胚胎分割、分割胚的体外培养及移植

用玻璃微针对小鼠胚胎进行分割,分割的裸半胚经体外培养和移植到受体后,获得由半胚发育的仔鼠。小鼠早期胚胎(2细胞,8细胞阶段)在链霉蛋白酶中软化透明带后,用直径为0.5μm的玻微针徒手对胚胎进行切割。切割的半胚体外培养24～48h,观察半胚的活力、发育率、发育阶段及胚泡的大小与未切割的正常胚胎进行比较。共切割胚胎342枚,切割后成活的半胚为411枚,半胚成活率为60.08％(411/682)。2细胞和8细胞阶段切割的半胚,成活率分别为     

鸡胚早期发育中组织者的起源及其诱导能力

本研究利用活性荧光染料ＤｉＩ，对鸡胚的期和期胚盘进行标记，以确定组织者的部位。并将组织者区域的细胞移植到宿主胚胎中，验证其诱导次级胚胎的能力。结果表明，期、期胚盘的组织者细胞位于胚盘中轴的后端，其细胞的性质已被决定，能够诱导次级胚胎的发育，本研究结果支持原条的发育与组织者细胞性质不是受下胚层诱导的观点。     

绒山羊胚胎的体外培养,冷冻保存和移植的研究

采用体外培养和冷冻保存的方法将起排处理后的绒山羊２～８细胞期胚胎经体外在Ｍ１９９＋ＦＣＳ（对照组）、Ｍ１９９＋ＯＥＣ＋ＦＣＳ、Ｍ１９９＋ＯＥＣ＋ＥＮＧＳ和，Ｍ１９９＋ＯＥＣ＋ＮＳＳ的培养基中分别进行培养以后，选取发育为桑椹胚和早期囊胚期胚胎分别以１０％Ｇｌｙ、１０％ＥＧ为防冻剂和玻璃化方法进行冷冻保存，并将用常规和玻璃化法冷冻保存的胚胎解冻后进行移植．结果表明，体外培养胚胎的囊胚的发育率在四个培养处理组中分别为１２．５％、７０．６％、８１．８％和７３．９％，对照组与添加ＯＥＣ处理组之间具有极显著性差异（Ｐ＜０．０１），囊胚发育率在添加ＦＣＳ、ＥＮＧＳ和ＮＳＳ的实验组之间无明显差异．经冷冻保存的桑椹胚和早期囊胚的冷冻解冻胚的形态正常率在甘油、乙二醇和玻璃化三个冷冻处理组中分别为７５．０％、８６．７％和７５．０％，发育率分别为５８．３％、７８．８％和８０．０％．冷冻解冻胚的移植妊娠率在三个处理组中分别为５０％、７５％和５０％，产羔率分别为３０％、６８．８％和５０％．采用乙二醇冷冻绒山羊胚胎产生的效果优于甘油和玻璃化方法的冷冻效果。     

不同融合条件及激活方法对体细胞克隆绵羊胚胎发育的影响

对成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代，将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后，作为核供体移植到MII期去核卵母细胞中进行核移植胚胎的生产，用细胞驰素B法与离子霉素＋6－DMAP法对核移植胚胎（重构胚）在电融合后进行化学激活，然后在38.6度，5％CO2，最大相对湿度条件下，进行体外培养（IVC），重构胚卵裂率分别为37．8％与43．8％（51／135与81／185），囊／桑葚胚率分别为9．8％和12．3％（5／51和10／81），在融合电压1．5kV/cm，持续时间30us，脉冲次数为2次的条件下，孤雌激活胚胎的卵裂率和囊／桑葚胚率分别为81．0％和12．9％。     

哺乳动物早期胚胎活力的测定——活体及非活体染色法

家兔及小白鼠的早期胚胎(2细胞—桑椹胚),用中性红及台盼兰进行活体及非活体染色,可以将活胚及死胚区别开来。我们对225个小白鼠早期胚胎和239个兔早期胚胎进行染色,获得染成淡粉色鼠胚105个,兔胚201个,染成兰紫色的鼠胚37个兔胚14个。经过早期胚胎的体外培养及体内移植实验证明:染成淡粉色的胚胎为活胚,染成兰紫色为死胚。本实验共培养了46个着淡粉色兔胚,经过14小时培养以后,其最高发育率可达90％。将6个着淡粉色兔胚进行移植,第14天剖腹检查受体,其受胎率为100％。将6个染成兰紫色的兔胚在体外培养,经过24小时以后其发育率为O％。6个兰紫色胚经过移植,其受胎率为O％。     

