净化室与层流架相结合饲养繁殖裸鼠经验

为创造一个净化环境饲养裸鼠,我们将旧动物房改造成11M~2和9M~2两间净化室,一间为裸鼠繁殖室,一间为裸鼠实验室。净化室空气经过初、中、高效三级过滤,由鼓风机送风,室内保持正压,净化室内放层流架饲养繁殖裸鼠。进入净化室的一切物品经过严格消毒后由传递窗传入,层层拆包进入层流架,工作人员洗澡后更换无菌服进入净化室。经过一年多的使用,取得了一定的效果。裸鼠繁殖平均产仔数6.8只,平均成活率80％,一年内进行了四次空气菌落检测,均达到100级净化标准。此外,还在实验室进行了裸鼠肿瘤实验,均取得满意的效果。通过一年的裸鼠繁殖,实验证明在外环境条件比较差的情况下,利用旧房屋改造建立裸鼠室是可行的。只要严格管理,合理操作,同样能取得满意的效果。     

SPF裸鼠在简易裸鼠饲育室培育的探讨

利用旧动物室改造成具有恒温、恒湿、洁净的饲育室,配合无菌操作技术,应用层流架饲养从上海肿瘤所引进的SPF裸鼠,经过四年对动物育种,饲养和无菌操作技术进行探讨。我们成功地培育了300只SPF裸鼠用于人胃高分化腺癌7911侈植瘤、人胃低分化腺癌MGC80-3裸鼠肝转移、人肝癌组织裸鼠移植瘤、人肝癌细胞株BEL-7102移植瘤、3.4苯丙吡诱发裸鼠皮肤癌等模型。在动物育种方面我们采用BALB/c非裸近交产生基因稳定核心群,BALB/c裸鼠与BALB/c核心群回交以保持BALB/c裸鼠基因的稳定性和一致,利用回交产生的雌性半裸鼠和维性全裸鼠生产裸鼠,淘汰半裸鼠。以此循环能准确断定仔鼠基因型,使留种,配种及繁殖方便准确。此繁殖方法生产断乳的仔鼠比杂交法断乳仔鼠平均体重增加2g,半裸雌鼠受孕率达82％,28和60日龄课鼠与同龄半裸或非裸鼠体重相差无几,已接近国内同行繁育裸鼠水平。在改造旧动物房繁殖裸鼠同时,我们严格采用无菌衣帽穿戴、消毒和无菌操作技术使层流架和房间每平皿菌落低于国外同类饲育室平均标准。     

简易裸鼠固定装置的制作

裸鼠为一种价格较昂贵的实验动物,因其体型小,性情较温和,实验中常采用徒手固定方法,虽然简便,却有一些不足之处。作者设计了一种简易的裸鼠固定工具,制作简单、使用方便。     

裸鼠人癌模型复制

裸鼠人癌模型复制陈系古，曾宪明中山医科大学实验动物中心由于裸鼠的免疫缺陷，在一定情况下，不排斥来自异种组织的移植，本实验室从１９８６年～１９９２年间，已成功地复制了近２０株人的瘤细胞系和人体原发癌组织移植建立了裸鼠人癌模型。现报导如下：材料与方法一、...     

“巨峰”葡萄稳产高产初探

葡萄是一种营养价值很高的优质水果。“巨峰”葡萄属于欧美杂交种，原产日本，适应性强，长势及结实能力较高，果穗大（约300～350克），圆锥形，果面软，汁多昧甜，有草莓香味。     

裸鼠饲养繁殖与应用研究

1990年,改建了一个约70m~2的裸鼠饲养繁殖与应用实验室。研究结果表明,该实验室设计科学、安全可靠、布局合理、切合实际、设施先进,投资少、见效快,其环境条件达到了SPF动物的饲养标准;裸鼠饲料中蛋白质的含量为25％;每胎平均产裸鼠4.2只,其成活率为73.3％;平均寿命为535.4±56.3天;用BALB/c-nu/+小鼠生产单克隆抗体,其效价高、品质好、产量增加50％以上;建立了人白血病、宫颈癌和膀胱癌三种肿瘤模型,并得到实验应用,取得了满意的结果。     

保证裸鼠饲养环境净化的有效措施

旧房改造的棵鼠饲养室，保证饲养环境净化和恒温，是我们四年来繁殖裸小鼠成功的主要经验。其主要措施是：加强工作人员责任心，严格无菌操作；严密的净化设施、净化室内放置层流架；层流架内放置带过滤帽的鼠盒；三保险净化措施；双制冷热空调器；科学的管理制度。室验表明，只要按以上措施施行，裸鼠的饲养环境可达到ＳＰＦ级，可保证裸鼠高质量的生产，并可进行高水平的实验研究。     

