一株产纤维素酶的暹罗芽孢杆菌筛选及产酶条件优化

以一株来自海鱼肠道的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)为出发菌株,进行紫外线诱变,诱变后通过平板初筛和摇瓶复筛,获得了五株纤维素酶高产菌株,其中菌株UV-30酶活最高,为0.082 1 U/g,较出发菌株(酶活为0.052 4 U/g)提高了56.68%.通过采用单因素和正交试验对该菌株产酶条件进行优化,结果表明最优发酵条件为:羧甲基纤维素钠1.25%,蛋白胨6%,产酶温度30℃,起始pH值8.0,装液量30%,接种量2.5%.以此条件发酵,酶活可达到0.168 6 U/g,为出发菌株的3.22倍,酶活显著提高,为该酶的进一步分离纯化及性质研究奠定了基础.     

产纤维素酶芽孢杆菌DS1309的分离鉴定及产酶条件研究

通过唯一碳源法从来源于长白山森林的土壤中筛选到多株具有纤维素降解活力的细菌,选取其中的1株芽孢杆菌DS1309进行了鉴定及发酵条件的初步优化,结果显示该菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。发酵产酶的最适条件为培养温度30℃,培养基初始p H6.0,最适碳源为葡萄糖,最适碳源为酵母粉。菌株在最适条件下培养48h达到产酶高峰,酶活力可达到1.82 IU/m L。     

浓香型大曲中多株芽孢杆菌的分离及鉴定

采用传统微生物分离方法从浓香型白酒大曲中筛选出8株优势芽孢杆菌,通过形态特征观察并结合细菌脂肪酸鉴定技术(MIDI鉴定系统)对其进行鉴定。结果表明,从大曲中分离筛选得到8株芽孢杆菌分属于5个种,分别为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。     

响应面优化贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株YH-18产芽孢培养基和培养条件

【目的】贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株YH-18是优良的抗病促生微生物,其制成的微生物菌剂具有无害、高效、环保等特点。通过优化菌株YH-18的培养基组分和培养条件,提高发酵液中的有效活菌数,以期增加发酵液中的芽孢数,延长储存时间,降低发酵成本,提高其在工业化生产发酵中的质量效益。【方法】以贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)菌株YH-18发酵液芽孢数为质量指标,采用单因素分析法对发酵液培养基(碳源、氮源、无机盐及其浓度)和培养条件(温度、转速、初始pH、装液量、接菌量)进行初步筛选。将初筛结果结合响应面试验设计[plackett-burman(PB)、最陡爬坡试验、box-behnken design(BBD)],筛选出对贝莱斯芽孢杆菌菌株YH-18产芽孢影响最为显著的因素进一步验证,建立各显著性因素的二次回归方程模型,完成对菌株YH-18培养基组分和培养条件的系统优化。对比优化前后发酵液产品的去菌体滤液对根癌农杆病菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株C58生长的抑制效果。每隔4个月测定优化后发酵液中的活菌数和芽孢数,考察优化...     

一株产高温纤维素酶曲霉菌的发酵条件及培养基优化

对一株产高温纤维素酶的曲霉(Aspergillus sp.)F4菌株进行培养基及发酵条件的优化.最佳产酶液体培养基配方为:稻草粉40 g·L-1,(NH4)2SO43.5 g·L-1,NaCl 2 g·L-1,KH2PO42 g·L-1,MgSO4.7H2O 0.5g·L-1,甘油0.20%,pH 5.5;优化后CMC酶活力提高16.7倍.优化后产酶条件为:接种量4%,温度37℃,摇床转速150 r.min-1,装液量80 mL/250 mL.在此条件下发酵8 d,CMC酶活力达到了12.26 U.mL-1,比优化前提高了约2倍.     

高温大曲中两株产酱香菌的分离鉴定

为提高酱香型白酒风味,以高温大曲为原料,采用高温培养法和麸皮固体培养基固态发酵筛选出20株芽孢杆菌.通过对各菌株产香实验筛选出2株产酱香的芽孢杆菌(GX07和GX08),并结合菌株生理生化和16S rDNA基因序列对两株菌株进行鉴定.结果表明,GX07为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),GX08为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

纤维素酶固体发酵条件的优化

对以稻草—麸皮为原料、以诱变后的黑曲霉LH2446为菌种固态发酵生产纤维素酶的条件进行了研究。试验确定所试因素的最佳组合为:稻草、麸皮比3∶2,硫酸铵2.0%,培养基起始pH值为自然pH,250mL三角瓶中装培养基10g,培养时间3d,温度35℃,表面活性剂Tween20 0.5%。在此条件下产纤维素酶的最高酶活为20100U/g,平均为19920U/g。     

