文冠果降血压肽的制备及其活性研究

以文冠果蛋白为研究对象,采用酶解法制备文冠果蛋白酶解肽,并对其体外抗高血压活性进行研究。以水解度为指标确定酶解条件。蛋白水解物经超滤得到分子量为1k Da,1~5 k Da和5 k Da 3个区段的多肽组分,测定其对血管紧张素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)的抑制率。最佳酶解条件为:底物质量浓度40g/L,加酶量8%(质量分数)(碱性蛋白酶),酶解时间175 min,酶解温度55℃和酶解p H 9.0,此条件下水解度最高为22.97%;3种多肽组分中1k Da的ACE抑制率最高为83.43%,其半抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)为0.394 mg/m L。文冠果蛋白酶解多肽具有显著的体外抗ACE活性,可作为降血压肽的开发原料。     

大豆多肽研究进展

大豆多肽是大豆蛋白经过控制性水解而制成的低分子活性肽的混合物．本文报告了大豆多肽的研究现状：大豆多肽的性质、制备工艺、苦味的产生及消苦方法等,并指出目前研究和开发中存在的主要问题．     

正交实验确定Alcalase水解大豆蛋白的最佳实验条件

采用枯草杆菌碱性蛋白酶Alcalase(标注酶活力2.4Au/g)作为水解酶对大豆蛋白进行水解,得到大豆多肽溶液。以大豆蛋白的水解度(DH)来表征大豆蛋白水解反应进行的程度。选择水解反应温度、pH值、酶浓度作为三个影响因素分别取三个水平,以水解度为指标进行三因素三水平正交实验。实验结果得到的最佳实验条件为底物浓度为8%,酶浓度(E/S)为3.6Au/100g底物,温度T60℃以及pH为8.0。     

血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的酶法制备

以扇贝裙边的酶解产物——蛋白多肽对ACE活性的抑制率作为控制水解程度的指标,确定制备ACE活性抑制肽的最佳酶种及酶解工艺技术条件.通过胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合风味酶、枯草杆菌蛋白酶5种酶酶解扇贝裙边得到的蛋白多肽对ACE抑制能力的比较发现,5种酶在不同酶解时间所得到的酶解蛋白多肽都具有一定的ACE抑制能力,其中胃蛋白酶酶解蛋白多肽的ACE抑制率最高,为91.33%;再经L9(3)4正交实验对胃蛋白酶酶解工艺条件进行优化,确定酶解反应最佳条件是酶量400 U.g-底1物,pH 2.5,温度32℃,底物浓度(原料∶水)1∶2,酶解时间3 h;试验结果还表明,单酶(胃蛋白酶)的酶解蛋白多肽比复合酶(复合风味酶)和双酶(胃蛋白酶 木瓜蛋白酶)的酶解蛋白多肽对ACE活性的抑制能力都强.     

蛋白酶解大豆多肽的理化特性

以大豆蛋白为原料,利用微波加热和碱性蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶水解大豆蛋白,制备单酶、双酶、三酶联合水解的大豆多肽,用葡聚糖G-50排阻色谱法进行分离检测,确定各级分的分子量分布范围.凝胶层析分析结果表明,三酶联合水解得到的大豆肽相对分子质量分布主要在1 100 u以下,而双酶联合水解则在2 000 u以下,可见三酶联合水解效果优于双酶,更优于单酶.此外,物化特性研究表明,蛋白酶水解使得大豆蛋白溶解性、起泡性及起泡稳定性等大大改变.大豆多肽具有良好的溶解性,在蛋白质的等电点附近,不受pH值的影响,且具有高浓度、低粘度的特点,以及良好的吸湿性、保湿性和热稳定性和强起泡能力.     

