蚯蚓纤溶酶研究与应用进展

蚯蚓纤溶酶作为新一代口服溶栓药物已试用于临床。对蚯蚓纤溶酶的生化及药理性质的研究日益深入。概述了蚯蚓纤溶酶的生化特性、药理性质和临床应用研究的最新进展。     

大平2号蚯蚓纤溶酶酶活的测定

本文以大平2号蚯蚓为材料,制作了纤溶酶纤维蛋白水解活性测定曲线及纤维蛋白溶酶原浓度选择曲线,确定了酶活的最佳测定范围扣测定条件。测定结果表明:大平2号蚯蚓所产生的纤溶酶具有很强的纤维蛋白水解活性和纤维蛋白溶酶原激活活性,是一种很有希望的溶栓药物。     

蚯蚓纤溶酶壳聚糖微球的制备及性质

以蚯蚓纤溶酶为生物大分子模式药物,研究壳聚糖载药微球的制备方法及对药物活性和稳定性 的影响.以壳聚糖为原料,采用超声乳化交联法制备壳聚糖微球,分别吸附和包埋蚯蚓纤溶酶.在油水体积比 15/1,搅拌转速800 r/min,1 mL戊二醛作为交联剂,超声处理5 min条件下乳化交联制备微球,包埋法具有 较高的栽药率和...     

蚯蚓纤溶酶研究与应用进展

蚯蚓纤溶酶作为新一代口全药物已试用于临床。对蚯蚓生化有药理性质的研究日益深椁蚯蚓纤溶酶的生化特性。药理性质和临床应用研究的最新进展。     

蚯蚓纤溶酶与“龙心”的比较研究

以北星二号蚯蚓为材料,分离纯化蚯蚓纤溶酶。并对其理化性质、溶纤机理等与“龙心”进行了比较。蚯蚓纤溶酶和“龙心”主要组份的分子量分别为37200和43500。蚯蚓纤溶酶和“龙心”的溶纤比活力(mm~2/mg蛋白)分别为83700和24430蚯蚓纤溶酶既能直接水解血纤维蛋白,又能激活血纤溶酶原。在0—4℃时也能水解血纤维蛋白。蚯蚓纤溶酶经DEAE-Sepharose离子交换柱层析,可分离为9个纤溶活力不同的组分。     

溶栓剂的研发现状及展望

由血栓引起的血栓性疾病是一种常见的心脑血管疾病。溶栓剂是预防与治疗心脑血管疾病的主要抗血栓药物。本文总结性地概述了目前国内外各种新型溶栓剂的溶栓机理、临床应用效果及其副作用等。其中,第三代溶栓剂组织型纤溶酶原激活剂变异体、导向溶栓剂、嵌合体溶栓剂,以及部分天然溶栓剂包括蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂、蛇毒纤溶酶原激活剂、水蛭素及其变异体等均通过将纤溶酶原激活为纤溶酶溶解血栓。临床实验结果表明它们在延长体内半寿期、增强对血纤维蛋白选择性和溶栓效率等方面有较大的改进,但溶栓治疗后的冠状动脉再栓塞,颅内出血等问题仍是目前未解决的难题;而纳豆激酶及豆豉纤溶酶由于溶栓原理的不同,引起内出血的几率较低。溶栓剂未来的发展方向为如何综合不同药物的优点,使其更加安全与廉价。     

抗凝血蛋白药物的研究进展

除了血液中的抗凝因子外，自然界中还存在大量具有抗凝活性的生物大分子，如水蛭素、蚯蚓纤溶酶等．基础研究证实这些抗凝刑的作用一般是通过三方面得以实现：一是抑制凝血酶及凝血酶活化因子活性；二是水解血纤维蛋白或纤溶酶原；三是抑制血小板凝聚．由于这些活性物质具有高效的抗凝、溶栓作用，它们极有可能发展成治疗血栓性疾病的药物．     

