蚯蚓钙结合蛋白的分离纯化及性质的研究

以赤子爱胜蚓为材料分离纯化了钙调素，并得到一种新的钙结合蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳鉴定，这两种蛋白均表现为一。ＣａＭ分子量为１８．９ｋＤ，ＮＣＢＰ为１６ｋＤ，等电点分别为３．６和４．３，两种蛋白具有不同的肽谱。     

催化杀虫剂西维因水解的抗体酶制备

以杀虫剂西维因酯解反应中间过渡态的结构信息进行分子设计，合成了α－萘基磷酸氢酯半抗原，将其与载体蛋白牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和鸡卵清蛋白（ＣＥＡ）偶联，制得了具有不同抗原价（４－２２）的合成抗原，经小鼠免疫学实验，优选出可产生滴度高，特异性强之抗血清的免疫用抗原（Ｈａｐ－ＢＳＡ）经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定，用该免疫原制得的鼠抗血清滴度可达１：３２０００优选的Ｈａｐ－ＢＳＡ可被用作产生催化相     

催化杀虫剂西维因水解的抗体酶制备(Ⅰ)抗原的分子设计、合成与优选

以杀虫剂西维因酯解反应中间过渡态的结构信息进行分子设计，合成了α－萘基磷酸氢酯半抗原，将其与载体蛋白牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和鸡卵清蛋白（ＣＥＡ）偶联，制得了具有不同抗原价（４～２２）的合成抗原．经小鼠免疫学实验，优选出了可产生滴度高、特异性强之抗血清的免疫用抗原（Ｈａｐ－ＢＳＡ）．经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定，用该免疫原制得的鼠抗血清滴度可达１∶３２０００．优选抗原Ｈａｐ－ＢＳＡ可被用作产生催化西维因水解之抗体酶的免疫原．     

植物钙调素的分离纯化及其特性研究

本文以烟草愈伤组织和花椰菜这花序为材料，分离纯化钙调素。所得ＣａＭ的纯度用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定；生物活性用其对牛心肌环腺苷酸磷二酯酶（ＰＤＥ）的激活作用测定（ＣａＭ）的产量用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定。并比较了上Ｐｈｎｅｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱前对ＣａＭ溶液的不同处理。纯化的烟草愈伤组织和菜花ＣａＭ，具有牛脑ＣａＭ所特有的一些性质。它对牛心肌ＰＤＥ有明显激活作用，在含有Ｃａ＾２＋     

重组人钙调素的表达及其McAb的制备与精子CaM定位

用基因重组技术构建人钙调素基因Ⅲ（ｈＣａＭⅢｃＤＮＡ）表达载体ｐＢＶ／ｈＣａＭⅢ,并在大肠杆菌ＤＨ５α中经热诱导获得可溶性ＣａＭ蛋白的高效表达．将纯化的重组ｈＣａＭ与异型双功能剂ＳＰＤＰ及鼠血清白蛋白（ＭＳＡ）交联,免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用常规细胞融合技术制备单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,得到３株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞．间接ＥＬＩＳＡ和斑点免疫结果证实,三种单克隆抗体均与自制的ｒｈＣａＭ和ＣａＭ标准品起特异反应．用免疫组化法对精子中ＣａＭ定位,发现ＣａＭ主要分布于精子头颈部,不育组ＣａＭ＋精子率（（４５．０±７．５）％）显著低于生育组（（６８．５±１０．５）％）．     

兔,豚鼠支气管败血性波氏杆菌ELISA检测方法的研究

用普通级兔，豚鼠身上分离的支气管败血性波氏杆菌菌株，经纯化，扩菌，超声波粉碎，４℃１００００转／分离心制备抗原，以ＨＲＢ酶标ＳＰＡ为结合物进行ＥＬＩＳＡ检测，并与分离培养相比较，结果表明ＥＬＩＳＡ检测结合与分离培养结果相一致，且具有方便快捷，特异性强的特点。     