枯草芽孢杆菌发酵大豆过程中水提物的ACE抑制活性的变化

研究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SY发酵大豆过程中样品水提物的血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的变化,并从蛋白质变化的角度进行分析.结果表明:发酵前期样品的ACE抑制活性迅速增加,然后降低并保持平稳,发酵12,h样品的IC50值为0.312,mg/m L;中性蛋白酶活力在前36,h迅速增至718,U/g,多肽及游离氨基的含量也相应逐渐增加并趋于稳定.可见,大豆蛋白质的适度降解有利于产品保持良好的ACE抑制活性,在控制发酵进程的条件下,枯草芽孢杆菌SY有望应用于发酵大豆食品的生产来获得具有潜在调节血压作用的产品.     

pH渐变条件下双酶协同水解大豆蛋白

研究了在没有外加碱的pH渐变条件下．用枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2．4L,酶活力2．4AU/g)和黑曲霉酸性蛋白酶(酶活力3000u／g)双酶协同水解从大豆蛋白制备寡肽(10个氨基酸以下的肽)水解物的可行性．考察了单酶单因素水解条件、双酶加入方式对大豆蛋白降解率和蛋白质水解度的影响,并在此基础上通过正交试验进一步优化出双酶一次性投料方案下水解大豆蛋白的最佳条件：水解温度为60℃．碱性蛋白酶加入量为每g蛋白15μL,酸性蛋白酶加入量为6％,底物浓度为40g／L,水解时间为18h．在上述最佳条件下,大豆蛋白的降解率可达76％,蛋白质的水解度可达26％,水解物中相对分子质量小于1350的寡肽达到了66％．结果表明,在不外加碱的条件下,采用双酶协同水解方法能够显著提高大豆蛋白降解率以及蛋白质水解度．     

大豆分离蛋白酶解过程的研究与产物分析

将大豆蛋白（ＳＰＩ）经过Ａｓｌ．３９８中性蛋白酶水解，可以获得良好溶解性的多肽，氢基酸及ＩＳＳＰＨ等极有利用价值的大豆水解产物．本文探讨大豆分高蛋白经酶水解后产物（ＳＰＨ）的水解度及粘度变化．通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，半微量－凯氏定氮法，Ｇ－２５凝胶过滤，双缩脲法和茚三酮法分析ＳＰＨ的可溶上清液和不溶渣滓中成分变化情况，并探讨了水解大豆蛋白在食品上的应用．因为其在营养上有更多的优点，可以作为功能型食品的原料开发出具有生理活性作用的食品．     

酶解牦牛乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

目的:乳清蛋白是牦牛乳中的重要成分,其经酶解制备的乳源性ACE抑制肽以安全性高和无副作用等优点在高血压的防治中具有重要的研究和应用价值.本实验研究利用乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺技术.方法:本实验对从耗牛乳中提取的乳清蛋白,分别根据碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶各自的最适pH及温度,采用酶解法制备ACE抑制肽,以ACE抑制活性为指标初步筛选出最佳水解酶,并探究最佳酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳反应条件.结果:碱性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳水解酶,英最佳反应条件为:pH8.5、温度60℃、E/S为5.5％、水解6h.制备的ACE抑制肽抑制率可达到85.2％.结论:碱性蛋白酶为最佳酶选,用碱性蛋白酶制备的ACE抑制肽体外抑制率较高,符合工业生产要求.这为进一步优化乳清蛋白降血压肽的制备工艺提供依据.     

雅致放射毛霉AS3.2778碱性蛋白酶的制备及应用

毛酶蛋白酶对大豆蛋白具有较高的水解效率以及对蛋白水解物良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,采用离子交换,疏水层析及凝胶层析对其进行了分离纯化,从雅致放射毛霉As3.2778的发酵麸曲中分离纯化出一种蛋白酶,其纯度提高了22.7倍,酶活回收16.1%,最终比酶活可达到6094u/mg。电泳分析发现,该蛋白酶在还原及非还原条件下均显示出单一条带,表明该酶已达到电泳纯,并且是一单体蛋白,其分子量大约在32KDa。酶谱分析表明,纯化的蛋白酶仅为原发酵麸曲中三种蛋白酶组分中的一种。以大豆蛋白为底物,探讨了纯化后的蛋白酶对大豆蛋白的水解效果。结果显示,该蛋白酶在55℃,pH8.0～10.0的条件下对大豆蛋白显示出较强的水解能力。对比实验发现,纯化的毛酶蛋白酶对大豆蛋白的水解效果优于Papain、Alcalase及Protamex,表明该蛋白酶具有更为广泛的肽键选择性,对大豆蛋白亲和力更强,在大豆蛋白肽链上存在相对较多的酶切位点。     

