真核生物DNA聚合酶δ的研究现状

DNA聚合酶δ(DNA polymerase δ)是真核生物DNA复制的主要复制酶,同时还参与DNA修复,对保持真核生物基因组的结构完整性和遗传稳定性具有重要作用.对DNA聚合酶δ蛋白功能活性及其基因表达机制的研究因受技术上的限制而未能深入研究.由于其重要的生物学功能,目前引起人们的更多关注和重视.文中就该酶的生物学功能、亚基组成、核心酶的分子表达调控以及与其他蛋白相互作用等方面对国内外DNA聚合酶δ的研究进行简要综述.     

转录激酶P-TEFb通过相位分离调控基因转录延伸

正为了保证生命机体的正常运作,细胞内维持着有序调控并高效运转的生物化学反应,其中一个重要的反应便存在于由RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)介导的基因转录过程中.PolⅡ复合体最大亚基RPB1的C端有一段高度重复序列(简称CTD),由转录激酶P-TEFb对PolⅡ的CTD结构域进行高度磷酸化修饰的生化反应是实现PolⅡ高效转录延伸的必要条件.厦门大学药学院周强教授课题组长期从事关于P-TEFb在转录延伸过程中的功能研究,通过分离及鉴定细胞内多     

重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定

Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99b/Tth并转化表达菌E.coli DH5α,利用IPTG诱导Tth基因表达,并采用热处理、Ni2+柱纯化融合His-tag的Tth DNA聚合酶,最后利用PCR、RT-PCR鉴定其活性.结果显示,本研究获得Tth DNA聚合酶基因全长2 505bp,成功表达并获得高纯度高活性的重组Tth DNA聚合酶,1L发酵液所得粗酶液中,酶活性约有800 000U,酶的比活约为6 315U/mg.本研究最终实现了Tth DNA聚合酶的高效国产化并降低了实验成本.     

单链DNA稳定的金纳米簇合成及其检测核酸外切酶Ⅰ活性研究

核酸外切酶Ⅰ在基因组活动和稳定性中起着重要作用,因此,快速检测核酸外切酶Ⅰ的活性对疾病诊断和药物开发具有深远的意义.设计一个高效的DNA模板合成荧光金纳米团簇(Au NCs),以其作为荧光探针,用于简单、灵敏和无标记的方式检测核酸外切酶Ⅰ(ExoⅠ)的活性.试验结果表明:随着核酸外切酶Ⅰ的加入,单链DNA将从3'端至5'端被消化,金纳米团簇失去了单链DNA模板的保护出现团聚,导致其荧光强度下降,可用于核酸外切酶Ⅰ活性测定.该方法不需要任何基团的修饰和特殊DNA序列的设计,提高了核酸外切酶I活性测定效率.     

DNA结合蛋白DbpA影响DNA聚合酶性能的研究

DNA聚合酶是催化DNA合成的酶,在体内和体外都具有重要的作用.在体内DNA聚合酶参与DNA的复制、损伤修复等,在体外DNA聚合酶是现代分子生物学重要的工具酶.Pfu DNA聚合酶因具有高保真性而被广泛使用,但延伸速度慢,提高其延伸速度将使其应用更加广泛.DbpA是古生菌Sulfolobus solfataricus细胞内含量丰富的非特异性双链DNA结合蛋白,分子质量8ku.本研究通过引物重叠延伸的方法得到密码子优化的DbpA基因,并构建得到Pfu-DbpA基因.结果表明:融合有DbpA蛋白的Pfu DNA聚合酶(Pfu-DbpA DNA聚合酶)自身的热稳定性不受影响,而延伸速度得到了提高;同时具有更高的耐盐性,说明具有更高的持续合成能力,并且能够适应更广泛的缓冲液体系.应用Pfu-DbpA DNA聚合酶扩增λDNA不同长度的片段,结果显示其比Pfu DNA聚合酶具有更好的应用效果.     

