不同时期肝硬化大鼠门静脉血与下腔静脉血中内源性硫化氢的比较

为观察H2S在不同时期肝硬化大鼠门静脉与下腔静脉血中浓度的变化,探索其在肝硬化发生发展过程中的作用.制备四氯化碳诱导的肝硬化大鼠模型,在第15d、第30d、第52d取大鼠门静脉及下腔静脉血检测H2S浓度.肝硬化早、中、晚期大鼠门静脉血和下腔静脉血中H2S的含量均显著低于正常对照组,且H2S浓度随着肝脏病变的加重而逐渐降低;在肝硬化中期及晚期,门静脉血中H2S的浓度明显低于下腔静脉.结果显示,实验性肝硬化大鼠门静脉血和下腔静脉血中H2S在肝硬化门脉高压高动力循环发生发展中起着重要作用.     

TGF-β1在实验性肝硬化中的免疫组化研究

目的:观察转化生长因子β1(transtorminggrowthtactor-BetalTGF-β1)在实验性肝硬化大鼠不同时期的免疫组化表达和定位情况,探讨其在肝纤维化发生病理机制中的作用。方法:用硫代乙酰胺(TAA)诱导肝硬化动物模型,同时设立正常对照组,采用免疫组化、计算机图像分析等技术,动态观察TGF-β1在正常对照组及肝硬化模型组不同时期的表达和定位特点,各组间进行统计学比较。结果:肝硬化模型复制成功,TGF-β1在实验性肝硬化不同发展时期,其表达亦逐渐增高差异有显著性(P<0.05)或高度显著性(P<0.01)。TGF-β1的表达在肝硬化模型组各个不同时期与正常组比较,差异有高度显著性(P<0.01)。结论:TGF-β1在实验性肝硬化不同阶段,其表达亦逐渐增高,提示TGF-β1在肝纤维化的发生发展中起着关键作用,TGF-β1可作为评价肝纤维化严重程度的重要指标之一,同时也为今后以TGF-β1为靶点的肝纤维化治疗提供了必要的理论依据。     

TAA诱导大鼠肝硬化bFGF的动态表达及作用

目的:动态观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在TAA(thioacetamide,TAA)诱导大鼠肝硬化形成中不同时期的免疫组化表达和定位情况,探讨其在肝纤维化发生病理机制中的作用及机制.方法:用硫代乙酰胺诱导肝硬化大鼠模型,同时设立正常对照组,采用免疫组化、计算机图像分析等技术,动态观察bFGF在正常对照组及肝硬化模型组不同时期的表达和定位特点,各组间进行统计学比较.结果:肝硬化模型复制成功,bFGF在TAA诱导肝硬化不同发展阶段,其表达逐渐增高,差异有显著性(P＜0.05)或高度显著性(P＜0.01),bFGF的表达在肝硬化模型组各个不同阶段与正常组比较,差异有高度显著性(P＜0.01).结论:bFGF在TAA诱导肝硬化发生发展过程中,其表达逐渐增高,提示bFGF在肝纤维化的发生发展过程中起着重要促进作用.     

CCI_4肝纤维化大鼠TGF-β_1表达的动态变化

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝纤维化过程中的变化及其意义.方法40%CCl4-花生油溶液皮下注射法制备CCl4大鼠肝纤维化模型.第3、5、7、9、11、13周分批处死对照组和实验组大鼠各5只,剖取动物肝脏,HE染色、Masson染色和免疫组化染色,观察肝纤维化和TGF-β1在大鼠肝组织的表达.结果在大鼠CC14肝纤维化形成过程中,TGF-β1的表达在肝损伤早期即明显增加,并随纤维化程度加重而逐步升高.结论TGF-β1表达与肝纤维化程度成正相关.     

