＦＬＰｓ。新揭示出四个ＢｇｌⅡ片段，ＤＭＤ基因全长范围内含外显子的ＢｇｌⅡ限制性片段总数至少为５９个，这为制作ＤＭＤ基因的ＢｇｌⅡ部分限制图奠定了重要基础；另分析了四个ＢｇｌⅡＲＦＬＰｓ在中国人群中的等位频率，在ｃＤＮＡ２ｂ－３，ｃＤＮＡ     

Banach空间值鞅的两种新型BMO空间和Sharp算子

借助于ｐ－条件均方算子和ｐ－均方算子,首先引入了Ｂａｎａｃｈ空间值鞅的两种新型ＢＭＯ空间ＢＭＯ＾σ（ｐ）（Ｘ）和ＢＭＯ＾Ｓ（ｐ）ｒ（Ｘ）以及两种新型ｓｈａｒｐ算子ｆ＾σ（ｐ）ｒ和ｆ＾ｓ（ｐ）ｒ,并且讨论了ＢＭＯ＾σ（ｐ）ｐ（Ｘ）与ＢＭＯ＾＋ｐ（Ｘ）,ＢＭＯ＾ｓ（ｐ）ｐ（Ｘ）与ＢＭＯｐ（Ｘ）的相互嵌入关系,以及ｆ＾σｐｐ与ｆ＾＃ｐ,ｆ＾ｓ（ｐ）ｐ与ｆ＾＃ｐ之间的凸Φ不等式,所得结果给出了Ｂａａｎｃｈ     

乙型肝炎病毒(HBV)DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游．重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达．用纯化后的重组质粒直接注射到ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体．ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合     

用喷涂法和溶胶—凝胶工艺制备PT／SnO2（Sb）／SiO2薄膜

用喷涂法在石英玻璃衬底上制备Ｒｓ为１００－２００Ω／ｃｍ＾２的ＳｎＯ２（Ｓｂ）透明导电薄膜，并且以ＳｎＯ２（Ｓｂ）／ＳｉＯ２为衬底和底电极，用Ｓｏｌ－Ｇｅｌ法制备ＰｂＴｉＯ３（ＴＰ）。薄膜。ＴＰ膜为多晶，与ＳｎＯ２（Ｓｂ）膜之间不存在界面反应。     

乙型肝为病毒（HBV）DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游,重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达,用纯化后的重组质粒直接注射用ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼细内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体,ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合。     

落新妇中丹宁类化合物的分离及结构的核磁共振分析

利用ＴｏｙｏｐｅａｒｌＨＷ－４０（Ｃ）凝胶反复柱层析,从落新妇（Ａｓｔｉｌｂｅｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）全草的７０％Ｍｅ２ＣＯ提取物中分离得到４种丹定类化合物,经过化学及核磁共振分析分别确定其结构为３－Ｏ－没食子酰基－（－）－麦儿茶素［３－Ｏ－ｇａｌｌｏｙｌ－（－）－ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ］ＡＣ－１,３－ｏ－没食子酰基－表儿茶素－（４β－８）－（３－Ｏ－没食子酰基）－表儿茶素［（３－Ｏ－ｇａｌｌｏｙｌ）－ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ－（４β－８）－（３－Ｏ－ｇａｌｌｏｙｌ）－ｅｐｉｃａｔｅｃｅｃｈｉｎ］ＡＣ－２,２;１,２,４,６－四－Ｏ－没食子酰基－β－Ｏ－葡萄糖［１,２,４,６－ｔｅｔｒａ－Ｏ－ｇａｌｌｏｙｌ－β－Ｏ－ｇｌｕｃｏｓｅ］ＡＣ－３,３和没食子甲酯（ｍｅｔｈｙｌｇａｌｌａｔｅ）ＡＣ－４,４．这些成分均为首次从该植物中得到。