Klenow大片段聚合酶及T4DNA聚合酶在构建重组质粒中的应用

利用大肠杆菌Klenow大片段聚合酶5＇→3＇聚合酶活性和T4DNA聚合酶3＇→5＇外切酶特性构建植物高效表达载体pBLT35Svp4-ST.用pUC18-435S中的T35S启动子取代植物表达载体pBLG-VP4-ST中的双35S启动子,通过Klenow大片段的聚合酶活性对植物表达载体pBLG-VP4-ST中的HindⅢ3＇凹端补平,再利用T4DNA聚合酶外切酶活性将质粒pUC18-435S的四倍35S启动子即T35S中的SacⅠ3＇凸端削平.在T4DNA连接酶作用下将一端为平端,另一端为BamHⅠ的粘性末端的四倍35S启动子定向连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中取代原有的双35S启动子,转化并筛选阳性克隆.结果经PCR和酶切鉴定证实,四倍35S启动子成功连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中.     

过表达Pseudomonas mendocina复制起始相关蛋白提高菌体繁殖速度

复制起始蛋白DnaA通过识别复制起始位点oriC上的特殊序列,并招募复制复合体起始复制,它通过绑定ATP或ADP来对复制起始的开始进行调节.DNA聚合酶III的β亚基DnaN蛋白,负责将DNA聚合酶III连接到已经解旋的DNA上,以开始复制过程.通过过表达复制起始相关蛋白DnaA和DnaN,促进了菌体的繁殖能力,优化了菌体的生长状态,缩短了菌体倍增时间,为构建Pseudomonas mendocina工程菌株提供了参考.     

钯卟啉与RNA相互作用的室温磷光研究

研究水溶性金属卟啉配合物与核酸的相互作用方式,对获得核酸的碱基序列和识别核酸的结构进而设计新型药物具有重要意义[1].Pd-TAPP分子与DNA有相互作用[2],RNA分子具有与DNA相似的局部双螺旋区域,推测Pd-TAPP也会与RNA相互作用.     

POLE/POLD1突变与肿瘤免疫治疗研究进展

 阐述了DNA聚合酶ε（polymerase epsilon，POLE）和DNA聚合酶delta 1（polymerase delta 1，POLD1）基因编码的亚基参与DNA复制和校对，总结了POLE/POLD1突变对肿瘤突变负荷以及肿瘤内免疫细胞浸润的影响，综述了POLE/POLD1突变在子宫内膜癌、结直肠癌、肺癌中的研究进展，并讨论了POLE/POLD1突变作为潜在的免疫检查点抑制剂疗效预测分子标志物面临的诸多挑战。     

基于外切酶驱动策略构建荧光减弱式T4PNK免标记传感器

T4多核苷酸激酶(T4polynucleotide kinase,T4PNK))是5′-激酶家族的主要成员,可以将三磷酸腺苷(ATP)的γ位点磷酸基团转移到单链或双链DNA/RNA、寡核苷酸或具有3′-磷酸基团的单核苷酸的5′-羟基进行催化。核酸中5′-羟基末端的磷酸化在DNA重组、复制和损伤中起着重要作用,与恶性疾病的生成发展密切相关。因此构建一种灵敏的T4PNK的检测方法对于许多疾病早期治疗具有重要意义。本文提出基于λ核酸外切酶驱动荧光减弱式检测T4PNK活性的策略,拟利用T4PNK可将DNA的5′端由羟基化变为磷酸化的特点,磷酸化DNA能被λ核酸外切酶(λ-exonuclease)特异性识别和切割的特点降解底物双链DNA,导致与荧光染料SGΙ键合位点急剧减少,荧光信号输出由"on"模式切换到"off"模式,荧光强度大大减少。因此,可利用荧光减弱的程度来实现对T4PNK的免标记荧光定量检测。     

舟山群岛近海底栖真菌及其抗生活性初筛研究

对分离自舟山群岛海域海底46个沉积物样品中的丝状真菌进行种属鉴定,及其代谢产物抗菌、细胞毒和乙酰胆碱酯酶抑制活性的检测.结果显示:舟山群岛海域海底沉积物中存在着丰富的真菌资源.46个沉积物样品中,真菌含量最高可达到2 250 CFU/g(样品).在进行活性检测的89份真菌代谢产物中,有29.2%的样品对一株或一株以上的指示细菌有不同程度的抑制作用;各有10%左右的样品对5株植物致病真菌显示抑制作用,有49.4%的样品对白色假丝酵母显示抑制作用,但没有样品对黑曲霉有抑制作用;在细胞毒实验中,分别有2个、4个和12个样品在浓度为25μg/mL时,对KB细胞、Raji细胞和Hep G2细胞的抑制率高于50%;有55个样品显示微弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性.通过此次研究,我们对舟山群岛海域的底栖真菌资源有了初步了解,将有助于将来更全面深入的研究.     