大鼠实验性肝硬化形成过程中的病理变化对门静脉压力及血流动力学的影响

目的：通过对实验性大鼠肝硬化时门静脉压力与血流动力学的变化,了解门脉高压的形成过程。方法：采用治疗前后自身对照的方法,观察80只健康Wistar大鼠（注射前为对照组）及大鼠皮下注射四氯化碳后（实验组）肝组织的病理改变过程中其门静脉压力与血流动力学的变化。结果：实验性肝硬化过程中肝细胞经历了变性、坏死、纤维组织增生及假小叶形成;门静脉内径、血流速度、血流量在注射四氯化碳（CCl4）2周后明显升高（P〈0．05或P〈0．01）;15周时由于形成了侧枝循环,上述测值又明显降低（P〈0．01）;实验组门脉压力与充血分数除在10周时与对照组比较变化无统计学意义外（P〉0．05）,2、5、15周时与对照组比较,差异有显著性意义（P〈0．05或P〈0．01）;门静脉压力与内径、充血分数的相关系数分别为0．16、0．36（P〉0．05）。结论：大鼠在肝硬化形成过程中随着病理变化门静脉压力与血流动力学均发生动态变化。     

腹腔神经丛阻滞对GK大鼠胰岛素受体底物的影响

观察NCPB对GK(Goto-Kakizaki,GK)大鼠血糖及胰岛素受体底物的影响.构建25只非胰岛素依赖糖尿病(NIDDM)的雄性GK大鼠,随机抽取5只GK大鼠,以NCPB前表示,先进行口服葡萄糖耐受试验(OGTT),然后处死采取肝组织.其余20只GK大鼠随机分为对照组和NCPB组,每组10只.NCPB组给予双侧质量分数0.5%利多卡因进行NCPB,1 mL/侧,每天1次,而对照组以质量分数0.9%生理盐水替换.分别在14 d和28 d后取对照组和NCPB组各5只GK大鼠进行OGTT实验,通过Western Blot检测对照组和NCPB组肝组织中的胰岛素受体底物-1(IRS-1)、IRS-2表达以及IRS-1磷酸化情况.结果表明:NCPB组在14 d和28 d NCPB处理后,在0、60和120 min时的血糖均显著低于NCPB前(P0.05或P0.01)和对照组(P0.01),而血清胰岛素水平与NCPB前和对照组相差不显著;在14、28 d NCPB后NCPB组肝组织IRS-1和IRS-2蛋白表达水平与NCPB前相比均显著增加(P0.01),在相应时间点并显著高于对照组(P0.01);而对照组的肝组织IRS-1丝氨酸307残基的磷酸化水平在14、28 d NCPB后与NCPB前均有所上调(P0.05),NCPB组在相应时间点丝氨酸307残基的磷酸化程度均较NCPB前显著下降(P0.01),且均显著低于对照组(P0.01).NCPB可降低GK大鼠的空腹血糖,减轻GK大鼠糖耐量受损的程度,其机制可能与NCPB提高胰岛素受体底物的蛋白表达和抑制其丝氨酸磷酸化有关.     

清热利湿与益气古典方剂逆转二甲基亚硝胺大鼠肝硬化的细胞生物学基础研究

探讨了清热利湿的茵陈蒿汤与益气的黄芪汤逆转二甲基亚硝胺(di methylnitrosamine,DMN)大鼠肝硬化的细胞生物学基础.采用0.5%DMN生理盐水溶液4周12次腹腔注射法制备大鼠肝硬化模型,造模成型后终止DMN刺激,分组予以不同功效方剂经口给药2周,获取样本作相关指标的检测.TUNEL染色原位检测肝细胞凋亡并计算凋亡指数,免疫组织化学及Western blot方法分别检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、肝细胞生长因子α(he-patic growth factor-α,HGF-α)、CD68及基质金属蛋白酶13(MMP-13)的表达,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶2,9(MMP-2、MMP-9)的活性.与正常大鼠比较,模型大鼠肝细胞凋亡指数、CD68及α-SMA表达均显著增加,而HGF-α与MMP-13表达显著减少(P<0.01或<0.05);与同期模型对照组大鼠相比,茵陈蒿汤组大鼠肝细胞凋亡指数显著降低,CD68与MMP-13表达显著增加(P<0.01,P<0.05),黄芪汤组无显著变化;茵陈蒿汤组MMP-9活性显著增加(P<0.01)、而黄芪汤组显著降低(P<0.05);茵陈蒿汤组及黄芪汤组大鼠肝组织α-SMA表达均显著降低(P<0.01),而黄芪汤组显著低于茵陈蒿汤组(P<0.05),黄芪汤组大鼠肝组织HGF-α表达显著增加(P<0.05),MMP-2活性显著降低(P<0.05).这表明逆转DMN大鼠肝硬化的有效方剂具有不同的细胞生物学基础:茵陈蒿汤清热利湿的祛邪作用在于减少肝实质细胞的病理性凋亡、调控库普弗细胞功能;黄芪汤益气的扶正功效主要表现为抑制肝星状细胞活化及促进肝窦内皮细胞损伤的修复.     