完全体外化牛细胞核移植的研究

本研究探讨了用体外成熟卵母细胞和体外受精胚胎进行核移植的可能性。本研究结果在我国首次获得牛核移植的成功。从屠宰场回收的卵巢中抽取卵球－卵母细胞复合体，采用以前报道的方法（石德顺等，广西农业大学学报’１９９４：１３：１－５）进行体外成熟（ＩＶＭ）和体外受精（ＩＶＦ），获得ＩＶＭ卵母细胞和ＩＶＦ胚胎，体外成熟２３－２４ｈ后，在含０．１％透明质酸酶的无钙镁ＰＢＳ（ＰＢＳ）内，用细管反复吹打去掉卵丘细胞。选择具有明显第一极体的卵母细胞通过显微操作移去第一极体及其附近约一半的细胞质进行去核，去核的卵细胞在成熟液内继续培养到ＩＶＭ３０ｈ．体外发育到８－３２细胞期的ＩＶＦ胚胎用作核供体．供体胚胎用含０．２５％Ｐｒｏｎａｓｅ（溶于ＰＢＳ￣－）溶解透明带，并用细管吹打将其分散成单个卵裂球，在ＩＶＭ３０ｈ将单个卵裂球显微注入去核卵母细胞的卵周隙内，并在ＩＶＭ３１ｈ用８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ两次电脉冲（间隔１秒）来诱导卵裂球与去核卵母细胞的融合。融合卵在颗粒细胞单层培养滴内共培养，体外培养２４ｈ后观察卵裂结果，经体外培养５－８天后发育到桑椹和囊胚的核移植胚胎移植到同期发情的受体．２个月后直检妊娠情况．本实验中共操作１９４枚卵母细胞，     

人胚绒毛膜低分子组分的抗癌作用

人胚绒毛膜低分子组分的抗癌作用洪满贤，庞俊涛（生物学系）发育生物学与肿瘤分子生物学研究表明，在胚胎发生过程中存在着一类天然的内源性生理调节因子，对胚胎细胞的稳定增殖、正常分化，防止或抵抗胚胎细胞癌变起调控作用￣［１］．人胚绒毛膜是胎膜的重要部分，可分...     

斑马鱼体细胞核移植——头肾细胞和尾鳍细胞核移入成熟具核卵子发育能力的初步研究

将经直接消化的斑马鱼头肾细胞或经短暂培养的尾鳍细胞核移植到同种成熟具核卵子中，移核卵可发育到原肠晚期；将移核卵发育成的囊胚细胞核作供体进行第2次核移植，受体卵可发育到尾芽期或肌肉感应期。流式细胞仪测定DNA含量表明，受体卵发育形成的囊胚细胞DNA含量与正常囊胚细胞DNA含量相同，由此可知，移核卵中的雌原核没有参与移核胚胎的发育。     

番木瓜体细胞胚发生及发育的影响因素

研究了影响番木瓜（Ｃａｒｉｃａｐａｐａｙａ）体细胞胚发生、发育的一些因素．结果表明：①番木瓜无菌小苗幼根在附加ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．５ｍｇ／Ｌ的改良ＭＳ培养基上可诱导出大量具良好胚性潜能的愈伤组织；②愈伤组织在附加ＮＡＡ０．２５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．２５ｍｇ／Ｌ的改良ＭＳ培养基上可连续继代并得到胚性化；③在所试验的激素种类中，ＫＴ是适于体细胞胚的发育，最适浓度为０．５ｍｇ／Ｌ；④０．１％～０．３％的活性炭有利于体胚的发生、发育；⑤体细胞胚在固体培养基上完成球形胚期前的发育，在液体培养液中完成球形胚期后的发育可提高成熟体胚的产量和质量     