弱电解质电离度和浓度之间关系的理论探讨

应用ＰｉｔｚｅｒＫＳ的电解质溶液理论，建立了弱电解质电离度ａ和浓度ｍ（ｍ＜６Ｍ）之间的函数关系，扩大了ａ的应用范围，得出了有关结论。     

以活动为中心的软件过程建模及其作用的研究

从分析以活动为中心的软件过程的特点以及活动之间的规则、关系和分类出发,抓住了过程活动的特点与度量活动的难点.通过实例研究将以活动为中心的软件过程模型特点应用到软件过程度量中,通过活动图抓住度量关键域,并分析了两种方法具体结合对企业实际项目开发过程中的过程度量与改进的意义,不仅简化了软件过程度量,同时避免了过程度量的盲目性.     

论译者的读者身份

在翻译过程中,译者首先作为读者理解原作,对于原作理解的过程是一种认识过程。从现代认识论的角度对译者的读者身份进行阐述,译者作为读者经历认识活动的三个基本环节,即认知活动、评价活动以及审美活动,最终实现对原作的理解。     

川西昌台地区晚三叠世双壳生物群的分布与火山活动的相关性

川西昌台地区晚三叠世的海相火山活动频繁,每次火山活动的间歇期都沉积有一套深色岩系,主要为泥质板岩、粉砂质板岩和钙质板岩.这套沉积岩系产有丰富的双壳类化石,这套岩系底部与火山岩接触的层位,其所含的双壳类化石类别单一,个体较大,数量丰富,呈介壳形式产出,矿化明显.根据薄片鉴定结果、稀土元素分布模式以及微量元素的含量分析,认为川西昌台地区晚三叠世生物群的分布与火山活动密切相关,火山活动为海底热液的存在提供了通道,火山活动末期的热液环境参数包括还原性、高温、高金属离子浓度(金属硫化物)等.     

单独离子活度研究进展

本文论述了过去二十多年中对单独离子活度研究的重大进展，研究方向主要有两个，一是企图消除或估计相界面电位（液接电位）来实验测定；二是以离子溶液理论为指导，将电解质的平均活率纱合理地分解为单独离子的活度系数。     

植物多糖的抗氧化与抗病毒活性

许多天然多糖具有增强免疫、抗氧化、降血糖、抗病毒等生物活性,植物多糖还具有毒副作用小、疗效好等优点.综述了近年来10余种植物多糖的抗氧化与抗病毒活性研究进展,并对植物多糖的应用前景作了展望.     

少儿图书馆读者活动策划之我见

阐述了少儿图书馆读者活动的重要性,探讨了策划少儿图书馆读者活动的具体对策,指出了策划少儿活动时需要注意的问题.     

α—取代芳氧基乙酰氧基烃基膦酸酯除草活性研究

用生物测定的方法研究了α－取代芳氧基乙酰氧基烃基膦酸酯系列新化合物的除草活性。结果表明,它们具有很好的选择性除草活性,对双子叶植物效果好,对单子叶植物效果差,具有一定的植物生长调节活性;其生物活性彼此之间存在着较大的差异。另外,探讨了其化学结构与生物活性之间的关系。     

具有生物活性有机锡化合物的研究

近年来,有机锡化合物研究受到人们的重视,二烃基锡,三烃基锡,四烃基锡在抗癌,杀菌,防腐,生态环境保护方面都有新的进展,本文介绍有机锡化合物的研究进展,特别是在抗癌,杀菌等方面的研究和应用情况。