硫代乙酰胺诱导大鼠肝纤维化模型合并肾脏病变

为建立硫代乙酰胺诱导大鼠肝纤维模型,分析肝组织病理切片及肝纤维血清指标等,并检查肾脏病理改变。方法:选取Wistar大鼠60只,随机分为对照组30只、模型B组、模型C组、模型D组,每组10只。根据大鼠体重,采用腹腔隔天注射硫代乙酰胺诱导肝纤维化,观察大鼠肝纤维化形成情况与肾脏组织学变化。结果显示,与对照组比较,模型组大鼠ALT、AST血清浓度均升高(P0.01),T-SOD活性显著降低,GSH-PX活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01)。模型C组与模型D组LN、HA与对照相比有明显差别(P0.01),模型D组CIV、PCⅢ与对照相比有明显差别(P0.05)。模型B组LN与对照组相比有明显差别(P0.01)。肝脏病理组织提示模型组大鼠肝细胞大量坏死,假小叶形成,肾组织有轻度病变。由此可知,硫代乙酰胺能诱导大鼠形成肝纤维化,并且造成肾脏病理改变。     

解毒化瘀颗粒对肝衰竭大鼠的作用机制——肝损伤和肝线粒体自噬蛋白Mfn1、Mfn2的影响

研究解毒化瘀颗粒对肝衰竭大鼠肝损害和线粒体自噬特异性蛋白Mfn1、Mfn2表达的作用。将180只SPF级Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和解毒化瘀颗粒给药组(JDHYKL组)。采用D-GalN+LPS复制急性肝衰竭大鼠模型。JDHYKL组给予解毒化瘀颗粒造模前5天开始灌胃给药,延续至成模后24 h,正常组与模型对照组分别给予等量蒸馏水代替。检测各组大鼠ALT,AST和TBIL水平;HE染色观察各组大鼠肝组织病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测线粒体自噬特异性蛋白Mfn1、Mfn2表达。经解毒化瘀颗粒治疗后大鼠肝组织肝细胞形态组织结构基本正常,细胞呈条索状排列,部分假小叶形成,肝细胞坏死及空泡化较模型组减轻,同时可明显降低LF大鼠ALT、AST(P0.05),提高Mfn1、Mfn2表达(P0.05)。解毒化瘀颗粒可能是通过上调Mfn1和Mfn2的表达抑制线粒体分裂,推动线粒体结合,降低碎片化现象,保护线粒体,而对大鼠肝衰竭发挥保护作用。     

CCI4肝纤维化大鼠TGF-β1表达的动态变化

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）在肝纤维化过程中的变化及其意义．方法40％CCI4-花生油溶液皮下注射法制备CCI4大鼠肝纤维化模型．第3、5、7、9、11、13周分批处死对照组和实验组大鼠各5只,剖取动物肝脏,HE染色、Masson染色和免疫组化染色,观察肝纤维化和TGF-β1在大鼠肝组织的表达．结果在大鼠CCI4肝纤维化形成过程中,TGF-β1的表达在肝损伤早期即明显增加,并随纤维化程度加重而逐步升高．结论TGF-β1表达与肝纤维化程度成正相关．     

Interaction between endogenous nitric oxide and carbon monoxide in the pathogenesis of hypoxic pulmonary hypertension

Hypoxic pulmonary hypertension, an important pathophysiological process in the development of a vari-ety of clinical cardiac and pulmonary diseases, has critical influence on the proceeding and prognosis of the dis- eases[1]. It is important to clarify the pathogenesis of the diseases. The discoveries of endogenous gas signal mole-cules, nitric oxide (NO) and carbon monoxide (CO), have been moving the research of hypoxic pulmonary hyper-tension to a very new phase. Our foregoing experiments …     

特殊染色在肝穿刺活检组织中的应用价值

目的探讨肝穿刺活检组织的病理形态学特征.方法选择57例慢性肝病穿刺活检标本,所有标本均进行HE染色、特殊染色(Masson及网状纤维染色),并观察与评估肝组织的炎症活动及纤维化程度.结果在57例肝穿刺活检病例中,慢性肝炎43例,非酒精性肝病4例,早期肝硬化6例,肝硬化4例,其中2例合并肝细胞癌.其炎症分级及纤维化分期属于G1/S0-1,G2/S2,G3/S3及G4/S4分别为23例、17例、8例及9例.结论肝穿活检是诊断肝损害程度的"金指标",并对慢性肝病的病因确诊及治疗具有临床指导意义.     