荷人鼻咽癌裸鼠血浆和鼻咽癌细胞株培养上清液MDA水平的动态变化

利用NC裸鼠复制人鼻咽癌(NPC)动物模型和低分化鼻咽癌细胞株(CNE_2)培养,检测不同时期荷人NPC裸鼠血浆MDA,以探讨荷瘤鼠血中自由基的变化规律和肿瘤的关系,并以CNE_(-2)细胞株为线索,检测CNE_(-2)细胞株培养上清液MDA,间接追踪荷人NPC裸鼠血中自由基变化的来源。结果表明荷人NPC裸鼠潜伏期血浆MDA已明显高于正常裸鼠(P<0.01),且荷人NPC裸鼠血浆中MDA从早期到中期逐渐升高,并达高峰,中期至晚期MDA渐下降,但仍高于正常水平(P<0.01); CNE_(-2)细胞株培养上清液中MDA明显高于人胚肺细胞株培养上清液所含MDA(P<0.01),并随着培养时间延长而增多。提示肿瘤发展与自由基水平的增高有关,荷人NPC裸鼠血浆MDA增高可能来源于肿瘤细胞自由基产生过多或清除不足。     

小型裸鼠屏障设施与管理

总结了裸鼠饲养繁殖与裸鼠实验研究二部分的屏障设施及其管理经验,包括无菌隔离器、层流架、洁净间、过滤帽鼠盒、高压蒸气消毒器等设备的布局,使用方法与检测要求。实践表明,建立小型屏障系统加之必需的辅助设备,可以完成裸鼠的扩大生产,并进行高水平的实验研究。     

裸鼠自发性肿瘤病理形态及免疫组化研究

从１９８１年至１９９５年１５年中使用２８５０只ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠进行人体肿瘤移植研究，发现４例裸鼠自发性肿瘤，发病率为０．１４％。病理形态及免疫组化证实其中３例为Ｂ细胞淋巴瘤，病变主要累及全身淋巴结及脾脏，肝、肾、肺有灶性肿瘤细胞浸润；１例为肛管高分化鳞状细胞癌。４例所移植的人体肿瘤均未生长。本文讨论了裸鼠自发性肿瘤的发病率及病理类型、移植瘤与自发瘤的相互关系及裸鼠自发瘤的发生原因。     

裸鼠LMLM转移癌模型的鉴定

建立了一株裸鼠淋巴道转移的LMLM瘤系,通过体外培养,建立了稳定的、可长期传代的LMLM癌细胞株,经染色体核型、LDH同功酶染色和Southern blotting分析,确定了LMLM癌的小鼠来源,并通过一系列抗体免疫病理鉴定,进一步确定LMLM是上皮组织来源的小鼠自发性肿瘤。裸鼠自发性皮下肿瘤,经体内皮下接种传代,取转移灶瘤块进行原代培养,得到稳定的可传代的细胞株,形态小而圆,大小一致,贴壁生长,每周传两代,群体细胞倍增时间48小时,经数月的体外传代培养,细胞形态及传代特性无明显变异。体外培养的LMLM癌细胞按常规方法制备染色体标本,可见典型的小鼠“V”形染色体,染色体数范围为36—59,平均数为40.76,有52％细胞染色体数为40条。LMLM癌原位灶及腋下淋巴结转移灶的LDH同功酶电泳行为完全相同,证实淋巴结转移癌细胞确实来源于原位肿瘤的转移,以小鼠肾脏的LDH同功酶谱作为对照,LMLM癌以LDHs为主,而与人小细胞肺癌NCI-H_128的比较,二者LDH的电泳行为完全不同,推论LMLM癌和H_128是两种来源无关的癌系。进一步用Soushern blotting方法鉴别LMLM癌的种系来源,人小细胞肺癌H_128在放射自显影中和人DNA探针呈强阳性杂交,并不受小鼠DNA预杂交影响,而LMLM原位灶和转移灶均不能和人DNA探针杂交。用人DNA预杂交,小鼠肺DNA作为探针,LMLM原位灶和转移灶呈强杂交,人H_128不能与之杂交,这从DNA水平证明,LMLM是小鼠来源的肿瘤。用一系列抗T、B淋巴细胞抗体,抗上皮细胞标志物抗体,抗间叶组织标志物抗体及抗神经内分泌标志物抗体进行免疫组化综合比较分析,结果为LMLM与抗淋巴细胞抗体、抗神经内分泌标志物抗体和抗间叶组织标志物抗体均呈阴性反应,而与部分抗上皮细胞标志物抗体EMA,Keratin反应阳性,故可排除淋巴系统肿瘤可能,不支持小细胞肺癌类的神经内分泌肿瘤,而是一种上皮来源的肿瘤。本实验通过染色体核型、LDH同功酶谱分析及Southern blotting杂交都较肯定地鉴别了LMLM癌的种系来源,并相互验证了实验结果的可靠性,并通过免疫组化鉴定提示该癌为上皮组织来源,LMLM癌的建立和鉴定为肿瘤转移机制研究和肿瘤转移的诊断、治疗提供了一个较好的动物肿瘤转移模型。     