红细胞生成素单克隆抗体制备及初步鉴定

为获取高效价的红细胞生成素（ＥＰＯ）单抗,以建立重组人红细胞生成素（ｈＥＰＯ）测定方法。用基因重组的ｈＥＰＯ与小鼠血清白蛋白经Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基－３（２－吡啶基二硫）丙酸酯（ＳＰＤＰ）交联后,常规免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,并用细胞融合技术制备分泌ｈＥＰＯＭｃＡｂ杂交瘤细胞;用间接ＥＬＩＳＡ和免疫印迹技术将ｈＥＰＯＭｃＡｂ与白色念珠菌胞质抗原的ＭｃＡｂ、嗜肺性军团病杆菌ＭｃＡｂ、ＨＣＶ核心肽ＭｃＡｂ、人μ链ＭｃＡｂ、ＩＦＮ－γＭｃＡｂ的间接ＥＬＩＳＡ同时进行特异性鉴定。经融合后检测,获取一株分泌ｈＥＰＯＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。初步鉴定,ｈＥＰＯＭｃＡｂ针对ｈＥＰＯ间接ＥＬＩＳＡ效价为１０－７（对照腹水为１０－３）;免疫印迹结果显示：此ＭｃＡｂ与基因重组的ｈＥＰＯ在分子量３０００～４０００之间有一条显色带,而其它几种ＭｃＡｂ均为阴性结果。小分子物质经与同种动物（免疫用动物）血清白蛋白交联后用作免疫抗原,可提高小分子物质的免疫原性,容易获取高效价的单克隆抗体。     

江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A2的免疫学研究

用江浙蝮蛇毒中纯化的中性磷脂酶Ａ２（ＮＰＬＡ２）免疫家兔，获得了多克隆抗体，抗体与抗原结合后，抑制了该抗原的神经毒性，而对其催化活力无影响，表明ＮＰＬＡ２有两个活性结构域，即神经毒性与催化活性分别位于两个活性位点上，利用免疫亲和层析纯化了ＮＰＬＡ２的多抗，经ＥＬＩＳＡ检测，与酸性ＰＬＡ２和碱性ＰＬＡ２均有免疫交叉反应，这提示了ＮＰＬＡ２与酸性ＰＬＡ２及碱性ＰＬＡ２的抗原决定簇有同源性。     

湖南省实验动物病毒检测及检测方法比较

湖南省实验动物病毒检测及检测方法比较李虹，陈宝珠湖南省卫生防疫站（长沙，４１０００５）根据卫生部颁布的“医学实验动物标准”和“医学实验动物监测手册”中病毒检测方法，结合湖南省的具体情况，我们用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、玻片免疫酶试验（ＥＩＡ）、...     

海洋渔业导航通信技术的现状和展望

海洋渔业导航通信技术的现状和展望＊ＴＨＥＳＴＡＴＵＳＡＮＤＰＲＯＳＰＥＣＴＯＦＮＡＶＩＧＡＴＩＯＮＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮＴＥＣＨＮＯＬＩＧＹＩＮＳＥＡＦＩＳＨＩＮＧ刘国平ＬｉｕＧｕｏｐｉｎｇ（舟山师范专科学校，舟山３１６００４）（Ｚｈｏｕｓｈａｎ...     

花椰菜钙调素和兔抗花椰菜钙调素的初步应用研究

用花椰菜ＣａＭ和兔抗花椰菜ＣａＭ建立了定量测定人血清中抗ＣａＭ自身抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法．兔抗花椰菜ＣａＭ和兔抗牛脑ＣａＭ对花椰菜ＣａＭ有基本相同的亲和力．用花椰菜ＣａＭ和牛脑ＣａＭ作为检测抗原，测定人血清中抗ＣａＭ自身抗体得到同样的结果．临床检测１４２例多种疾病患者血清的结果显示，抗ＣａＭ自身抗体水平升高与类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、肝硬化、过敏性紫癜等疾病有密切关系     