胃蛋白酶前处理对大豆蛋白酶解特性的影响

为了改善大豆蛋白酶解效果,采用胃蛋白酶对自制碱溶酸沉的大豆蛋白酶解2h使其球蛋白组分水解,之后继续用Alcalase和Protamex酶解,并用SDS-PAGE和GPC对酶解产物的分子质量分布进行分析.结果显示:与未使用胃蛋白酶处理的单酶酶解相比,胃蛋白酶前处理可提高大豆蛋白回收率和水解度及酶解产物的抗氧化能力指数( ORAC值),最高分别为95.4％、23.1％和1078.6,提高了39.9％、35.9％和38.5％;使用胃蛋白酶前处理的酶解产物分子质量绝大部分在10ku以下,其中大部分在1～5ku之间.以上结果表明:胃蛋白酶前处理能促进大豆蛋白的酶解并增强酶解产物的抗氧化活性.     

Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究

研究了Alcalase蛋白酶对大豆分离蛋白的水解作用,分析了pH、温度、酶浓度、底物浓度和水解时间对大豆分离蛋白酶解的影响,通过单因素分析、正交试验,确定了Alcalase蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解条件,即pH8.0,温度60℃,酶浓度1000U/g,底物浓度3%,水解时间2h.     

重组降血压肽多肽序列的设计及表达系统构建

通过分析降血压肽结构与功能的关系,设计并合成5条降血压肽序列,通过活性测定以及体外消化试验,确定P3（六肽）为理想降血压肽,为实现该小肽在大肠杆菌中的表达,经特定酶切位点将其串联为6拷贝的融合多肽,将相应的基因序列克隆至表达载体pGEX-4T-2并转化至宿主茵Escherichia coli BL21中,双酶切、PCR以及测序结果均表明成功构建了重组质粒pGEX-4T-2-ACEIP。     

短讯

紫菜降血压肽制备技术研究江苏大学开发的“紫菜降血压肽制备技术研究”日前通过省科技厅组织的鉴定.该成果建立了超声波与酶水解耦合技术制备条斑紫菜降血压肽的方法,进行了条斑紫菜降血压肽的纯化与结构鉴定,从条斑紫菜酶解液中获得了Cys-Ser-Asn-Arg和Pro-Cys-His-Trp两条新的高活性降血压肽,其抑制ACE活性的IC50值分别为24.71和5.38μg/ml,具有良好的耐高温性和酸稳定性.条斑紫菜降血压肽对原发性高血压大鼠具有降血压作用,呈量效关系.该研究成果将与南通、连云港等我省重要的紫菜产地企业、我省乃至全国的功能食品、医药等高新技…     

紫菜降血压肽制备技术研究

江苏大学开发的“紫菜降血压肽制备技术研究”日前通过省科技厅组织的鉴定．该成果建立了超声渡与酶水解耦合技术制备条斑紫菜降血压肽的方法，进行了条斑紫菜降血压肽的纯化与结构鉴定，从条斑紫菜酶解液中获得了Cys—Ser—Asn—Arg和Pro—Cys—His—Trp两条新的高活性降血压肽。其抑制ACE活性的IC50值分别为24．71和5．38μg／ml，具有良好的耐高温性和酸稳定性．条斑紫菜降血压肽对原发性高血压大鼠具有降血压作用，呈量效关系．该研究成果将与南通、连云港等我省重要的紫菜产地企业、我省乃至全国的功能食品、医药等高新技术企业密切联系、合作。加速产业化进程．     