一株产纤维素酶的枯草芽孢杆菌部分生物学特性研究

为了解藏绵羊源产纤维素酶的芽孢杆菌分离株(SWUN 6407)作为微生物添加剂候选菌株的潜力,用PCR扩增16S r DNA序列对其进行鉴定,刚果红染色法测定其产纤维素酶能力,以比浊法测定其对酸和牛胆盐的耐受力,用纸片法测定其对庆大霉素、链霉素、青霉素G、万古霉素、乙酰螺旋霉素、克林霉素、林可霉素、环丙沙星、红霉素、四环素、卡那霉素、磷霉素、替考拉宁、头孢噻肟、利福平、氨苄西林、呋喃妥因、阿莫西林等18种抗菌药物的敏感性.结果显示,SWUN 6407为枯草芽孢杆菌,水解圈与菌落直径的比值为5.8,在p H 2.0环境中存活率为30.5%,在0.7%牛胆盐环境中存活率为64.1%,对18种抗菌药物均敏感.综上可见,SWUN 6407是纤维素酶高产酶菌株,其耐酸、耐胆盐的能力符合微生物添加剂的要求,且不具有耐药性,是一株良好的高产纤维素酶微生物添加剂候选菌株.     

洗涤剂用碱性纤维素酶产生菌的菌种选育

以实验室提供的一株嗜碱性芽孢杆菌Ｖ１－１－３为出发菌株，经过甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）的二次诱变处理及青霉素、链霉素、万古霉素和头孢霉素等抗性平板的筛选，得到一株耐青霉素的高产变异新菌株，产纤维素酶的能力大大提高，酶活（发酵液）从１５．２０ｕ／ｍＬ提高到２９．３６ｕ／ｍＬ。     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因在枯草芽孢杆菌中的表达

根据NCBI上已公布的枯草芽孢杆菌BS168菌株的β-1,4-glucanase(eglS)基因以及苏云金芽孢杆菌的aiiA基因序列,设计引物并扩增得到eglS基因的启动子、信号肽序列和aiiA基因.构建重组表达载体Ps4-eaiiA,转化枯草芽孢杆菌BS168,得到枯草芽孢杆菌工程菌BS168/Ps4-eaiiA.该工程菌诱导发酵后经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:aiiA基因实现了在枯草芽孢杆菌中的表达.对胡萝卜软腐欧文氏菌进行马铃薯的抗病性实验,结果表明aiiA基因在枯草芽孢杆菌中表达的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏杆菌表现出一定的抗病性.     

地衣芽孢杆菌降解茶皂素的研究

以茶皂素(tea saponin)为原料,以茶皂素降解率为指标,利用地衣芽孢杆菌降解茶皂素.分别探讨发酵时间、发酵温度、摇床转速、接种量对其降解的影响,再通过响应曲面设计实验对发酵条件进行优化.结果表明,影响降解率显著性次序为:发酵温度(X2)接种量(X4)发酵时间(X1)摇床转速(X3),得到最佳的优化条件为:发酵时间10.9d,发酵温度28.89℃,摇床转速150r·min-1,接种量为9.11%.在此条件下发酵茶皂素的降解率达到了(63.83±0.28)%.     

枯草芽孢杆菌SX3411产抑菌物质的发酵条件优化

枯草芽孢杆菌SX3411菌株自身带有subtilomycin基因簇,其主要的抑菌成分为subtilomycin.该文采用单因素分析法分析了枯草芽孢杆菌SX3411在不同发酵条件和营养成分时对抑菌物质产生的影响.根据单因素分析,对枯草芽孢杆菌SX3411产抑菌物质设计了响应面法分析,通过响应面法获得了最优的发酵条件和最佳...     

高温大曲中一株高产酸细菌的筛选与生物学特性分析

产酸菌是高温大曲中的一类重要细菌微生物,其主要作用是在酿酒过程中通过发酵为白酒提供香味成分和增加白酒口感风味,目前对高温大曲中产酸菌特性的研究较少。用高温大曲通过富集培养、钙平板分离纯化获得酱香大曲菌株7株;通过定性定量试验,发现命名为RS-6的菌株产酸量最高,达到2.13 g/L;通过耐乙醇、耐乙酸、耐盐和耐高温试验进一步对RS-6菌株进行研究,发现该菌株的最高乙醇耐受质量分数为7%,最高乙酸耐受质量分数为3%,最高盐耐受质量分数为0.8%,最适生长温度为30 ℃。研究表明,从高温大曲中筛选到一株产酸量高、乙醇耐受性高和耐盐性高的产酸细菌。     