Ca^2＋对脱落酸诱导黄瓜离体子叶生根的影响

外源脱落酸(ABA)在诱导黄瓜离体子叶不定根的形成过程中,必须有 Ca~(2+)的存在,缺 Ca~(2+)时,ABA 对黄瓜子叶生根的诱导被明显地抑制,根的进一步生长也同样需要 Ca~(2+)的参与,表明 ABA 与 Ca~(2+)在不定根的发生过程中存在着协同效应。采用酶联免疫法(ELISA)和定磷法分别测定组织中 CaM 含量和活化态 CaM,发现培基中 Ca~(2+)的含量与组织中活化态 CaM 密切相关,且 CaM 较多地分布在根中,而Ca~(2+)对组织中可溶性蛋白总量无明显影响.由此推测,Ca~(2+)对 ABA 诱导生根的影响可能是通过调节内源活化态 CaM 含量而起的作用。     

Binding Sites of La~(3 ) on Camodulin

ＢｉｎｄｉｎｇＳｉｔｅｓｏｆＬａ３＋ｏｎＣａｍｏｄｕｌｉｎ＊ＦｅｎｇＹｕｐｉｎｇ（冯玉萍），ＹｕａｎＨａｏｄａｎ（袁浩丹）＋，ＺｈｏｕＹｕｘｉａｎｇ（周玉祥）＋，ＮｉｎｇＹｏｎｇｃｈｅｎｇ（宁永成），ＺｈａｎｇＲｉｑｉｎｇ（张日清）＋Ｄｅｐａｒｔｍｅ...     

Structure of the gating domain of a Ca2+-activated K+ channel complexed with Ca2+/calmodulin

Small-conductance Ca2+-activated K+ channels (SK channels) are independent of voltage and gated solely by intracellular Ca2+. These membrane channels are heteromeric complexes that comprise pore-forming alpha-subunits and the Ca2+-binding protein calmodulin (CaM). CaM binds to the SK channel through the CaM-binding domain (CaMBD), which is located in an intracellular region of the alpha-subunit immediately carboxy-terminal to the pore. Channel opening is triggered when Ca2+ binds the EF hands in the N-lobe of CaM. Here we report the 1.60 A crystal structure of the SK channel CaMBD/Ca2+/CaM complex. The CaMBD forms an elongated dimer with a CaM molecule bound at each end; each CaM wraps around three alpha-helices, two from one CaMBD subunit and one from the other. As only the CaM N-lobe has bound Ca2+, the structure provides a view of both calcium-dependent and -independent CaM/protein interactions. Together with biochemical data, the structure suggests a possible gating mechanism for the SK channel.     

Calmodulin bifurcates the local Ca2+ signal that modulates P/Q-type Ca2+ channels

Acute modulation of P/Q-type (alpha1A) calcium channels by neuronal activity-dependent changes in intracellular Ca2+ concentration may contribute to short-term synaptic plasticity, potentially enriching the neurocomputational capabilities of the brain. An unconventional mechanism for such channel modulation has been proposed in which calmodulin (CaM) may exert two opposing effects on individual channels, initially promoting ('facilitation') and then inhibiting ('inactivation') channel opening. Here we report that such dual regulation arises from surprising Ca2+-transduction capabilities of CaM. First, although facilitation and inactivation are two competing processes, both require Ca2+-CaM binding to a single 'IQ-like' domain on the carboxy tail of alpha1A; a previously identified 'CBD' CaM-binding site has no detectable role. Second, expression of a CaM mutant with impairment of all four of its Ca2+-binding sites (CaM1234) eliminates both forms of modulation. This result confirms that CaM is the Ca2+ sensor for channel regulation, and indicates that CaM may associate with the channel even before local Ca2+ concentration rises. Finally, the bifunctional capability of CaM arises from bifurcation of Ca2+ signalling by the lobes of CaM: Ca2+ binding to the amino-terminal lobe selectively initiates channel inactivation, whereas Ca2+ sensing by the carboxy-terminal lobe induces facilitation. Such lobe-specific detection provides a compact means to decode local Ca2+ signals in two ways, and to separately initiate distinct actions on a single molecular complex.     

