补骨脂胰蛋白酶抑制剂的亲和层析分离纯化和部分性质

本文介绍牛胰蛋白酶—对氨基苯砜乙基(ABSE)—Sepharose—4B的制备,及用此亲和吸附剂分离提纯补骨脂胰蛋白酶抑制剂的过程。用该方法对补骨脂胰蛋白酶抑制剂粗提物进行分离,可获得电泳单点纯样品。经SDS—PAGE电泳测定,该抑制剂的分子量为55000。等电聚焦电泳测定其等电点为pⅠ6.6,Chiff试剂染色为阴性。氨基酸组成分析結果表明含12种氨基酸,其中Gly、Glu含量最高。     

文昌鱼体表粘液凝集素的初步研究

文昌鱼体表粘液经卵粘蛋白 -Sepharose 6B亲和层析法分离出一种凝集素 (AmphioxusMucusLectin ,简称AML) .该凝集素能凝集兔及人的红血细胞 ,无血型专一性 ;其凝血活性不依赖于Ca2 和Mg2 ,在 pH6-1 0范围较稳定 ,经 60℃保温 1 0min活性则完全消失 ;SDS PAGE测得其亚基分子量为93 0 0 0 ;含糖量为 2 6% .文昌鱼凝集素在文昌鱼的免疫防卫中可能起着重要作用 .     

扩展青霉脂肪酶的纯化及氨基酸序列测定

扩展青霉 (Pen .expansum)WMC2 0 718所产碱性脂肪酶经离心分离、硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析以及凝胶过滤等步骤 ,其酶纯化了 18.5倍 ,获得了比活性为 4 2 0 0U mg的纯碱性脂肪酶 ,提取得率 4 8.8%。纯化后的脂肪酶经过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和高效反相色谱 (RP HPLC)检测 ,分别达到了SDS PAGE电泳纯和RP HPLC色谱纯。经SDS PAGE和SephadexG 15 0凝胶过滤色谱 ,分别测得酶的相对分子质量为 2 75 0 0和 2 82 0 0 ,表明该酶以单体形式存在。N末端 2 0个氨基酸残基序列测定的结果为ATADAAAFPDLHRAAKLSSA。该酶的最适作用温度为 30℃ ,在 35℃以下稳定 ,4 5℃处理 30min仅残留 30 %酶活性 ;pH稳定范围在 6 .5～ 10 .5之间 ,最适pH值为 10 .0。阴离子表面活性剂LAS对该酶活性的影响较大 ,而非离子表面活性剂AEO9对酶活性无影响。洗涤剂蛋白酶在规定的添加量范围内 ,对脂肪酶的活性影响较小。     

小白芸豆凝集素的分离纯化及性质研究

从小白芸豆中分离纯化出一种新的凝集素,对其部分理化性质和生物活性进行研究.小白芸豆经过去皮粉碎、浸提、硫酸铵分段盐析、SP Sepharose阳离子交换、Q Sepharose阴离子交换和Superdex 200凝胶过滤层析后可得到小白芸豆凝集素(Phaseolus vulgaris var.albuslectin,PVAL)纯品.测定了PVAL的表观分子质量、亚基分子质量、糖含量、等电点、氨基酸组成、酸碱稳定性以及抗癌性.PVAL的表观分子质量为136 ku,是由2种分子质量分别为36.2 ku和32.2 ku的亚基组成的四聚体,糖含量为4.93%,等电点分布在pH5.3~6.0之间.PVAL分子无半胱氨酸,也无二硫键,疏水性氨基酸质量分数约为37%.PVAL对酸碱的耐受性比较好,并且对肿瘤细胞MDA-MB-435S有较好的抗性.     

人类绒毛膜促性腺激素（HCG）的高分辨双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

采用高分辨的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D—PAGE)对人类绒毛膜促性腺激素(~bCG)进行分析。第一向等电点聚焦电泳(IEF)后,在第二向SDS—聚丙烯酰胺梯度凝胶垂直板上电泳(SDS)—PAGE),电泳结束,用银染色法染色,电泳图谱上得到三条主要的蛋白区带,即A,B和C带,并测定了它们的pH值和分子量,A带分子量是36K为未裂解的~hCG,B带分子量是23K为~hCG的β—基亚,C带分子量是17K为~hCG的α—亚基,通过双向电泳的分析和鉴定,为~hCG的分子结构在双向电泳中的特性提供了初步参考数据。     

昆虫细胞杆状病毒表达人生长激素的纯化及性质研究

在昆虫细胞杆状病毒中表达的人生长激素，经CM－52离子交换柱层析和Phenyl-Sepharose CL-4B疏水柱层析后，去除了93％杂蛋白。再用CNBr-activated Sepharose 4B亲和柱层析的方法，获得高纯度的生长激素样品。SDS－PAGE结果表明，纯化样品在SDS－PAGE图谱呈现一条带，分子量为22kD。Western杂交结果表明，纯化样品与生长激素标准品有相似的免疫活性。胰肽图谱分析结果显示纯化样品和标准品具有相同的一级结构。DNS－CL测N末端表明，纯化样品的N末端为苯丙氨酸，所有这些性质均与天然人生长激素相同。     