枯草芽孢杆菌发酵条件的研究

对枯草芽孢杆菌的发酵条件进行研究,利用minitab软件,采用Plackett-Burman设计,从温度、pH、转速、接种量、蛋白胨、牛肉膏、NaCl7个影响因素中,筛选出牛肉膏、蛋白胨、温度和pH4个主要因素.在此基础上,采用响应曲面法对以上4个主要因素作进一步研究,得到各因素的最优水平:当牛肉膏为7.3g/L,蛋白胨为7.1g/L,温度为33.5℃,pH为6.1时,菌体生长量最大(OD值为2.9586)。     

产蛋白酶菌株Bacillus subtilis GS-1发酵条件优化及蛋白酶水解应用初步研究

 利用Plackett-Burman (PB)试验和相应面优化方法对枯草杆菌GS-1菌株发酵产蛋白酶的条件进行优化,以期获得高活性的蛋白酶发酵液。同时,将发酵所产蛋白酶用于蛋白水解实验,以进一步考察蛋白酶的水解特性。首先,通过PB试验,筛选出3个影响菌株发酵过程中蛋白酶活力的主要因子(氯化铵、初始pH值及培养温度)。其次,通过响应面优化法,进一步探讨各参数之间的相互关系并最终拟合得出发酵产酶活的方程。结果表明,在氯化铵 (3.768 g/L), 初始pH (5.6) 以及培养温度 22.4 ℃的条件下,发酵液中蛋白酶的最高酶活力能达到372.814 U/mL。水解试验结果表明：相对于植物来源的蛋白,该蛋白酶粗提物对于动物来源的蛋白具有较大的水解偏好型。该蛋白酶粗提物对于由谷氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或精氨酸所组成的化学键有较强的水解偏好性。以上结果表明：该菌株发酵所产的蛋白酶在蛋白水解加工行业中具有潜在的开发应用价值。     

响应面设计法优化腺苷发酵培养基

利用响应面方法对枯草芽孢杆菌生产腺苷的培养基进行了优化。首先用两水平因子实验对培养基组分酵母粉、玉米浆、KH2PO4、MgSO4、(NH4)2SO4对产苷的影响进行评价,结果表明：主要影响因子为酵母粉、KH2PO4和(NH4)2SO4。根据实验结果对主要影响因子的大致范围进行估计,选定合适的浓度作进一步试验,然后用中心组合设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度。通过实验发现当酵母粉15g／L,KH2PO4 6g／L,(NH4)2SO4 10g／L时,腺苷产量达到7．42g／L,比优化前的5．77g／L提高了28．6％。     

洗毛用枯草芽孢杆菌产蛋白酶发酵条件优化

 用响应面法(Response Surface Methodology,RSM)对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）液体发酵产蛋白酶的发酵条件进行快速优化。首先运用逐因子试验确定Bacillus subtilis产蛋白酶的最佳碳源和氮源分别为糊精和玉米粉。在此基础上,通过Plackett-Burman设计对影响其产酶相关因素进行评估,并筛选出具有显著效应的3个因素：糊精、玉米粉和酵母膏。在用最陡爬坡试验逼近以上3个因子的最大响应区域后,采用RSM法对以上3个显著因子的最佳水平范围进行研究,通过对二次多项回归方程求解,确定其最优发酵条件为：糊精11.568g/L,玉米粉22.462g/L,酵母膏10.202g/L,NaCl 5g/L。初始pH值为7.0,37℃培养48h。最终优化后的酶活达到3281.79U/mL,比初始酶活2463.95U/mL提高了33.19%,证明RSM法优化洗毛用Bacillus subtilis产蛋白酶发酵工艺是可行的。     

黑曲霉液体发酵生产纤维素酶的研究

从土壤中分离得到一株产纤维素酶的黑曲霉菌株Ａｓｐ．ｎ－１３,采用二级液体发酵生产纤维酶;对液体发酵条件进行了研究,确定了发酵培养基配方。试验结果表明,滤纸酶活力最高达１６４Ｕ／ｍＬ,ＣＭＣ酶活力最高达２７２Ｕ／ｍＬ,最适发酵周期为７６－８４ｈ。     

大曲中产3-羟基丁酮菌株的筛选及其等离子体诱变

从大曲中分离筛选获得1株产3-羟基丁酮的菌株G7,以葡萄糖为主要碳源,此菌株在38℃,180r/min恒温振荡培养96h,3-羟基丁酮产量达到24.30g/L.根据形态特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析,该菌株被鉴定为甲基营养型芽胞杆菌(Bacillus methylotrophicus strain).将该菌株作为出发菌株,采用常压室温等离子体(Atmospheric and Room Temperature Plasma,简称ARTP)诱变,并进行48孔板初筛及摇瓶复筛,同时对所获菌株进行遗传稳定性分析,最后得到1株遗传性状稳定的3-羟基丁酮高产菌株G7-6,其产量可达31.65g/L,比诱变前提高了30.25%,且转化率较高,为27.31%.