TDI对小鼠睾丸组织能量代谢的影响

研究甲苯二异氰酸酯(TDI)对雄性小鼠生殖细胞能量代谢的影响,探讨甲苯二异氰酸酯对雄性小鼠生殖损伤的机制.用分光光度法检测睾丸组织匀浆中琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)和ATPase的活性.TDI染毒两周后SDH、LDH及ATPase的活性均受到了抑制.在本实验染毒时间和染毒剂量范围内,TDI不仅干扰睾丸组织的有氧代谢及无氧代谢的供能过程,还干扰细胞对能量的利用.提示能量代谢障碍可能是TDI对雄性生殖细胞毒作用的机理之一.     

实验性甲肿小鼠睾丸肥大细胞对生殖的影响

研究了甲肿过程中小鼠睾丸肥大细胞（MC）的数量、分布及组织化学性质的改变.结果表明,随甲肿时间的延长,小鼠睾丸曲细精管管径较对照组显著增大（P〈0.05）,管壁厚度也较对照组显著增加（P〈0.05）;睾丸肥大细胞的数量逐渐增多,且均显著高于对照组（P〈0.01）,并有明显的脱颗粒现象.睾丸肥大细胞主要分布在睾丸被膜下、曲细精管基膜周围、睾丸间质小血管周围、间质内、附睾管周围及管壁上皮细胞之间,其红染、红蓝混染颗粒逐渐减少,蓝染颗粒逐渐增多,且临界电解质浓度（CEC）值逐渐减小.结果提示,甲肿过程中小鼠睾丸和附睾肥大细胞增多可直接或间接影响雄性生殖.     

穿心莲生殖毒性的量效关系研究

研究穿心莲对雄性小鼠精子、酶活力及睾丸组织结构的影响,并探讨穿心莲对受试小鼠影响的量效关系.实验分为分为7组,每组25只,空白对照组(给予相应体积的蒸馏水),穿心莲内酯组(315 mg/kg),其他5组灌服穿心莲提取物,分别为穿心莲提取物A组(75.35 g/kg)、B组(34.88 g/kg)、C组(16.15 g/kg)、D组(7.48 g/kg)和E组(3.46 g/kg)经口灌胃,每天1次,给药持续11周.分别在给药的第3、5、7、9、11周剖杀受试小鼠,称量体重及睾丸和附睾重量,测定精子数量和精子畸形率,测定睾丸中乳酸脱氢酶(LDH)及碱性磷酸酶(AKP)的活性并制备睾丸病理切片.与对照组相比,受试小鼠的睾丸和附睾的相对质量均显著降低(P0.01);小鼠精子数明显低于对照组,且在同一给药周期内,给药量越高降低程度越显著;精子畸形率高于对照组(P0.05,P0.01),且在同一给药周期内,给药量越高升高程度越显著;小鼠睾丸匀浆中LDH、AKP活性与对照组比较明显下降(P0.05,P0.01),且在同一给药周期内,降低程度与给药量成正比;受试小鼠的睾丸中曲细精管管壁变薄,管腔内成熟精子缺失;给药量越大出现损伤的程度越重.穿心莲提取物和穿心莲内酯对雄性小鼠具有生殖毒性作用,且存在一定的量-效关系.     

大天鹅睾丸和附睾的组织结构及EGF,Bax,Bcl-2蛋白和iNOS的表达

为了解大天鹅(Cygnus cygnus)睾丸和附睾的组织结构特征及相关活性物质的表达情况,用生物显微技术观察了大天鹅睾丸和附睾的组织结构,用免疫组织化学方法检测了EGF,Bax蛋白,Bcl-2蛋白和iNOS在睾丸和附睾中的表达.结果表明,大天鹅睾丸内生精小管主要由支持细胞和各级生精细胞构成,众多生精小管被睾丸间质隔开;附睾由输出小管和附睾管组成;大天鹅睾丸生精小管直径、生殖细胞大小、附睾管直径及上皮厚度等与其他脊椎动物存在差异;EGF,Bax蛋白,Bcl-2蛋白在睾丸生精小管管周的肌样细胞、精原细胞、精母细胞、精子细胞、间质细胞和附睾管上皮细胞等处呈免疫反应阳性;iNOS在睾丸间质内的血管壁及间质细胞、附睾管上皮细胞、附睾结缔组织等处有阳性表达;EGF可能参与其精子发生、获能及激素生成的调控过程;Bax蛋白和Bcl-2蛋白可能共同参与调控正常大天鹅睾丸和附睾细胞的凋亡;iNOS可能也参与雄性大天鹅各种生殖活动的调节.     

