小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养

目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离与培养。方法取BALB/c小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对MEF的生长形态进行观察,并对传代细胞培养液、胚胎胎龄、胰蛋白酶浓度进行筛选。结果 MEF在体外为贴壁生长型细胞,第三、四、五代细胞纯度较高且增殖最为旺盛;添加血清的M199和DMEM均能较好的满足原代细胞的生长,两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异;11.5～16.5d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;0.1%胰蛋白酶消化MEF时间以8～11min为宜。结论通过对MEF分离培养影响因素的筛选,为MEF的进一步研究奠定了基础。     

小鼠早期胚胎体外培养技术中几种化学因素的影响

与胚胎体外培养有关的一些化学物质，如液体石蜡、ＣＯ２、乙醇和水质等，对小鼠早期胚胎发育有明显的影响。有的液体石蜡对胚胎有毒害作用，这种毒害作用与其比重和所含的硝基萘杂质无关。有的国产液体石蜡适合于做早期胚胎培养之用。培养液中混入乙醇对胚胎发育危害很大，浓度达到０．８％时，胚胎完全不发育，而浓度低于０．０５％，则无明显影响。酒精厂生产的ＣＯ２粗制品，乙醇含量约为￣０．１８％，完全适合于做胚胎培养的Ｃ     

小鼠早期胚胎体外培养技术中几种化学因素的影响

与胚胎体外培养有关的一些化学物质，如液体石蜡、ＣＯ２、乙醇和水质等，对小鼠早期胚胎发育有明显的影响．有的液体石蜡对胚胎有毒害作用，这种毒害作用与其比重和所含的硝基萘杂质无关．有的国产液体石蜡适合于做早期胚胎培养之用．培养液中混入乙醇对胚胎发育危害很大，浓度达到０．８％时，胚胎完全不发育，而浓度低于０．０５％时，则无明显影响．酒精厂生产的ＣＯ２粗制品，乙醇含量约为～０．１８％，完全适合于做胚胎培养的ＣＯ２气源．用三蒸水配制的培养液进行胚胎体外培养，可获得良好效果．     

国产试剂配制的培养液对小鼠早期胚胎培养效果的研究

本实验用 Whitten 的小鼠早期胚胎培养法验证了国产试剂配制培养液对小鼠早期胚胎体外培养的效果。实验表明,在用国产试剂配制的小鼠早期胚胎培养液中,2—细胞胚胎能正常发育到囊胚阶段。     

小鼠胚胎干细胞建系新方法的初步研究

通过对小鼠胚胎着床初期子宫组织块的培养及内细胞团的分离，探讨利用该方法获得胚胎干细胞的可能性，我们用这种方法已建立了一株小鼠胚胎干细胞系，传至第10代，AKP染色细胞呈强阳性，RT—PCR证实Qct-4表达强阳性。结果表明，利用这种方法获得胚胎干细胞是可行的，与传统方法相比，这种新方法极大简化了实验步骤，降低了实验技术难度。     

小鼠胚胎细胞数量的观察

本试验观察了不同时期小鼠胚胎的细胞数含量。结果表明，由早期桑椹胚至孵化囊胚，其胚胎细胞数含量由２０士５．８逐渐增加１２１．２±１６．７，且显示与胚胎发育阶段不同而不同。     

小鼠胚胎一步冷冻法

本文描述了冷冻小鼠胚胎直接投入液氮的简单一步法。这项研究的主要目的是评价小鼠胚胎在下列不同浓度的甘油和蔗糖混合液中预脱水后冷冻胚胎解冻后的活力。同时研究了脱水前甘油的预处理及胚胎阶段的不同效果。当蔗糖浓度保持恒定(0.25M),甘油浓度变化范围为1.0～4.0M时,以甘油浓度2.0M冷冻胚胎解冻后活力最高(67％)。采用甘油预处理并不优于不预处理。当甘油浓度保持恒定(2.0M)。蔗糖浓度变化范围为0—1.0M时,发现在0.5M蔗糖中冷冻胚胎解冻后活力最佳(81％)。桑椹胚存活率优于囊胚(86％),VS72％)。与鲜胚移植54％的出生率相比较。胚胎冷冻最佳处理(2.0M甘油+0.5M蔗糖)解冻后移植出生率为41％。这项技术可实际应用于家畜胚胎的冷冻与解冻。     

昆明鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定

目的：从昆明系小鼠的早期胚胎分离和培养胚胎干细胞(ES细胞)．方法：收集小鼠3．5d胚龄的囊胚，将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，5—6d后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养，观察集落的生长情况并通过碱性磷酸酶染色、原位杂交、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定．结果：KS细胞集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性．结论：昆明系小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成ES细胞，并能进行传代培养．     

小鼠胚胎干细胞对病毒性心肌炎的影响

目的使用小鼠验证这样一个假设:外界病毒浸入诱发心肌炎时,机体的干细胞将进入心脏提高心肌的抗病毒能力。方法雄性BALB/c小鼠分为三组:小鼠胚胎干细胞对照组(ES),心肌炎病毒组(EM CV)及EM-CV加ES治疗组。通过尾静脉注射,令小鼠立即感染病毒。小鼠死亡率,炎性细胞浸润及心肌坏死等为观察指征。干细胞的游走及分化等通过免疫荧光法来验证。结果给予干细胞后的小鼠的存活率明显高于生理盐水对照组,炎性细胞侵润及心肌坏死亦明显低于生理盐水对照组。免疫荧光法表明,干细胞进入心肌并分化成新的心肌细胞。结论干细胞能明显提高心肌炎小鼠的存活率,减少心肌组织的坏死。同时,亦证明当心脏遭受病毒的侵入后,干细胞通过某种机理修复或再生心肌细胞,从而提高组织的抗病毒能力。     