猪卵核移植的研究

以湖北白猪为受体，杜洛克为供体进行了猪卵核移植的研究。结果表明，半胱氨酸对卵具有保护作用。卵龄对核移植效率有显影响，以４２－４８ｈ为宜，激活后卵母细胞做受体可提高移核胚的发育率；供体核发育期对移核胚的发育有显影响。核移植后的重组胚移入受体后，经体内发育得到了５只核移植仔猪。     

诺丹冰草（Agropyron desertorum CV．nordan）的胚和胚乳发育

观察了诺丹冰草胚和胚乳的发育过程．一般合子第一次分裂为横分裂，但偶见有斜分裂，形成顶细胞和基细胞．顶细胞纵分裂，基细胞横分裂，胚胎发生属紫宛型．一个助细胞于受精前解体，宿存助细胞生存到椭圆形胚期．丝状器具强的ＰＡＳ正反应．反足细胞于受精后增殖并保留到多细胞原胚时消失且无多糖反应．核型胚乳，胚乳细胞化开始于多细胞原胚期．成熟胚乳细胞中具许多大的淀粉粒．种子有胚乳．发现有原胚的移位及胚囊中缺少胚的现象．     

河川沙塘鳢的胚胎和胚后发育以及温度对胚胎发育的影响

本文描述了河川沙塘鳢的胚胎和胚后发育以及温度与胚胎发育的关系。根据外形和内部主要特征，将胚胎发育分为３０个发育期。在胚胎发育期间，许多器官分化形成，至孵化时，胚胎已具有较完善的内部器官，各鳍亦已形成。胚后发育以卵黄囊的消失和鳞被的形成为依据，划分为仔鱼期、稚鱼期和幼鱼期。胚后发育不经过浮游生活期。在自然水温中，胚胎约经２１天发育孵出仔鱼。胚胎发育的最高临界温度为３０．０℃，最低临界温度为１０．０℃，适宜温度范围为１５．０～２７．０℃，其中２１．０～２７．０℃为胚胎发育的最适温度范围。     

产生乳腺定位表达人CD14的转基因小鼠研究

将来自ＰＣＲ法合成的绵羊β－乳球蛋白基因（ＢＬＧ）５’端８９８ｂｐ上游区和人单核细胞表面分化抗原基因（ｈＣＤ１４）成熟肽１２４５ｂｐ片段构建的ＢＬＧ－ｈＣＤ１４融合基因纯化后,注入小鼠受精卵原核。实验共注射受精卵１１４９枚,经体外培养发育到２－细胞期的胚胎计９６８枚,发育率为８４．２％。从发育的胚胎中选择６３４枚移植到４６只假孕受体。其中１４只妊娠产仔,妊娠率３０．４％。妊娠受体共移植胚移２０７枚     

用电穿孔法将外源基因高效导入水稻胚盾片细胞

利用电穿孔法将外源基因导入未经前处理的水稻成熟胚盾惩细胞，质粒为ｐＡＣＴ１－Ｆ，其上带有受水稻肌动蛋白基因ａｃｔｉｎ１启动控制的ＧＵＳ（ｕｉｄＡ）报告基因，电穿孔实验的条件为１００μｇＤＮＡ／ｍｌ缓冲液，３１０Ｖ／ｃｍ场强及９００μＦ电容，通过ＧＵＳ基因瞬时表达实验室证明只需一次脉冲处理便可在一个胚上获得几十个数百个转化细胞，并且发现盾片细胞较胚上其它部位的细胞更易于转化。     

山羊胚胎的体外发育及冷冻保存研究

采用体外培养的方法，对山羊２～８细胞胚进行培养以后将体外发育至囊胚的胚胎进行冷冻保存，以便探讨山羊早期胚的体外培养方法和冷冻方法对体外发育胚冷冻效果的影响。将胚胎分别放入Ｍ１９９、Ｍ１９９＋输卵管上皮细胞和Ｍ１９９＋输卵管上皮细胞＋ＥＧＦ的培养液中进行培养，选取发育至囊胚期的胚胎分别以甘油和乙二醇为冷冻保护剂进行冷冻保存。结果体外培养胚的囊胚发育率在三个处理组中分别为１２．５％、７０．６％和７６．９％。使用Ｍ１９９处理组与添加输卵管上皮细胞、添加输卵管上皮细胞和ＥＧＦ的处理组之间具有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。冷冻解冻胚的形态正常率和发育率在以甘油和乙二醇为防冻剂的处理组中分别为６８．７、５８．３％和７８．６％、７２．８％。两组之间无明显差异，结果表明，采用与输卵管上皮细胞共同培养的方法能够提高山羊胚胎体外培养的发育率，以甘油和乙二醇为冷冻防冻剂均适合于山羊体外发育胚的冷冻保存，两者相比乙二醇的效果略优于甘油。     