慢性肝病肝穿活检组织病理学研究

目的探讨慢性肝病患者肝穿活检组织病理学特征.方法筛选106例符合慢性肝病组织穿刺活检标本,所有标本行HE染色、Masson染色、网状纤维染色及D-PAS特殊染色,并评估肝穿组织炎症活动度及纤维化程度.结果 106例肝穿刺活检组织中检测出慢性肝炎86例,肝炎性早期肝硬化13例,肝炎后肝硬化7例,其中3例合并肝癌.在86例慢性肝炎中,轻度慢性肝炎44例,中度慢性肝炎33例,重度慢性肝炎9例.106例慢性肝病中,G1S0 12例,G1S1 39例,G2S2 26例,G3S3 19例,G4S4 10例.结论肝穿刺病理检查对评估肝组织活动度和肝纤维化分期具有重要价值.     

温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠脑组织Nrf2-ARE信号通路的影响

为探讨温肾醒脑方(WXD)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠认知功能的改善作用及对Nrf2-ARE信号通路的影响,将70只雄性SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、脑复康组(0.15 g/kg)、温肾醒脑方给药组(高剂量组5 g/kg、中剂量组2.5 g/kg、低剂量组1.25 g/kg),每组10只动物,采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型,给予温肾醒脑方灌胃治疗后,Morris水迷宫测试治疗后VD大鼠认知功能的改善情况,检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS),RT-PCR检测大鼠脑组织醌NADH脱氢酶(NQO1)、血红素氧合酶1(HO-1)的mRNA水平,运用Western Blot检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、NQO1、HO-1蛋白水平的表达情况以及EMSA检测Nrf2与抗氧化反应元件(ARE)结合力。结果表明:与正常组比较,VD模型组大鼠逃避潜伏期明显较长,游泳总距离明显缩短,穿越站台总数明显减少(P0.01);大脑组织中MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和NOS的含量明显减少(P0.01);同时大脑组织中细胞核Nrf2蛋白表达降低、细胞质中Keap1蛋白表达增加,NQO1、HO-1 mRNA和蛋白表达降低(P0.01)。与VD模型组比较,脑复康和温肾醒脑方组大鼠的认知行为得到很大的提高,脑组织MDA、SOD、GSH-Px、NOS含量和脑组织病理结构得到很好的改善,Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1在mRNA水平或蛋白水平上有一定程度改变,特别是温肾醒脑方组大鼠的改善非常显著。可见温肾醒脑方可以改善VD大鼠的认知行为,其机制可能与Nrf2-ARE抗氧化应激信号通路相关。     

HO-1在慢性鼻-鼻窦伴鼻息肉患者鼻息肉组织中的表达及调节机制研究

目的探讨血红素氧合酶1(HO-1)在慢性鼻-鼻窦伴鼻息肉患者鼻息肉组织中的表达及调节机制.方法 50例慢性鼻-鼻窦伴鼻息肉患者为鼻息肉组织组,30例单纯鼻中隔偏曲患者的钩突黏膜组织为对照组.采用实时荧光定量RT-PCR、免疫组化、Western blot检测鼻息肉和钩突黏膜组织中HO-1表达情况.另取钩突黏膜组织体外培养,检测不同细胞因子(IL-17A,TGF-β1)和地塞米松(DEX)刺激鼻黏膜组织中HO-1 mRNA的调节作用.结果HO-1 mRNA在鼻息肉组织中表达水平明显高于钩突黏膜组织,差异具有统计学意义(P0.05).鼻息肉组织中HO-1阳性细胞多分布于黏膜下腺体、上皮细胞、炎性细胞;HO-1阳性细胞数明显多于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).鼻息肉组织中HO-1蛋白表达水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).IL-17A可明显提升HO-1 mRNA表达水平;TGF-β1,DEX可明显降低HO-1 mRNA表达水平;且IL-17A,TGF-β1,DEX刺激具有浓度依赖性.DEX与IL-17A联合刺激组和DEX与TGF-β1联合刺激组的HO-1 mRNA表达量均明显低于IL-17A单独刺激组,差异具有统计学意义(P0.05).结论 HO-1作为拮抗氧化剂在鼻息肉组织氧化应激过程中被反馈性诱导上调,而糖皮质激素可抑制其表达上调.     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化-肝癌动物模型的建立