乙二醇对速冻中小鼠胚胎发育的作用

利用快速冷冻方法处理小鼠2-细胞、4-细胞、8-细胞以及桑椹期的胚胎．用乙二醇作低温保护剂,浓度分别为0．5,1．5,2．5,3．5mol／L,其中含10％犊牛血清和0．25mol／L蔗糖,培养到囊胚阶段．结果发现,当乙二醇的浓度在2．5mol／L或以上时的保护效果较好．胚胎越处于较晚的发育阶段,越有较强的抗冻能力,同时也有较高的发育率．发育正常的胚胎移植后,受体均能分娩出正常的小鼠后代．     

久效磷对小鼠早期胚胎体外发育的影响

采用小鼠早期胚胎的体外培养技术,研究了久效磷对小鼠着床前胚胎发育的影响。结果表明,剂量低于0.22mmol/L对小鼠早期胚胎无明显作用,剂量为0.34mmol/L时,70.6％的8细胞胚胎能发育至囊胚,剂量达0.45mmol/L,对小鼠早期胚胎有显著的毒害作用,只有5.7％可以发育至囊胚。在经久效磷处理的小鼠早期胚胎电镜照片上可以看到,细胞内网架结构保持完好,线粒体被破坏,数量变少,空泡变大、增多,细胞内不同结构对久效磷的敏感性有一定差异。     

冷冻中甘油对小鼠胚胎保护效果的研究

将小鼠２－细胞、４－细胞、８－细胞以及桑棋期的胚胎快速冷冻,以甘油作低温保护剂,浓度分别为０．５ｍｏｌ／Ｌ,１．５ｍｏｌ／Ｌ,２．５ｍｏｌ／Ｌ,３．５ｍｏｌＬ培养到囊胚阶段。结果表明：随着保护剂浓度的升高,胚胎发育率增加;在囊胚之前,发育程度越高,抗低温的能力越强,胚胎的发育率也就越高,各阶段组发育到囊胚期的胚胎经移植后均能得到正常发育的胎儿。     

不同化学激活方法对小鼠卵母细胞孤雌激活效果的影响

通过比较几种常用的化学激活方法对小鼠卵母细胞的孤雌激活和孤雌生殖胚胎体外发育的影响,从而筛选出小鼠卵母细胞孤雌激活的适宜方法.选取成熟小鼠卵母细胞,随机分为以下9组进行激活处理:①离子霉素(I)+6-二甲氨基嘌呤(D);②I+D+细胞松弛素B(CB);③I+放线菌酮(C);④I+C+CB;⑤φ(乙醇)=7%的乙醇(E)+D;⑥E+D+CB;⑦E+C;⑧E+C+CB;⑨Sr2++CB.比较了这9种化学激活方法以及SrCl2的作用时间和卵龄对小鼠卵母细胞激活效果的影响.实验结果表明:小鼠卵母细胞孤雌激活率与激活措施和卵龄有关;小鼠卵母细胞可以被I+D+CB或SrCl2+CB有效激活,激活率及孵化囊胚发育率均高于其他激活方法(P0.05),且以SrCl2+CB最为有效.hCG注射后20h为小鼠卵母细胞进行SrCl2激活的最适卵龄,其最佳处理时间为4h.对小鼠卵母细胞而言,6-DMAP比放线菌酮的激活效果好.     

APPLEⅡ的打印机自由格式输出方法

本文提出的打印机自由格式输出方法可以较好地解决APPLEⅡ微机SOFT—BASIC程序设计中的报表和资料的定位输出问题。     

WLAN无漫游组网方式设计与实现

针对无线局域网传统"微蜂窝架构"组网方式下终端漫游时存在的时延增大、丢包和断流等问题,提出了一种软件定义的WLAN无漫游组网方法,通过将多个AP(AccessPoint,无线接入点)虚拟成一个"大虚拟AP"的方式,使终端始终关联在该"大虚拟AP"上,从而使得终端可在AP间无漫游地切换并维持数据通信的连续性。实验结果表明,该方法使终端在切换AP时比传统"微蜂窝架构"组网方式下的漫游具有更快的文件传输速度和更好的稳定性,增强了网络实时性。     

银杏成熟胚的离体培养研究

用银杏成熟胚为材料,在含不同激素或添加物的培养基上进行萌发出苗培养,结果表明：以６,７－Ｖ＋活性炭１．０ｇ／Ｌ＋水解乳蛋白１．０ｇ／Ｌ＋抗坏血酸１００ｍｇ／Ｌ为最适宜培养基;光照培养比黑暗培养好,培养基中添加０．１ｍ,ｇ／Ｌ的ＮＡＡ能有效地促进萌动胚的胚根伸长和发育成苗;植物激素６－ＢＡ不适合成熟胚的萌发,当其浓度为０．１－１．０ｍｇ／Ｌ时会抑制胚根生长并致胚芽发育畸形。     

用于固有振动分析的动态有限元阻抗矩阵

目前所用的动态有限元通常是以质量矩阵和刚度矩阵的频率展开式来表述的．本文提出单一的阻抗矩阵展式，从而无需分别导出质量阵和刚度阵的展开项，使建立动态有限元的工作大为简化，并可避免出现不正确的刚度阵展开项的矛盾。此外，还指出质量阵、刚度阵展开项和阻抗阵展开项之间存在一定的关系．对长方形弯曲板元，导出了直到二阶的阻抗阵展开项，并作为算例，计算了一个正方形悬臂板的固有频率。