简便分离鉴定酵母细胞总RNA的方法

针对酵母具有细胞壁的特点,建立了一种简便,快速,有效分离鉴定酵母细胞总ＲＮＡ的方法,并对三种便于提取酵母细胞总ＲＮＡ的方法进行分析,所得取的总ＲＮＡ质量高,可用于进行分离ｍＲＮＡ,ＰＣＲ扩增以及ｄｏｔ或Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。     

猪垂体Poly（A）~＋RNA的制备及其体外翻译

本文用ＬｉＣｌ沉淀法提取了猪垂体总ＲＮＡ，经。ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ柱亲和层析，分离纯化了猪垂体Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ．用自制的兔网织红细胞体外翻译体系鉴定，表明该Ｐｏｌｙ／（Ａ）＋ＲＮＡ具有较高的翻译活性．ＳＤＳ－ＰＡＯＥ，放射自显影分析翻译产物提示，在制各的猪垂体Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ中，编码猪生长激素前体的ｍＲＮＡ占有较高的比例．     

PCR扩增人外周血淋巴细胞抗体基因的探讨

采用ＲＴ－ＰＣＲ法,以一组人抗体重链和轻链简并引物,直接从人外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Ｆｄ和κ轻链基因．结果提示：用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取细胞总ＲＮＡ,以Ｏｌｉｇ（ｄＴ）引导合成ｃＤＮＡ第一链,再经ＰＣＲ扩增的方法,是值得优先采用的方法．细胞总ＲＮＡ的提取不必追求高纯度,少量外周血即足以满足构建抗体库所需,简并引物可获得良好的扩增效果,为构建噬菌体抗体库奠定了基础     

人锰超氧化物歧化酶cDNA基因的克隆

利用人胚胎肝组织提取总ＲＮＡ,从总ＲＮＡ 中分离纯化出ｍ ＲＮＡ,经逆转录得到ｃＤＮＡ 第一条链,并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物,进行ＰＣＲ 合成人锰超氧化物歧化酶ｃＤＮＡ 基因,将所得ｃＤＮＡ 克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ 上,转化大肠杆菌ＤＨ５α细胞,进行诱导表达筛选,将筛选的克隆进行ｃＤＮＡ 全序列测定     

酸苯酚萃取总RNA方法的改进

目前提取总ＲＮＡ普遍使用的是酸苯酚萃取法（或称硫氰酸胍法）．此法所提取的ＲＮＡ中存有少量基因组ＤＮＡ的污染．为了克服这一缺点,我们对酸苯酚提取ＲＮＡ的方法进行了改进．即先用酸苯酚萃取,然后用蛋白酶Ｋ消化,再次酸苯酚萃取．用改进的方法提取的ＲＮＡ无基因组ＤＮＡ的污染     

一种简易的植物核酸提取方法─—从干叶和新鲜叶中快速提取RNA和DNA

本文介绍了一种植物核酸提取的简易方法．该法只需在常温下按常规的分子生物学操作条件从已干燥的和新鲜的植物叶中快速提取总ＲＮＡ和ＤＮＡ．所获得的ＲＮＡ和ＤＮＡ能顺利用于下一步的ＰＣＲ、测序及小分子ＲＮＡ研究等分子生物学实验．     

有效制备核糖核酸的方法研究

核糖核酸的制备和分析受多种因素的影响．因此，在特定条件下制备高纯度和完整性好的ＲＮＡ的方法研究至关重要．本文以大白鼠肝为材料，研究ＲＮＡ的制备方法，建立了有效的ＲＮＡ制备方法．用紫外分光光度计和变性电泳分析所制备的ＲＮＡ，发现其纯度Ａ２６０Ａ２８０＝１．７～２．０，２８ＳｒＲＮＡ与１８ＳｒＲＮＡ的带宽比为２１．本方法具有节约节时，重复性好，产量较高，无ＤＮＡ污染等优点．这为ｃＤＮＡ合成，基因表达和调控等研究奠定了基础．     

双链RNA技术在果树病毒研究中的应用

含ＲＮＡ基因组的植物病毒在复制时会产生双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）。本文介绍了用ＣＦ－１１纤维素粉提取ｄｓＲＮＡ的步骤,并列举了ｄｓＲＮＡ在果树病毒研究中的应用,其主要应用有：１）果树病毒病及病原鉴定;２）病毒分化株系的鉴定;３）以ｄｓＲＮＡ为中介对病毒核酸序列进行测定;４）探针制备和ｃＤＮＡ克隆的获得;５）用于检测病毒卫星ＲＮＡ和亚基因组ＲＮＡ;６）侵染性测定和制备抗血清等方面的研究。     