生殖域中特异表达的新基因Rcet2的克隆

利用NCBI中的数字差异显示数据库首先电子克隆了Rcet2基因,然后从成年小鼠睾丸组织中克隆出Rcet2全长基因,序列分析显示：Rcet2基因全长cDNA为454 bp,含3个外显子,编码88个氨基酸残基,该蛋白含1个不完整的半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域,但缺少半胱氨酸蛋白酶抑制剂关键的作用位点,而这些位点对半胱氨酸蛋白水解酶的抑制作用是重要的.小鼠多组织RT-PCR结果显示,Rcet2在成年老鼠大脑、睾丸和附睾生殖域中特异表达,睾丸中的表达高于附睾和大脑,Rcet2与半胱氨酸蛋白酶抑制家族2的Cres亚家族具有相似的特征,结果显示Rcet2可能是Cres亚家族中的一个新成员.     

小鼠睾丸TERT表达的增龄变化

应用免疫组织化学和图像分析方法研究了10,20,30,60,90天龄的小鼠睾丸不同分化类型生殖细胞中端粒酶催化亚基TERT的表达.结果发现在精子发生过程中精原细胞及成熟精子中均未见TERT阳性表达,而初级精母细胞尤其是粗线期精母细胞和精子细胞是高表达TERT的细胞类群,附睾管上皮细胞也呈TERT阳性表达;同时TERT在小鼠个体发育过程中的表达存在着从弱到强再到弱的动态变化趋势.结果表明TERT在小鼠睾丸中的表达特点与精子发生过程密切相关,可能对维持生殖细胞遗传物质的完整性和减数分裂的正常进行发挥着重要作用.     

TDI在小鼠血清中的代谢及代谢产物的鉴定

研究甲苯二异氰酸酯在小鼠血清中的代谢情况.采用高效液相色谱法,色谱柱:ODS(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相∶乙腈∶水(45∶55)(加0.22 g醋酸钠).在1.2~5.2 mol/L范围内,甲苯二异氰酸酯峰面积与浓度线性关系良好(r=0.999 8),甲苯二异氰酸酯在雄性小鼠血清中代谢生物半衰期为51.72 min,甲苯二异氰酸酯在雌性小鼠血清中代谢生物半衰期为111.77 min.用气相色谱-质谱法测定甲苯二异氰酸酯(TDI)在小鼠血清中的代谢产物,结果显示,2,4-TDI被代谢成2,4-TDA.     

TDI对靶器官的自由基损伤作用

为了揭示环境污染物甲苯二异氰酸酯(toluenediisocyanate,简称TDI)的毒性作用机制,采用静式吸入染毒从自由基损伤的角度观察了TDI对靶器官的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮(NO)的影响。结果表明,TDI可引起肺脏和睾丸的中MDA、NO含量增加,GSH和SOD在肺组织和睾丸组织中均有消耗,表明TDI可导致肺脏和睾丸内氧自由基(O2.)和一氧化氮自由基(NO.)的增多。提示:呼吸道接触TDI可引起靶器官的自由基损伤,研究结果为该环境污染物的预防和早期诊断提供实验基础。     