蚯蚓纤溶酶热稳定性的研究

在37～65℃范围内对蚯蚓纤溶酶的热稳定性进行了实践研究。表明:蚯蚓纤溶酶的干燥粉末热稳定性好且耐贮藏。据实验预测其有效版为11年。     

蚯蚓纤溶酶研究进展

蚯蚓纤溶酶是蚯蚓体内含量十分丰富的一种血纤维蛋白水解酶。自1982年日本宫崎医科大学美原恒首先报道蚯蚓体内存在这种酶以来,我国兰州大学:中科院生物物理所、中科院上海生化所、渝州大学、北京大学以及清华大学、山西医学院等单位,相继对蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺、理化性质、生物学活性等方面都进行了广泛的研究。现就研究的进展情况,结合本人的工作介绍如下。     

蚯蚓纤溶酶同工酶的分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分析了赤子爱胜蚓和秉氏环毛蚓的两个不同部位的纤溶酶同工酶酶谱。表明纤溶酶主要存在于蚯蚓的内容物中,秉氏环毛蚓内容物中的纤溶酶种类多于赤子爱胜蚓。提示用秉氏环毛蚓内容物提取蚯蚓纤溶酶,效果较好。     

以壳聚糖为基质对蚯蚓纤溶酶进行亲和层析

蚯蚓纤溶酶(Earthworm fibrinolytic enzymes)有多种同工酶,分离纯化相对比较困难.我们采用壳聚糖作为基质,大豆胰蛋白酶抑制剂为配体,戊二醛为偶联剂,分别研究了酸性和碱性条件下对蚯蚓纤溶酶的纯化效果.实验表明经壳聚糖为载体所制备的亲和吸附剂对蚓激酶具有较高的分离纯化选择性.并且在酸性条件下提取比在碱性条件下提取所得同工酶要少.     

蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株纤溶酶的酶学性质

对蜡状芽孢杆菌Bc-05茵株的发酵上清液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析所获得的纤溶酶进行性质研究.结果表明:经纤维蛋白平板法检测该酶有直接水解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用,最适作用温度37℃,最适pH=8.0,在pH=8.0条件下25℃和37℃放置24 h酶活力仍保持77.52%和78.96%,该酶体外对兔血凝块有明显的溶解作用;Ca2+,Mn2+离子对该酶具有激活作用,而Cu2+,Fe3+完全抑制其纤溶活性,PMSF,EDTA和DTT对该酶有抑制作用,说明活性中心含有二硫键、金属离子和丝氨酸;测其N端10个氨基酸序列为NH2-Val-Thr-Pro-Thr-Asn-Ala-Val-Asn-Thr-Gly,与其他生物来源的纤溶酶相比较没有同源性.     

人工脂质体染色方法的探究

在一定的温度、渗透压、离子强度条件下,利用脂质体材料L-α-phosphatidylcholine制备人工脂质体,借助结晶紫染液、美蓝染液、复红染液、钼蓝染液、苏丹黑染液,对脂质体进行染色,结果表明经结晶紫染色后的脂质体在光学显微镜下具有形态大小分明、数量多、立体结构清晰等特征.为了优化染色方案,进一步获取最佳染色配比,实验进行了梯度染色,得到了背景清晰、脂质体立体结构明显的最佳染色方法,解决了光学显微镜下不易分辨脂质体的问题,为后续实验的开展奠定基础.     

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.     

壳聚糖固定化蚯蚓纤溶酶及其性质

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联荆,用吸附交联法固定蚯蚓纤溶酶,对蚯蚓纤溶酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了酶固定的最适条件:1 g用pH为6.5的磷酸盐缓冲液浸泡的壳聚糖载体与5 mL体积分数为1%戊二醛在25℃交联8 h,充分洗去戊二醛之后,加入蚯蚓纤溶酶13 U,4℃吸附6 h,充分洗去未交联的游离酶,酶活力回收最高大约为63%,固定化酶的比活为0.082 U/mg.固定化酶,游离酶的最适温度均为50℃,游离酶的最适pH值为8.5,而固定化酶的最适pH值为8.0,固定化酶的热稳定性,pH稳定性均比游离酶有所提高,游离酶、固定化酶都能水解纤维蛋白原和纤维蛋白,固定化酶不再水解BSA.     