目的 建立大鼠肝纤维化-肝癌模型并动态观察大鼠肝纤维化-肝癌发生过程中的病理形态特点.方法 用0.01％二乙基亚硝胺（DEN）溶液间断喂养SD大鼠诱发肝癌,对大鼠肝脏在不同诱癌阶段的病理变化进行动态观察.结果 用药第4周后,肝细胞点状坏死及炎性细胞浸润;8周时,肝细胞严重脂肪变性、灶性坏死,门管区出现纤维组织增生;9-12周时,增生的胶原束包绕并分割肝小叶,正常的肝小叶结构被破坏,假小叶形成;15周后存活大鼠均形成肝癌,肝癌细胞排列成条索状或团块状,诱癌组为100％成癌（8/8）.结论 成功建立从肝纤维化发展成肝癌的动物模型,设立间歇期提高了大鼠癌变末期的成活率,该模型是动态研究肝癌发生发展进程的理想动物模型.     

诱导型血红素氧合酶在腹泻型肠易激综合征患者中的表达

本研究旨在通过灌注导管测压仪和免疫组化技术,检测24例腹泻型肠易激综合征患者（diarrhea predomlnant irritable bowel syndrome,D-IRS）及15例对照组的直肠压力、直肠对容量刺激的感觉阈值和结肠粘膜中诱导型血红素氧合酶（inducible heme oxygenase,HO-1）表达,以探讨HO-1在D-IBS发病机制中的作用。肠道测压结果显示腹泻型IBS患者的静息压、最大自主收缩压和排便压与对照组比较差异无显著性（P〉0．05）,但初始感觉阈值、排便阈值和最大耐受阈值明显低于对照组（P〈0．01）;HO-1在腹泻组IBS患者结肠粘膜中的表达也明显强于对照组（P〈0．01）。因此HO-1在腹泻型IBS患者结肠粘膜中的表达异常,表明一氧化碳（carbon monoxide,CO）在腹泻型IBS的发病机制中可能起重要作用。     

Inflammasome-mediated dysbiosis regulates progression of NAFLD and obesity

Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is the hepatic manifestation of metabolic syndrome and the leading cause of chronic liver disease in the Western world. Twenty per cent of NAFLD individuals develop chronic hepatic inflammation (non-alcoholic steatohepatitis, NASH) associated with cirrhosis, portal hypertension and hepatocellular carcinoma, yet the causes of progression from NAFLD to NASH remain obscure. Here, we show that the NLRP6 and NLRP3 inflammasomes and the effector protein IL-18 negatively regulate NAFLD/NASH progression, as well as multiple aspects of metabolic syndrome via modulation of the gut microbiota. Different mouse models reveal that inflammasome-deficiency-associated changes in the configuration of the gut microbiota are associated with exacerbated hepatic steatosis and inflammation through influx of TLR4 and TLR9 agonists into the portal circulation, leading to enhanced hepatic tumour-necrosis factor (TNF)-α expression that drives NASH progression. Furthermore, co-housing of inflammasome-deficient mice with wild-type mice results in exacerbation of hepatic steatosis and obesity. Thus, altered interactions between the gut microbiota and the host, produced by defective NLRP3 and NLRP6 inflammasome sensing, may govern the rate of progression of multiple metabolic syndrome-associated abnormalities, highlighting the central role of the microbiota in the pathogenesis of heretofore seemingly unrelated systemic auto-inflammatory and metabolic disorders.     

VG染色对慢性肝病肝纤维化的研究

目的：应用组织化学染色对６１例肝活检标本进行研究,观察胶原纤维在慢性肝病组织中的分布,研究由慢性肝炎到肝硬化肝纤维化的形成过程。方法：应用ＶＧ染色显示慢性肝病组织中的胶原纤维,光镜观察。结果：胶原纤维染成粉红色,形成间隔分割肝实质。结论：ＶＧ染色对慢性肝病有诊断学意义。肝实质内的纤维组织可能来源于成纤维细胞和贮脂细胞。