吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶对K562细胞增殖的影响

应用MTT实验、细胞计数法检测吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶,流式细胞仪(FCM)和DNA末端标记法(TUNEL)检测IAA/HRP对细胞增殖周期和细胞凋亡的作用,研究了吲哚乙酸(indole-3-acetic acid IAA)结合辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase HRP)对K562细胞增殖的影响.结果表明,与对照组相比,IAA和HRP单独处理组对K562细胞的生长具有部分抑制作用,但无显著性差异;而IAA与HRP结合后对K562细胞的抑制作用明显增强.流式细胞仪检测结果表明,K562细胞阻滞于G2/M期.IAA/HRP具有明显的诱导K562细胞凋亡的作用,且诱导凋亡的作用与IAA浓度呈正相关(r=0.971,P<0.01).IAA/HRP能明显抑制K562细胞生长,将细胞周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡.     

选择性COX-2抑制剂尼美舒利对白血病K562细胞增殖的影响

目的:观察选择性COX-2抑制剂尼美舒利对人类骨髓白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别以尼美舒利25、50、100μg.mL-1体外处理骨髓白血病K562细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及DNA片段凝胶电泳等方法,检测尼美舒利对K562细胞增殖和凋亡的影响。结果:尼美舒利剂量依赖性地抑制K562细胞增殖,其中等剂量组(50μg.mL-1)的抑制作用强于阿霉素组(25μg.mL-1);尼美舒利可诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其诱导细胞凋亡的作用也呈剂量依赖性(剂量由低至高,凋亡率分别为(3.4±2.8)%,(16.8±1.8)%和(42.7±2.5)%;DNA条带分析也进一步证实了尼美舒利的促凋亡作用。结论:尼美舒利在体外可显著抑制K562细胞增殖,该作用可能与其干扰细胞周期、诱导细胞凋亡有关。     

MTT法评价3种鸡腿菇多糖的体外抗肿瘤活性

采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测超声辅助提取后经季铵盐沉淀分级得到的鸡腿菇多糖(UCP-3)、硫酸酯化鸡腿菇多糖(SWCP)和羧甲基化鸡腿菇多糖(CWCP)对人白血病K562细胞体外生长的抑制活性,研究不同的处理工艺对鸡腿菇多糖体外抑制K562细胞增殖活性的影响.结果表明:3种鸡腿菇多糖均可抑制K562细胞的体外生长,抑制作用随着多糖浓度和作用时间的变化而变化;超声处理多糖可能引起单糖之间连接方式变化进而使得其生物活性发生改变;SWCP与CWCP对K562细胞的体外生长抑制作用明显,所以对鸡腿菇多糖进行化学修饰有助于提高其生物活性.     

二异丙氧基磷酰化亮赖叉肽甲酯诱导K562细胞凋亡

为寻找能特异性诱导肿瘤细胞凋亡的小分子诱导剂,研究了二异丙氧基磷酰化亮赖叉肽甲酯((DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3)对K562细胞的促凋亡作用。合成了(DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3,通过质谱、磷谱、氢谱和碳谱进行结构鉴定。通过MTT比色实验得到:该样品对K562细胞的半抑制浓度为22.66μmol.L-1。AO荧光染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和Annexin -FITC/PI双染实验表明:该样品对K562细胞的增殖抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的。Caspase活性分析实验证明该样品是通过线粒体途径启动细胞凋亡。     

血小板对NK细胞杀伤K562细胞的影响

目的　探讨血小板对外周血纯化、扩增的NK细胞杀伤作用的影响.方法　使血小板与K562细胞在体外共孵育,以相差显微镜和流氏细胞仪检测血小板与K562细胞的粘附.从外周血单个核细胞(PBMC)中分离纯化、扩增NK细胞,以MTT法研究血小板对NK细胞杀伤活性的影响.结果　K562细胞体外能结合血小板,粘附率达到(25.0±4.3)%.血小板与K562细胞的粘附可抑制NK细胞对K562细胞的杀伤作用,且血小板对NK细胞杀伤活性的抑制呈数量依赖性.结论　血小板能粘附肿瘤细胞并能抑制NK细胞对K562细胞的杀伤作用.     

力达霉素对人红白血病K562细胞死亡的影响

利用100,10和1nmol·L-1力达霉素(LDM)处理人红白血病K562细胞(p53,p16基因缺失),初步探讨了LDM对K562细胞死亡的影响. 结果表明,LDM可明显抑制K562细胞的活性,并呈现剂量依赖效应. 细胞核染色质呈点状或斑块状凝集.通过流式细胞术对细胞周期时相的分析表明,高剂量LDM处理引起S期细胞的比例明显升高,死亡细胞的比例明显增加,提示LDM通过引起DNA的损伤,可阻断细胞周期的进程,促进细胞的死亡实现抑癌作用.     