家蚕碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质

经10％～50％硫酸铵分级沉淀分离，DEAE—Sepharose离子交换柱层析,Sephacryl S-200凝胶过滤纯化,从家蚕（Bombyx mori）肠液中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶、该酶提纯倍数为464倍，比活力为3936U／mg、酶学性质和动力学性质研究表明，该酶催化磷酸苯二钠的水解反应，最适pH值为10.5，pH小于7.5和大于11均不稳定；最适温度为40℃，温度高于50℃不稳定；米氏常数Km值为1．25mmo1／L.     

白眉蝮蛇毒降血压组份的分离纯化及其性质的初步研究

从东北长白山脉的白眉蝮蛇(A.H.Ussurfensis)蛇毒中得到一种聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的降压组份(Hypotensive cpmponent)简称HTC,该组份经过DEAE—Sephadex A_(50)和Sephadex G—75柱层析两步完成,HTC 不含碳水化合物,SDS—PAGE 电泳测得分子量为17500道尔顿,等电点为pH6.6,它具有精氨酸酯酶活性而没有出血活性,促凝,抗凝,纤溶等活性、也无磷脂酶A_2、蛋白质水解酶和L—氨基酸氧化酶的活性.按每公斤家兔体重静脉注入0.1mg HTC 其血压显著下降,数分钟后,血压基本上恢复正常.     

枯草杆菌SBS6中一种纤溶酶的纯化及部分特性

从枯草杆菌SBS6菌株发酵上清液中分离得到电泳纯的纤溶酶，经SDS—PAGE和凝胶过滤测得其分子质量为31ku，最适pH8．9，最适温度为50oC，酶在60℃下pH5～12范围内相当稳定，Ca^2 ，Mg^2 ，Zn^2 ，Mn^2 等离子对酶的溶解血纤维活性无明显影响，Fe^2 和Fe^3 分别抑制酶活性的17％和20%。     

两种蛋白类添加剂对鳙鱼鱼糜凝胶特性的改良

通过检测鱼糜凝胶的质构及微观结构,研究了鸡蛋清蛋白和谷朊粉两种蛋白类添加剂对鳙鱼鱼糜凝胶特性的影响,并采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)对相关作用机理进行分析．结果表明：这两类添加剂可明显提高鳙鱼鱼糜的凝胶特性,使其形成致密、均匀的凝胶网络结构,且浓度越大,作用越强;鸡蛋清蛋白还可增加鳙鱼鱼糜凝胶的白度,但谷朊粉则使白度降低．SDS—PAGE实验表明,鸡蛋清蛋白和谷朊粉对鳙鱼鱼糜凝胶肌球蛋白重链(MHC)带的强度影响不大．     

鲢鱼（Aristichthys nobilis）鱼精蛋白的纯化和鉴定

采用Sephadex G-50凝胶层析、GM-Sepharose CL 6B离子交换层析及反相高压液相色谱等步骤从鲢鱼鱼精蛋白的粗品中分离得到一种具有抗菌活性的蛋白质。经SDS－PAGE及生物质谱鉴定,该蛋白质为单一组份,分子量为13331.9.Da。该蛋白分子中碱性氨基酸总量为33．4％,N－末端序列为NH2－Pro-Gln-Arg-His-Lys。     

Phaseolus lunatus Linn vel aff的种子中A型血专一性凝集素的研究

用亲和层析法从Phaseolus lunatus Linn vel aff的种子中纯化出一种对人类A型血专一的凝集素.该凝集素的粗浸提液都只对A型血细胞凝集,而对B、O型绝不凝集.当纯化的凝集素浓度为0.98μg/mL时,即能凝集A型血细胞,GalNAc、对硝基苯酚-β-D-吡喃半乳糖苷能抑制其凝集作用;酚—硫酸法测得凝集素含有3.8％的中性糖;该凝集素是一个促有丝分裂原,其细胞转化为67.9％;它的分子量为56500,有两种亚基,分子量分别为17200和14600.凝集素分子中亮氨酸和缬氨酸含量较高,分别为9.83和9.64,而酸性氨基酸含量远比碱性氨基酸为高.     

地衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheni formis）AS10106α－乙酰乳酸脱酸酶经硫酸沉淀，聚乙二醇沉淀，DEAE－Sepharose Fast Flow离子交换，Gigapite K-100S柱层及SephadexG－100分子凝胶过滤柱等分离纯化步骤，得到SDS－PAGE电泳纯，α－乙酰乳酸脱羧酶的比活提高了53．5倍。对该酶性质的研究表明，酶单亚基分子量为32Kda，等电点为4．5；该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH为6．0，对热（40℃以上）敏感。在pH5．0－6．5之间稳定。酶活不需要金属阳离子，Cu^2 、Co^2 强烈抑制酶的活性。摇瓶实验表明，纯化的地衣芽孢杆菌α－乙酰乳酸脱羧酶能明显降低双乙酰的形成并缩短其还原时间。     

草鱼肌肉亮氨酸氨肽酶的分离纯化与性质研究

通过DEAE-Sephacel离子交换层析、Sephacryl S-200 HR凝胶过滤层析、羟基磷灰石层析和Phenyl Sepharose 6-Fast Flow疏水层析,从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉中分离纯化得到了一种亮氨酸氨肽酶,并对其生物化学性质进行了研究.结果表明,草鱼肌肉亮氨酸氨肽酶分子量约为105 ku,是单体结构.最适温度为40 ℃,最适pH为7.5,属于金属蛋白酶.除了Leu-MCA,该酶对其它多种荧光合成底物也有一定程度的分解作用,但对内肽酶对应的荧光底物则没有分解作用.     

韭菜凝集素的纯化及部分性质的研究

用葡聚糖凝胶柱层析法从韭菜的叶片组织分离出一种对新鲜兔红细胞有强烈凝集作用的凝集素，ＰＡＧＥ鉴定和高碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂反应均显单一条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明该凝集素含有３个亚基，其相对分子质量分别约为３１０００、２４０００和２１０００。韭菜凝集素具有一定的热稳定性，在酸、碱处理中该凝集素对碱处理较酸处理稳定，氨基酸组成分析表明韭菜凝集素含有１４种氨基酸，其中半胱氨酸含量较高。     

黑曲霉糖化酶的纯化及特性鉴定

采用硫酸铵高饱和度一步沉淀,Sephadex G-25脱盐,DEAE—Toyopearl离子交换层析,Sepharose S—100 HR凝胶过滤法,从黑曲霉糖化酶粗酶液中纯化出电泳均一的糖化酶。其分子量为73～75Kd,等电点为pH3.3,最适pH为4.2,最适反应温度为60℃,对可溶性淀粉的K_m值为7.56。该糖化酶的含糖量为17.9％,此外还测定了其氨基酸组成及含量。     

纳米SiO2的制备及性能研究

 用溶胶—凝胶法制备了纳米SiO₂,考察了溶胶的浓度和pH值对凝胶时间的影响,并用FT-IR,XRD和TEM研究了其在热处理过程中的物相及显微结构.结果表明:溶胶浓度和溶胶pH值对凝胶时间影响较大.在温度为600℃时,经过烧结晶化,可制得纳米二氧化硅,其平均粒径20nm,外观形状呈球形,且热稳定性良好.     

蚕豆外源凝集素的研究

用葡聚糖凝胶G—75亲和层析柱和猪甲状腺球蛋白—ABSE交联琼脂亲和层析柱纯化所得的蚕豆外源凝集素,其聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示:前一方法提取的蚕豆外源凝集紊呈一条深色带,一条浅色带,后一方法提取的蚕豆外源凝集素呈一条显色带。经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其亚基分子量为23800。血凝反应表明蚕豆外源凝集素能显著地凝集兔的红细胞,对人(A型和O型)和猪的红细胞也有不同程度的凝集效应,并对人的外周血淋巴细胞具有促有丝分裂作用。用猪甲状腺球蛋白—ABSE交联琼酯作为亲和吸附剂与国外沿用的Sephadex G—75法相比较,具有成本低、操作步骤较简便的优点,此外,它所提取的蚕豆外源凝集素的生物活力也较鬲。     

农药靶标乙酰胆碱酯酶的分离纯化及性质研究

采用了Sephadex G-25层析,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤层析,对家蚕头部粗酶匀浆液中的乙酰胆碱酯酶进行纯化,得到的样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和SDS-PAGE检测均为一条带,用SDS-PAGE法测得其分子量为77.8 kDa.酶的最适反应温度为37 ℃,最适pH为7.5,对底物碘化硫代乙酰胆碱(ATChI)的Km值为0.392 mmol/L,最适底物浓度为1.6 mmol/L,在1.6 mmol/L底物浓度以上观察     

中国黑白花优良种公牛精子透明质酸酶的分离纯化及部分性质研究

中国黑白花优良种公牛精子透明质酸酶经硫酸铵分级沉淀和 Sephadex 柱层析分离纯化,得到一个电泳纯品,活力纯化40倍.用 sephadexG-150凝胶过滤和 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为65000.该酶的最适 pH 为3.5～4.5,最适温度为37℃～45℃,在室温下较稳定,用 Limeweaver-Burk 作图法求得 Km 值为6.06×10~(-4)mol/L.