DBP暴露对雄性大鼠睾丸结构与功能的影响

目的利用成熟雄性大鼠为动物模型研究邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对哺乳动物生长发育及生殖的毒性作用.方法将40只健康雄性SD大鼠随机分成4组,分别为500,250,50 mg/(kg.d-1)3个染毒组和1个对照组,灌胃量为5 mL/kg体质量,灌胃法连续给药6周.对体质量、脏器系数等指标进行称量;对附睾中精子密度、精子畸形率等进行检测;对睾丸的组织学形态进行观察.结果与对照组比较,中、高剂量组体质量、睾丸、附睾及睾丸脏器系数指标有统计学意义(P0.05);体质量、右侧睾丸和右侧附睾与染毒剂量呈负性相关(r=-0.771 03,P0.001;r=-0.638 9,P0.001;r=-0.618 5,P0.05).高、中剂量组精子密度、精子活率分别与对照组和低剂量组比较均降低,差异均有统计学意义(P0.05);高、中剂量组总畸形率分别与对照组和低剂量组比较均增高,差异均有统计学意义(P0.05).结论一定剂量的邻苯二甲酸二丁酯对大鼠的生长发育及睾丸功能具有毒性作用.     

高效液相色谱法测定雄性小鼠生殖器官中牛磺酸的含量

采用高效液相色谱（HPLC）的方法检测了牛磺酸在雄性小鼠性腺和副性腺器官中的含量。结果显示牛磺酸在睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、输精管、背外侧前列腺、腹侧前列腺、前列腺前叶、精囊腺、尿道球腺中的浓度（μM/g wet）分别是1.66±0.02,3.77±0.25,7.54±0.45,10.19±0.23,9.31±0.45,6.09±0.67,6.62±0.43,4.14±0.05,12.55±1.03,7.50±0.64。结果表明,在雄性小鼠生殖器官中可能通过自身途径来合成牛磺酸。     

海糖平改善小鼠脂质代谢紊乱作用研究

研究射干茎叶提取物-海糖平（HTP）对高脂饲料诱导的小鼠脂代谢紊乱的改善作用. ICR小鼠连续12周高脂饲料喂养诱发脂质代谢紊乱. 造模成功后分别灌胃给予海糖平50,100,200 mg/kg BW,治疗4周,并以吉非罗齐胶囊（100 mg/kg BW）作为阳性对照药. 治疗结束后检测肝脏和血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）含量,附睾脂肪组织重量等指标,同时做肝脏组织病理检查. 结果显示海糖平能够降低肝脏中TG、TC水平及血清中TG水平,减轻附睾脂肪组织重量,减少肝细胞中脂滴的蓄积. 证实海糖平具有改善高脂饲料喂养小鼠的血清和肝脏中脂质代谢紊乱的作用.      

Mutation in the porcine SERPINA7 gene and its association with boar fertility

The porcine SERPINA7 gene is considered as a positional candidate gene responsible for testis size for its location on X chromosome and its biologically critical role in the development of testis. A nonsynonymous polymorphism (His226Asn or C678A) in the ligand-binding domain of SERPINA7 has been identified, which alters SERPINA7’s affinity to thyroxine and is closely associated with testis size. In this study, a primer mutagenesis strategy was developed to genotype this polymorphism in Chinese indigenous pigs and some western commercial pigs. The C allele existed in all tested Chinese indigenous and wild pigs, while the A allele is specific for western commercial breeds, indicating the occurrence of the mutation is of western origin. The correlation of this polymorphism with different boar fertility traits was assessed using a White Duroc × Erhualian intercross which included 110 F₂ mature boars. The results showed that the C678A polymorphism was closely associated with testis weight and epididymis weight (P＜0.0001 and P=0.0016, respectively) with significant heavier testis weight and epididymis weight in boars carrying the A allele than boars with the C allele. A significant correlation was also observed between this polymorphism and total sperm in the ejaculate (P＜0.01) as well as semen volume (P＜0.05). No statistically significant association of the C678A polymorphism with sperm concentration and sperm motility was found.     