茶卷蛾质型多角体病毒基因组特性的研究

茶卷蛾质型多角体病毒核酸（ＨｍＣＰＶＲＮＡ）用热酚法从提纯的病毒多角体中提取。紫外吸收光谱测定最高最低的吸收值分别在２６０ｎｍ和２３０ｎｍ处。经测定其Ｔｍ值为７９℃，在３％聚丙烯酰胺凝胶中，经电泳ＨｍＣＰＶＲＮＡ可分离得到１０条基因片段，各片段大小为０．３４×１０６～２．５５×１０６，总分子量为１５．１５×１０６，其ＰＡＧＥ图型与ＣＰＶ属代表种ＢｍＣＰＶＲＮＡ有较大差异，试验表明ＨｍＣＰＶ与ＢｍＣＰＶ属不同ＰＡＧＥ型。     

杂交捕获抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的体外翻译

体外转录载体ｐＳＰ７２—Ｃ１２和ｐＳＰ７２—Ｃ１．４分别经ＸｂａⅠ和ＸｈｏⅠ酶切线性化后，用ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶与Ｔ７ＲＮＡ聚合酶进行体外转录得到编码人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的ｍＲＮＡ全序列（３．７ｋｂ）及与其５’端编码区的起始密码子ＡＵＧ上游区域互补的反义ＲＮＡ片段（１．４ｋｂ）。等摩尔数的正、反义ＲＮＡ通过酚相乳浊杂交技术进行分子杂交。在网织红细胞裂解物体外翻译系统中，正义ＲＮＡ能正常地翻译出蛋白质；而反义ＲＮＡ与正义ＲＮＡ杂交可阻断翻译的进行。     

海刀豆,红树DNA的提取

本文介绍了两种简便、快速的ＤＮＡ提取方法，它们不需要特殊试剂、液氮和柱层析系统、超速离心机等贵重仪器。我们以海刀豆和红树两种盐生植物为实验材料，所制得的ＤＮＡ样品经紫外分光光度计检测：其最大吸收波长均为２５８ｎｍ；Ａ＿（２５８）／Ａ＿（２８０）均为１．８２；与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析分离结果相近；用琼脂糖凝胶电泳检测为均一的谱带。     

适于cDNA-AFLP的黑木相思组培苗总RNA快速提取方法的建立

针对黑木相思富含多酚、多糖等次生代谢物质的特点,以其组培苗为试材,采用改良CTAB裂解法、硼砂-SDS裂解法、改良异硫氰酸胍裂解法、CTAB-异硫氰酸胍裂解法、改良CTAB-异硫氰酸胍裂解法等5种不同的提取方法提取其总RNA.结果发现:改良CTAB-异硫氰酸胍裂解法能有效地控制多酚、多糖、蛋白质以及DNA等对所提取总RNA的污染,所得总RNA质量高、完整性好.紫外分光光度检测,A260/A280比值为1.96～2.00,A260/A230比值1.98～2.20,总RNA得率为118.4～213.6μg.g-1,电泳检测,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,所提RNA质量可以满足dscDNA合成和cDNA-AFLP等后续分子操作要求.     

应用GIS制作Coringa红树林物种分布图

Coringa野生保护区是印度东海岸第二大红树林保护区。采用PCQM(PointCentered Quarter Method)方法获取了该区红树林树木底面积数据Areinfo8．1制作物种密度分布图，结果显示，该区红树林植物有15种，分属8个科10个属，动物则包括7个门(Arthropda，Mollusca，Pisces，Amphibia，Reptiles，Avesand Mammals)。在15种红树林植物中，Avicennia marina，A．officinalis和Excoecaria agallocha是保护区中分布最广泛的种类，他们的分布密度随盐度的变化而变化，Rhizophora apiculata和R．mucronata则被限制在该区沿海边缘地带。     

沙葱总RNA的提取与质量分析

以沙葱种子和沙葱幼叶为材料,分别用RNAiso Plus试剂法、RNAiso Plus醋酸钠改进法、CTAB-异丙醇法、CTAB-LiCl法4种不同的方法提取沙葱总RNA,经琼脂糖凝胶电泳,采用紫外分光光度法测定总RNA纯度并进行RT-PCR检测.结果表明,沙葱不同组织总RNA提取的最优方法有所不同.采用CTAB-LiCl法能有效地提取出沙葱种子高质量、完整性好而且无胶状不溶物的RNA,没有明显的蛋白和基因组DNA的污染.采用RNAiso Plus醋酸钠改进法能有效地去除沙葱幼叶中多糖的干扰,所提取的RNA条带清晰,完整性好,是沙葱幼叶总RNA提取的有效方法.     