花生体细胞胚发生发育过程中淀粉代谢的？…

将花生实生苗的幼叶接种于ＭＳ固体诱导培养基上诱导体细胞胚发生。用ＰＡＳ染色法观察了体细胞胚发生发育过程中的淀粉代谢的动态变化。结果表明，在体细胞胚的发育过程中，淀粉表现出两次积累高峰，第一次在胚性细胞团中，淀粉粒大而密集；随着胚性细胞的分裂，淀粉逐渐被消耗，到多细胞原胚期胚体内淀粉趋于消失。球形胚期，淀粉粒又开始积累，出现第二次积累高峰；到成熟胚期，淀粉积累只限于生长点区域，淀粉的两次积累高峰为体     

利用体细胞核移植技术生产黄牛和水牛同种、异种转基因克隆囊胚

以含neo和GFP基因双标记的水牛、黄牛胎儿成纤维细胞进行牛转基因体细胞核移植,结果发现：阿菲迪霉素可有效将胎儿成纤维细胞同步于G0／G1期;以GFP阳性细胞进行核移植,其卵裂率、囊胚率与对照组间无显著差异（P〉0．05）,所构建的重组胚,2-细胞阶段观察不到GFP的表达,4-细胞以后GFP的表达逐渐增强,在囊胚的内细胞团和滋养层细胞均可检测到GFP的表达,将黄牛同种转基因克隆囊胚进行移植,获得1例妊娠;黄牛卵母细胞-水牛供核细胞构建异种重组胚囊胚率显著高于黄牛供核细胞-水牛卵母细胞构建的异种重组胚（P〈0．05）,并且异种核移植重组胚中可检测到GFP表达,GFP可作为异种核移植胚胎来源的一种新标记．     

兔卵输卵管培养与再移植后的成活力

本文研究分裂的兔卵在输卵管内培养与再移植。目的是观察这种胚胎的成活力,验证这种方法的实用价值。分裂期的兔卵在输卵管内培养2～3天,发育到胚泡,然后再移植。移植分自体移植和异体移植。总共再移植24例,13例母兔妊娠,产仔9窝,获仔兔21只,怀孕率54.17％,成活率25.61％.     

古地中海子遗植物──半日花（Helianthemumsoongolicum）的组织培养

Ｈ．ｓｏｏｎｇｏｌｉｃｕｍ叶片外植体在ＭＳ加ＩＡＡ１０ｍｇ／Ｌ，６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ培养基上获得愈伤组织，然后在ＭＳ加ＩＡＡ５ｍｇ／Ｌ，６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ培养基上获得胚状体及试管苗．愈伤组织的诱导及其再分化对ＩＡＡ有特殊的要求，２．４－Ｄ不能取代ＩＡＡ的作用；胚状体来源于单个胚性细胞，由它经均等或不均等分裂形成的细胞后代继续发育为各级胚；试管苗根系发育不良。作者认为该种的濒危与其胚胎发生关系不大，而胚根的不正常发育可能是导致其濒危的原因之一。     

葡萄离体培养中胚状体发生的研究Ⅰ.胚状体发生的组织细胞学观察

以葡萄（ＶｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａＬ．）的花药和花丝为实验材料，观察了葡萄离体培养中胚状体的发生发育过程．结果表明：（１）葡萄的花药和花丝经诱导都可形成胚性和非胚性两类不同的愈伤组织，与外植体来源无关，胚状体经胚性愈伤组织产生．（２）胚状体多起源于胚性愈伤组织表层或表层以下的单个细胞，这些细胞核大，细胞质浓，染色深，在表层者易于脱落而处于单个离散状态，它们的第一次分裂有均等分裂，也有不等分裂，经２细胞、３细胞、多细胞原胚等阶段发育为成熟的胚状体．（３）葡萄胚状体具有与双子叶植物合子胚相似的发育过程