伊曲康唑对K562细胞增殖及HUVEC细胞血管形成的影响

老药新用是许多药物研究者关注的焦点.伊曲康唑作为临床应用近30年的抗真菌药物,其安全性毋庸置疑.近年来研究者们陆续发现伊曲康唑还具有抗肿瘤的作用,然而对于伊曲康唑抑制人慢性髓原白血病的增殖作用却鲜有报道.为了研究伊曲康唑抑制白血病K562细胞增殖的作用及其抑制血管形成的作用,采用MTT法、Annexin VFITC/PI双染法和基质胶血管形成实验等方法研究伊曲康唑对白血病K562细胞存活率、增殖曲线、细胞形态学变化、细胞凋亡、细胞周期变化和管腔形成的影响,揭示了伊曲康唑能够抑制K562细胞增殖并能抑制血管形成,以此为进一步研究与改造伊曲康唑的抗肿瘤作用提供基础数据.     

1-硝基芘和苯并[a]芘对人肺上皮A549细胞的联合细胞毒性

1-硝基芘(1-nitropyrene,1-NP)是柴油车尾气中检测浓度最高的硝基多环芳烃.以1-NP为主体,人肺上皮A549细胞为研究对象,探讨了1-NP和苯并[a]芘(benzo(a)pyrene,B[a]p)的联合细胞毒性及其对DNA的损伤.联合染毒实验结果表明:当B[a]p和1-NP同时作用于A549细胞时,B[a]p能明显减弱由1-NP造成的细胞增殖抑制和细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平升高,但对DNA的损伤与1-NP单独染毒组相近;利用B[a]p预染毒A549细胞24 h,能明显减弱由1-NP造成的细胞增殖抑制和ROS水平升高,但对DNA的损伤加剧.以上结果说明,1-NP和B[a]p联合作用可能是通过抑制ROS的生成来降低对细胞增殖的抑制,但所造成的对DNA损伤的加剧可能是通过其他的作用途径.     

灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞影响

观察灵芪胶囊含药血清在体外对K562白血病细胞增殖的影响.采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用MTT比色法观察灵芪胶囊含药血清对K562细胞增殖的影响,采用Wright-Giemsa染色观察肿瘤细胞形态学变化.不同浓度灵芪胶囊含药血清对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系.当含药血清作用96h后,其抑制作用开始减弱.高剂量LQC含药血清对K562细胞形态学有明显的影响.灵芪胶囊含药血清具有抑制K562白血病细胞增殖作用,其作用强度与时间-浓度呈正相关,其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关.     

柴胡皂甙d(SSd)对K562细胞增殖的抑制作用

目的研究从柴胡中提取的单体成分柴胡皂甙d对K562细胞生长的影响.方法分别用不同质量浓度的SSd作用于K562细胞株,于不同时间段分别计数其平均细胞数,并绘制相应生长曲线,计算平均抑制率.药物作用后24,36,48 h,计算分裂指数.结果用药后K562细胞的细胞数、分裂指数均下降,下降幅度与剂量呈正相关.结论 SSd能抑制K562细胞增殖,这种抑制作用呈时间和剂量依赖关系(P<0.05).     

不同分子质量软骨多糖对K562细胞的增殖抑制作用

研究不同分子质量的软骨多糖对慢性髓系红白血病K562细胞的增殖抑制作用。用不同浓度的酒精对软骨提取物进行分级沉淀，得到不同分子质量的软骨多糖，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测所得软骨多糖的纯度及分子质量；采用噻唑蓝（MTF）比色法测定细胞的增殖活性；用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA电泳特征。结果显示，短链软骨多糖（分子质量约为30ku）对K562细胞具有明显的增殖抑制作用，这种抑制作用呈现明显的时间依赖性，且琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNA梯状条带。     

Apoptosis induced by （DIPP-L-Leu）2-L-Lys-OCH3 in K562 cells

Apoptosis as a mechanism of deleting cells from tissues plays an important role in physiological and varieties of pathological situations, especially cancer conditions. In order to search for tumor cells apoptosis inducers, the inhibition effects on K562 cells of N-phosphoryl dipeptide methyl esters were studied by MTT assays, and (DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3 was the compound which had the best activity. From the studies of the typical apoptotic morphologic changes, DNA agarose gel electrophoresis, and flow cytometry analysis, it could be concluded that (DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3 could induce apoptosis of K562 cells in a dose-dependent manner, and the IC50 was 22.66 μmol/L according to MTT assays.     

IL－10与放线菌酮诱导K562细胞凋亡

目的：研究IL－10对放线菌酮（CHX）诱导K562细菌凋亡所产生的调节作用。方法：采用碘化丙啶（PI）染色流式细胞仪分析，形态学观察及DNA凝胶电泳检测K562细胞。结果：CHX组K562凋亡细胞达58．3％，CHX加IL－10组达75．8％。结论：（1）CHX能诱导K562细胞凋亡。（2）IL－10和CHX联合作用诱导K562细胞凋亡的作用增强。     

c－Myb基因反义寡核苷酸对K562细胞增殖和生长的影响

用体外培养技术研究了ｃ－Ｍｙｂ基因的ｍＲＮＡ反义寡核苷酸对慢粒Ｋ５６２红白细胞系增殖和生长的影响。结果显示：ｃ－Ｍｙｂ基因反义寡核苷酸在２０～１６０μｇ／ｍｌ时，对细胞的增殖与集落的形成有明显的抑制作用，提示：ｃ－Ｍｙｂ基因在控制白血病细胞增殖与生长中起重要作用     