蚯蚓钙调素结合蛋白的研究

以赤子爱胜蚓(Eisenia Foetida)为材料,通过DEAE-Fast Flow离子交换层析、CaM-Sepharose亲和层析,分离纯化得到蚯蚓钙调素结合蛋白(CaMBPs)。纯化的CaMBPs对CaM激活的环核苷酸磷酸二酯酶活性有抑制作用,而且这种抑制作用可通过加入过量的CaM达到完全恢复。SDS-PAGE显示CaMBPs有3条明显主带,在EGTA存在时表现分子量分别为62, 49和30kD。紫外扫描测定含量分别为7.17%,7.31%和51.8%。用生物素-CaM覆盖法检测到3种CaM结合蛋白,与SDS-PAGE结果一致。酶活性测定实验表明在蚯蚓CaMBPs中有Ca²⁺-ATPase活性,但无NAD激酶活性。     

钙调素参与植物线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）活性调节的研究

对纯化的玉米线粒体ＳＤＨ进行ＣａＭ含量测定电泳分析，对ＮＡＤＫ的激活及外源ＣａＭ对ＳＤＨ活性的影响研究，结果表明：ＳＤＨ中可能含ＣａＭ亚基，并且ＳＤＨ活性可能受Ｃａ（２＋）·ＣａＭ调节．     

小鼠宫腔内用醋酸棉酚的抗生育作用及其与钙调素的关系

于小鼠妊娠第３天每侧子宫角内注入０．１８ｍｇ醋棉酚混悬液（０．０５ｍＬ），对照组注入等量溶剂，结果表明，醋酸棉酚对小鼠有显著的抗生育作用，抗生育率为９３％，抗着床率为７７％，钙调素（ＣａＭ）含量的测定表明，实验组子宫组织的ＣａＭ含量明显低于对照，证明子宫内ＣａＭ的降低是局部用棉酚抗生育作用的机理之一。     

钙离子拮抗剂治疗高血压病患者过程中细胞内外钙调素水平的变化

从分子水平研究钙离子拮抗剂治疗高血压病的机制。用反转录聚合酶链反应法测定淋巴细胞内钙调素（ＣａＭ）基因的ｍＲＮＡ转录水平以及用ＲＩＡ法测定细胞外（即血清）ＣａＭ浓度,借以观察在用钙离子拮抗剂治疗高血压的过程中,细胞内外ＣａＭ水平的改变。发现随着正规服用钙拮抗剂治疗时间的延长,高血压患者淋巴细胞内ＣａＭ基因ｍＲＮＡ的转录水平亦受到抑制。服用钙拮抗剂时间长于３个月者,ｍＲＮＡ的转录水平显著降低（Ｐ＜０．０１）,而治疗时间在１个月之内者,ＣａＭ基因的转录水平无明显变化（Ｐ＞０．０５）。对于细胞外ＣａＭ的水平,在服用钙拮抗剂治疗时间＜１个月者,血清ＣａＭ浓度下降,而长期服用钙拮抗剂的患者则相对增高,但均无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。在用钙拮抗剂治疗高血压的过程中,细胞内和细胞外ＣａＭ的水平均发生变化。用钙离子拮抗剂治疗高血压病长于３个月者,细胞内ＣａＭ基因的ｍＲＮＡ转录水平明显受到抑制,而细胞外ＣａＭ浓度则无论服用钙离子拮抗剂时间长短,变化均不显著     

Involvement of Ca<Superscript>2+</Superscript>/CaM in the signal transduction of acetylcholine regulating stomatal movement

It has been known that the neurotransmitter acetylcholine (ACh) also exists in plants and is able to regulate the movement of stomata.In another aspect,Ca^2 /CaM as the second messengers have a critical role of signal transduction in stomatal guard-cell,Here we showed that Ca^2 /CaM were also involved in the ACh regulated stomatal movement,In the medium containing Ca^2 ,the Ca^2 channel blockers (NIF and Ver)and CaM inhibitors (TFP and W7 ) could neutralize the ACh induced stomatal opening,however,they are ineffective in the medium containing K^ ,Those results indicated that Ca^2 /CaM were involved in the signal transduction pathway of ACh regulating stomatal movement.