四种不同样品处理方法对人胎盘组织总RNA提取的影响

目的:比较四种不同样品处理方法对人胎盘组织总RNA提取的影响,为RNA提取时的组织处理方法提供实验依据。方法:将新鲜人胎盘组织按0.1g的重量分成相等的80份,按照随机原则分成4组,每组分别采取不同的处理方法后置于液氮罐中保存并于日后用Trizol法进行总RNA提取,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对RNA的浓度和纯度进行检测,所得数据进行统计学处理。结果:(1)提取成功率P0.05,差异无显著性意义;(2)琼脂糖凝胶电泳总RNA样品较为完整,基本无降解;(3)纯度(OD260/OD280值代表)P0.05,差异无显著性意义;(4)浓度P0.05,差异无显著性意义。结论:尚无足够的证据证明,不同的处理方法对用Trizol法从人胎盘组织中提取总RNA有影响,在实际工作中我们可以采取较为简便、节约的方法。     

藏药沙棘枝叶多糖的提取与含量测定

目的确定得糖率最高的提取部位并测定该部位提取物中多糖含量.方法以沙棘枝叶多糖得率为标准,通过超声波辅助-乙醇回流脱脂-热水浸提提取方法,比较水提取物、甲醇提取物、乙酸乙酯提取物的得糖率;Sevage法除蛋白后,采用苯酚-浓硫酸法测定沙棘多糖中总糖的含量.结果乙酸乙脂提取物、甲醇提取物、水提物部位的得糖率分别为4.01%、4.84%、6.42%,且水提物中总糖平均含量为28.51%.结论超声波辅助方法提取沙棘枝叶中的多糖,得糖率高;苯酚-浓硫酸法测定沙棘枝叶中多糖含量的方法简便、灵敏、准确,适合于沙棘多糖含量的测定.     

1株蛹虫草的液体发酵试验及蛹虫草多糖的提取

冬虫夏草是一种名贵的强壮滋补中药,但由于其严格的寄生性和特殊的生长地理环境,天然虫草资源越来越少,冬虫夏草的开发利用只有走人工培养之路.经研究蛹虫草的培养时间与菌丝体生产量的关系,虫草多糖的提取以及虫草多糖的测定,结果显示培养6d的菌丝产量最高,发酵时间对菌丝生长量的研究有重要意义,它可以控制大规模发酵生产大周期.多糖含量的测定用硫酸-苯酚法.经实验显示2次浸提比1次浸提的得率要高,摇瓶菌丝体的粗多糖得率为25.0%,精多糖得率为10.15%,均比已报道的虫草多糖得率高,这为人工控制大规模发酵生产大周期提供科学依据.     

藏药"喁"中粗多糖提取和含量分析

本文建立了藏药“喁”中粗多糖含量测定的方法.采用水提醇沉的方法提取粗多糖,酚-硫酸法测定样品中粗多糖的含量.结果发现“喁”中粗多糖收率为16.16%,其中总糖含量为67.90%.     

马鞭石斛多糖提取工艺的初步研究

采用正交试验设计方法对马鞭石斛多糖提取工艺进行优化分析．结果表明提取次数、料液比和离心时间分别是在脱单糖、水提和醇沉工艺流程中的主要影响因素;其最佳脱单糖工艺是乙醇浓度（95％）、料液比（1：20）、提取时间（10min）和提取次数（3次）;最佳多糖水提工艺是料液比（1：30）、提取时间（60min）、提取次数（1次）和粉碎度（0．25mm）;醇沉最佳工艺条件是离心时间（10min）、乙醇浓度（90％）、醇沉时间（30min）和醇沉次数为3次．石斛多糖提取工艺复杂,涉及到很多影响因素,要想获得高纯度、高提取率和低成本石斛多糖,还需要进一步深入研究．     

甘草多糖的化学与药理研究

综述了甘草多糖的提取方法、化学组分、药理作用等方面的研究进展.现代提取方法较传统方法简便快捷,甘草多糖产量高,且不会影响多糖的结构和活性.研究表明,甘草多糖主要由鼠李糖、葡聚糖、阿拉伯糖和半乳糖组成,但其主链结构的研究结论不尽相同.药理研究发现,甘草多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒等作用,而且无细胞毒作用.