抗CD71人-鼠嵌合抗体的制备及其诱导肿瘤细胞凋亡

目的 :研究在液氮中冻存 2年的转染瘤细胞株 (D2C)复苏后其分泌抗CD71人 -鼠嵌合抗体的特异性、分泌量及诱导肿瘤细胞凋亡的效应。方法 :用ELISA方法检测转染瘤细胞培养上清的抗体分泌量。经DEAE SephadexA 5 0离子交换法纯化产生的抗体 ,并采用SDS PAGE电泳鉴定 ;台盼蓝拒染法观察其对K5 6 2细胞生存的影响 ;细胞计数和MTT试验测定嵌合抗体及鼠源性抗体对K5 6 2细胞的作用 ;琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察K5 6 2细胞凋亡。结果 :Balb/c裸鼠腹腔接种转染瘤细胞后 ,每只裸鼠腹水量在 3～ 5mL。抗体经纯化 ,产量约为 1～ 2mg/mL腹水。经SDS PAGE电泳鉴定 ,在分子量 5 5kD和 2 7kD处 ,可见有抗体IgG重链和轻链的染色条带。抗CD71嵌合抗体及鼠源性抗CD71抗体均可抑制K5 6 2细胞的增殖作用 ,且二者抑制作用无显著性差异 (P >0 .0 5 )。经琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察分别可见抗体诱导的K5 6 2细胞DNA梯形条带和细胞凋亡的形态改变。结论 :液氮中冻存 2年的转染瘤细胞体外生长良好 ,抗体分泌稳定 ,特异性高 ,并可诱导K5 6 2人红白血病细胞凋亡     

3-MA 对阿霉素诱导 K562、K562 / ADM 细胞凋亡及其相关基因 mRNA 表达的影响

目的：通过自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对阿霉素（ADM）诱导白血病K562细胞及K562／ADM细胞的细胞效应和自噬基因Beclinl、凋亡抑制基因SurvivinmR．NA表达的变化观察,探讨自噬在细胞凋亡中的作用和机制．方法：体外培养K562和K562／ADM细胞,采用MTT法分别检测ADM及3-MA预处理对K562、K562／ADM细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时RT—PCR法检测细胞自噬及凋亡相关基因（Beclinl、Survivin）mRNA表达的变化．结果：ADM可抑制K562与K562／ADM细胞增殖,且抑制作用呈现浓度与时间依赖性．ADM诱导组K562与K562／ADM细胞在24h、48h、72h细胞凋亡率均较空白对照组明显提高（P〈0．05）．在ADM诱导前,经3-MA预处理可使ADM诱导的K562与K562／ADM细胞抑制率和细胞凋亡率均较单用ADM显著提高（尸〈0．05）,Bedin1、SurvivinmRNA相对表达量均较单用ADM明显下降（P〈0．05）,呈正相关（r=0．827,P〈0．01）．结论：ADM可抑制K562、K562／ADM细胞的生长,并诱导细胞凋亡．3-MA通过抑制细胞的自噬可增强ADM诱导白血病细胞K562、K562／ADM的凋亡,其机制可能与下调BeclinlmRNA表达,而使Survivin表达受抑制有关．     

Knockdown of <Emphasis Type="Italic">MRP4</Emphasis> by lentivirus-mediated siRNA improves sensitivity to adriamycin in adriamycin-resistant acute myeloid leukemia cells

Chemotherapy remains the standard treatment for acute myeloid leukemia;however,the emergence of drug resistance is a major hurdle in the successful treatment of leukemia.The expression of multidrug resistance-associated protein 4(MRP4)induces re- sistance in the adriamycin-resistant acute myeloid leukemia cell line,K562/ADR.The aim of this study was to investigate whether knockdown of MRP4 by lentivirus-mediated siRNA could improve the sensitivity of K562/ADR cells to adriamycin.Five lenti- virus-mediated short hairpin RNAs(lv-shRNAs-MRP4)were designed to trigger the gene silencing RNA interference(RNAi) pathway.The efficiency of lentivirus-mediated siRNA infection into K562/ADR cells was determined using fluorescence mi- croscopy to observe lentivirus-mediated GFP expression.MRP4 expression in infected K562/ADR cells was evaluated by real- time PCR and Western blot analysis.The MTS assay was used to measure cell viability and flow cytometry was used to measure apoptosis.The transfection efficiency of K562/ADR cells was over 80 percent.The gene silencing efficacy of lv-shRNA1-MRP4 was superior to the other constructs.Infection of K562/ADR cells with lv-shRNA1-MRP4 led to strong inhibition of MRP4 mRNA and protein expression.Combined treatment with lv-shRNA1-MRP4 and adriamycin decreased cell growth and increased apoptosis compared to treatment with lv-shRNA1-MRP4 or adriamycin alone.These data indicate that in K562/ADR cells MRP4 is involved in drug resistance mechanisms and that lentivirus-mediated knockdown of MRP4 may enhance sensitivity to adriamycin.