携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒对犬心肌缺血的基因治疗

为了进一步研究重组腺病毒Ad-HGF对心肌缺血的治疗效果及其安全性, 在体外实验和大鼠实验的基础上制作了犬心肌缺血的模型, 从3个方面评价Ad-HGF对心肌缺血的治疗效果. 首先, 通过冠状动脉造影观察侧支循环形成的情况, 发现治疗组动物的侧支循环比对照组丰富; 然后, 对心脏切片进行TTC染色, 并通过图像分析确定缺血区面积, 结果显示治疗组动物的缺血区明显小于对照组; 最后, 从心肌中回收彩色微球计算局部心肌血流量, 结果显示治疗组动物的局部心肌血流量基本恢复到了结扎前的水平. 另外, 在长期毒性研究中,用中和方法检测了腺病毒抗体产生的情况, 发现腺病毒抗体在第4次注射后产生, 达到高峰后缓慢下降, 于停药12周后消失. 总之, Ad-HGF对心肌缺血的治疗是有效的, 同时也会诱导机体产生抗体中和体内的腺病毒, 这可能是腺病毒载体的清除机制.     

腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对大鼠心肌缺血的基因治疗

为研究腺病毒载体介导肝细胞生长因子对心肌缺血基因治疗的可行性，首先用RT—PCR方法从人胎盘cDNA文库中克隆人肝细胞生长因子(HGF)基因全长编码区cDNA，通过脂质体共转染和细胞内质粒同源重组的方法构建了携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒Ad—HGF．经过在293细胞系内的扩增和氯化铯密度梯度离心获得大量纯化的重组腺病毒、体外实验中用ELISA方法证明肝细胞生长因子能在原代培养的乳大鼠心肌细胞中表达并分泌到培养上清液中、然后用MTT方法测定了其对内皮细胞的刺激增殖作用、活体实验中用绿色荧光蛋白基因作为报告基因检测了腺病毒在大鼠体内的分布和表达持续时间，通过大鼠冠状动脉结扎后制作的心肌缺血动物模型，证明重组腺病毒Ad—HGF对大鼠，心肌缺血的治疗是有效的。以上结果说明Ad—HGF的构建是成功的，在体内外都显示了其生物学活性、为基因治疗缺血性心脏病提供了实验依据．