Nc/s-nu/nu裸鼠遗传特性的初步研究

Nc裸鼠自1984年从日本引入我国,1986年引入中山医科大学称为Nc/s-nu/nu,已广泛应用在肿瘤学,免疫学及药理学等多个领域的研究。小鼠的某些同功酶和异构蛋白具有多态性,已成为研究小鼠遗传结构的标志。本组采用醋酸纤维膜电泳法对21只Nc/s-nu/nu小鼠群体中11个生化标志进行抽样检查,并计算分析其所代表的等位基因在Nc/s-nu/nu小鼠中出现的频率,用Hardy weinherg平衡公式进行吻合度检验,结果发现Nc/s-nu/nu是非近交系小鼠,可作为一个封闭群小鼠,其来源可能与CBA家族小鼠有血缘关系,还可能与RF,RFM,KK等一些品系实验小鼠中某个品系有血缘关系。本实验为我国Nc裸鼠的遗传背景作了初步的研究,也为我校Nc/s-nu/nu小鼠提供了必要的遗传数据。     

BALB/c裸鼠自发性淋巴瘤二例

对饲养在SPF环境中,鼠龄6个月的47只T细胞缺乏的BALB/c(nu/nu)裸鼠及26只T细胞正常的BALB/c(+/nu)杂合子小鼠进行病理观察,发现两只BALB/c(nu/nu)裸鼠生长自发性肿瘤。病理诊断分别为浆细胞样淋巴细胞型淋巴瘤和B免疫母细胞型淋巴瘤。肿瘤发生率为4.26％。而BALB/c(+/nu)杂合子小鼠未见肿瘤生长。     

人骨肉瘤在裸鼠不同部位的接种生长情况

报告6例入骨肉瘤分别接种于裸鼠腋部皮下,股骨旁肌肉间和肾包膜下三个部位的生长情况,以肿瘤体积测量法和放射性自显影术观察,结果显示:骨肉瘤异体移植10天后,肾包膜下移植瘤生长较好,皮下和肌间移植瘤生长较差。     

应用层流柜饲养裸鼠的体会

裸鼠是先天性胸腺缺陷动物 ,T细胞缺乏 ,是现今进行人癌异种移植的理想动物。然而由于裸鼠的饲养条件要求较高 ,使其应用受到了很多的限制。我们教研室经过几年的探索 ,在无菌实验室内使用层流柜 ,再加上比较严格的管理制度 ,成功地饲养裸鼠 18批次 ,5 6 0余只 ,都顺利地完成了实验。所以 ,在实验室条件下使用层流柜短期饲养裸鼠是可行的     

裸鼠人胃癌原位移植模型的建立

作者将ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞接种至棵鼠皮下，建立皮下移植模型并反复传代，以第八代移植瘤为材料，将瘤组织块种植到裸鼠胃壁，成功地建立了裸鼠人胃癌原位移植模型。该模型原位瘤沿胃壁呈浸润性生长，潜伏期为３－４周，以后迅速增长并与网膜粘连，约１２周以后部分动物出现肝转移，以后逐渐消瘦，生存期为１６－２４周，本方法原位成瘤率及局部浸润发生率均为１００％，且可出现肝脏转移，肿瘤生长过程与临床胃癌特点很类似，适用于人胃癌转移的研究。     

裸鼠自发性淋巴道转移肿瘤模型的建立

在裸鼠发现一例自发性皮下肿瘤,伴广泛淋巴结转移,经10代以上体内传代,在裸鼠体内长瘤及转移的特性稳定,原位长瘤率大于95％,潜伏期5—12天,转移率100％,平均荷瘤生存时间22天。大体解剖见腹股沟、腋下、颌下、腹腔等处有不同程度淋巴结转移。光镜和电镜的形态学检查见肿瘤细胞形态圆、较小、核大胞浆少,染色质呈块状、围裙状,分裂相多见,符合小细胞分化程度较差的恶性肿瘤,转移灶和原位灶形态学上相似。该可稳定传代、广泛淋巴道转移的小鼠肿瘤定名为LMLM瘤系。