SPF级与普通级Hartley豚鼠主要脏器系数的比较

目的测定SPF级和普通级Hartley豚鼠的主要脏器质量,比较屏障环境和普通环境下豚鼠脏器系数的差异。方法取2月龄SPF级和普通级豚鼠雌雄各30只,剖检取心、肝、脾、肺、肾等13个脏器,称其质量并计算脏器系数。结果SPF级和普通级Hartley豚鼠雌性之间比较,体质量、心、脾、肺、肾、肾上腺、子宫质量差异极显著（P〈0．01）;SPF级和普通级Hartley豚鼠雄性之间比较,心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾等其质量差异极显著（P〈0．01）。SPF级和普通级Hartley豚鼠雌性之间比较,心、脾、肺、肾、肾上腺、子宫的脏器系数差异极显著（P〈0．01）。SPF级和普通级Hartley豚鼠雄性之间比较,心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾的脏器系数差异极显著（P〈0．01）。结论SPF级和普通级Hartley豚鼠比,除脑以外的脏器系数均有显著差异,且普通级豚鼠的脏器系数普遍高于SPF级豚鼠。     

C57小鼠胸腺和睾丸中mPer1基因启动子区CpGs甲基化分析

利用实时定量PCR方法检测胸腺和睾丸组织中mper1基因表达时相特点,采用亚硫氢酸修饰法对两种组织两个时间点该基因2个启动子区域5个E-box CpGs甲基化情况进行研究.结果显示:C57 BL/6J小鼠胸腺和睾丸组织中mPer1基因表达没有显著波动性,mPer1基因启动子区CpGs呈低甲基化状态(<10%).两种组织中E3和E4甲基化频率存在显著差异(P<0.01).在睾丸中,不同时间点E3和E4甲基化频率有显著变化(P<0.01).说明在睾丸中,mPer1启动子E-box3的甲基化状态能够随时间波动.但在胸腺和睾丸中,甲基化并不是mPer1基因调节的主要方式.     

一条在人睾丸中高表达的新的环指蛋白(RNF20)

从人胎脑构建的cDNA文库中,通过大规模测序筛选的方法获得一条新基因,该基因蛋白序列含有1个环指（RING finger)基序及2个进核信号（nuclear localization signal NLS)序列,钭此基因命名为RNF20（RING Finger 20),用放射杂交细胞系（Radial hybrid RH)方法定位此基因在人染色体的9q22上,Northern杂交表明,其mRNA在睾丸组织中高表达,用小鼠睾丸做原位杂交表明,小鼠的同源基因在精原细胞及初级精母细胞中高表达,未成年小鼠睾丸中的精原细胞没有发达,提示RNF20可能参与精子发生的调控作用。     

泛素-蛋白水解酶复合体通路在小鼠精子变态中的作用

应用重力沉降法分离睾丸各层细胞,通过蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫迹观察各种生精细胞中泛素结合蛋白的表达规律,并通过免疫组织化学方法对其进行组织和细胞水平的定位,表明,在圆形精子和长形精子细胞中泛素结合蛋白增加,在成熟精子中量较低,在精原和精母细胞中量微弱。总蛋白电泳的结果表明,在精子变态过程中蛋白 变化以长形精子细胞转变为成熟精子阶段最为剧烈,其间许多蛋白消失同时半随一些新蛋白的出现,此阶段消     

三氯化铝对小鼠性腺的影响研究

为测定三氯化铝 (AlCl3)染毒后小鼠各性腺的重量及微量元素Zn、Cu含量 ,从微量元素角度探讨铝对小鼠性腺的毒性作用。采用二级昆明品系雄性小鼠 ,随机分为 3组 ,正常对照组 (简称对照组 )、三氯化铝低剂量染毒组 (简称低铝组 )、三氯化铝高剂量染毒组 (简称高铝组 )。实验结束后测定小鼠各性腺的重量和微量元素锌、铜含量。数据均经统计学处理。结果为高铝组使小鼠精囊腺和前列腺重量下降 (P <0 .0 5) ,使睾丸和包皮腺重量显著下降 (P <0 .0 1 ) ,对附睾重量不影响。微量元素含量与对照组比较 ,低铝组锌、铜含量虽有变化趋势 ,但尚未达到统计学意义 ,而高铝组与对照比较锌、铜含量显著变化 (P <0 .0 1 )。结论 :高剂量铝可影响雄性小鼠性腺重量和微量元素含量 ,使其微量元素失衡 ,对雄性小鼠性腺有毒性作用