碱性蛋白酶水解豆粕制备ACE抑制肽水解条件的优化

为了寻求高效的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽制备方法,在实验室条件下利用碱性蛋白酶水解豆粕生产ACE抑制肽,并采用单因素和多因素实验相结合的方法对酶解条件进行优化.结果发现,适当延长碱性蛋白酶的水解时间和提高p H,可大幅度提高ACE抑制肽的抑制活性.单因素和多因素实验综合结果显示,碱性蛋白酶水解豆粕产生ACE抑制肽的适宜水解条件为:p H为9.0,水解温度为50℃,水解时间为4 h,蛋白酶质量分数(酶质量/底物质量)为2.0%,底物质量浓度为40 g/L,在此条件下制备的ACE抑制肽的抑制率可达到97.97%.     

降低烘烤花生致敏性的蛋白酶筛选

花生经过烘烤后致敏性增强,水解是降低过敏原致敏性最有效的方法,研究的目的在于筛选有效降低烘烤花生致敏性的蛋白酶.结果表明:Alcalase蛋白酶脱敏效果最好,胃蛋白酶作用效果最不明显.水解效率高的Alcalase、Flavorzyme、Protamex和Protease M蛋白酶两两组合水解花生蛋白,较之单酶水解情况,水解度提高显著,但是花生致敏性降低并不明显,因此研究中Alcalase碱性蛋白酶是降低烘烤花生致敏性的最佳用酶.     

紫贻贝酶解多肽体外抗肿瘤活性研究

确定了紫贻贝胰蛋白酶水解时的最佳条件,研究了紫贻贝酶解多肽的体外抗肿瘤活性.采用正交实验方法, 以料液比、pH、加酶量、酶解温度和酶解时间为因素,以酶解液的氨基氮含量和肿瘤细胞增殖抑制率为指标进行L16(45)正 交实验,MTT法检测酶解多肽对DU-145、PC-3、H1299和MGCS0-3等肿瘤细胞的抑制活性;HE染色法观察酶解多肽对 肿瘤细胞形态的影响;免疫组化法检测酶解多肽对细胞中Bel-2表达的影响.结果表明:当料液比为1:4、pH为8.5、加酶 量为1 000 U/g、温度为45℃、酶解时间为5h时酶解多肽的水解度最大;当料液比为1:4、pH为8.0、加酶量为1 500 U/g、温 度为40℃、酶解时间为2h时酶解多肽的抗肿瘤活性最强,该肽可以下调肿瘤细胞中Bc1-2的表达.紫贻贝酶解多肽具有 抗肿瘤活性,可能是通过诱导细胞凋亡来实现的.     

Alcalase酶解蛋清粉制备抗凝血肽的工艺优化

采用Alcalase碱性蛋白酶酶解蛋清粉制备食源性抗凝血肽。结果表明:底物浓度过大会抑制水解度的增长,底物质量分数为1%时蛋白质完全水解后的产物抗凝血活性最佳;高温和低温均对水解度有影响,低温酶解产物的抗凝血活性较好;pH值对水解度的影响与Alcalase的最适pH值有关;pH值为7时,抗凝血活性最好;酶/底物浓度增大,但底物不变的情况下,对水解度的提高不明显,酶/底物浓度过大,导致抗凝血活性降低。考虑交互作用经试验优化设计确定的酶解最佳工艺参数为:底物质量分数为1%,酶解温度为50 ℃,酶/底物质量分数为5%,酶解pH为8。在该条件下水解2 h,凝血抑制率达到68.92%。     

白蛋白多肽体外抗氧化的研究

通过碱性酶和胃蛋白酶在最适条件下对鸡卵清白蛋白进行水解,并比较了两种酶解产物白蛋白多肽在体外的抗氧化活性。结果表明,碱性酶酶解产物体外抗氧化活性优于胃蛋白酶酶解产物;但随着白蛋白多肽浓度增加,其抗氧化活力均增强,还原能力也加强,在一定浓度范围内,白蛋白多肽均具有较强的清除.OH的效果,且白蛋白多肽均无助氧化作用。