蛇毒的研究进展及其在医药领域的应用

就国内外主要毒蛇的蛇毒组分、对凝血系统的影响及蛇毒在医药领域的应用进行了综述．蛇毒的化学成分十分复杂,主要包括酶、神经毒性多肽、神经生长因子、膜活性多肽及其他生物活性肽,其中酶类包含多种与凝血系统、纤溶系统相关的成分．蛇毒在医药领域具有非常重要的作用,主要有促凝作用、溶栓作用、镇痛作用、降压作用和抗肿瘤作用．     

磁性瓜尔胶复合微球的制备及其性能研究

采用化学共沉淀法制备了纳米磁性Fe3O4粒子,并用硅烷偶联剂对其进行表面修饰。以Fe3O4作为磁性内核,以戊二醛作为交联剂,采用反相悬浮交联法制备了Fe3O4-阴离子瓜尔胶磁性微球,并用红外光谱、扫描电镜和磁学性质测量系统对样品进行了表征。通过对阿司匹林模型药物的负载实验,发现修饰后的Fe3O4-阴离子瓜尔胶磁性微球具有较好的载药性。     

豆豉纤溶酶纤溶活性的定向进化研究

通过易错PCR方法向来源于枯草芽孢杆菌DC-12的豆豉纤溶酶基因中引入突变并构建突变体库.利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA以酶活力为指标对突变体库进行筛选,通过三轮易错PCR最终获得一株酶活力提高的突变株M324.序列分析表明突变体M324酶基因发生了六处碱基突变,其中四处突变发生氨基酸取代,另两处为无义突变.通过SWISS-MODEL Repository模拟突变酶的结构显示,三个突变氨基酸位于回环结构上,一个位于α螺旋上.纤维蛋白平板法测定纤溶酶活,结果显示突变酶的比活力是野生型的2.44倍.     

3T3成纤维细胞和巨噬细胞在含rhbFGF培养基血纤维上的共培养

目的：了解３Ｔ３成纤维细胞和巨噬细胞在含重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｈｂＦＧＦ）培养基血纤维上的生长行为。方法：采用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法、相差显微镜观察、吉姆萨染色和扫描电子显微镜观察方法,结果：在低血清含ｒｈｂＦＧＦ的培养条件,３Ｔ３成纤维细胞和巨噬细胞在血纤维上能够良好生长。结论本研究揭示,血纤维不仅可以作为一种低免疫原性或无抗原性的生物支持材料用于三维组织培养,而且也可作为ｒｈ     

三种血液基因组 DNA 提取方法的比较研究

摘要: 目的 比较采用 3 种不同 DNA 提取方法提取豚鼠血液基因组 DNA 之间的差异。方法 分别用新鲜抗凝血 NaI 手提法、血凝块手提法和试剂盒 DNA 提取法提取 20 只豚鼠血液基因组 DNA,用分光光度计测定、琼脂糖凝胶 电泳、PCR 扩增等方法对提取的 DNA 片段的完整性、浓度、纯度和用于 PCR 扩增的效果等方面进行比较研究。结 果 新鲜抗凝血 NaI 手提法提取的 DNA 完整性、浓度和纯度均为最高; 血凝块法提取的 DNA 浓度和抗凝血提取的 DNA 浓度接近但纯度最低,有一定程度的断裂和降解; 试剂盒法提取的 DNA 浓度最低,纯度和完整性处于中间,但 三种方法提取的 DNA 都可用于 PCR 扩增反应。结论 3 种方法都可以提取基因组 DNA 并且所提取的 DNA 均能 满足后续 PCR 扩增实验的要求,但每种方法各有利弊,可根据具体的条件选择适宜的方法。