动物脑组织中钙调蛋白的分离纯化

本文主要以动物脑组织为材料,经热变性、离心、葡聚糖SephadexG-50分离纯化,通过紫外吸收图谱、二步酶解法检验钙调蛋白的纯度、浓度。结果显示,利用本法可分离纯化得到的钙调蛋白对PDE的激活倍数为83.3,比标准的钙调蛋白(对PDE的激活倍数为67.4)更具生物活性.     

东海原甲藻的培养及色素分离分析

以自行培养的赤潮藻东海原甲藻（Prorocentrum donghaiense Lu）为材料,采用薄层层析（TLC）和高效液相色谱（HPLC）法对稳定生长的藻体色素进行了分离和分析．结果显示,东海原甲藻适宜生长于18—22℃,经活化、培养,一般于接种后的第4—5天进入稳定生长期．采用硅胶薄层层析方法（最适展层剂配比为石油醚：乙酸乙酯：乙醚：乙醇=20：6：3：2）从藻体色素抽提液中成功地分离到12条色素带,经颜色、极性、迁移率比对,以及荧光观察和吸收光谱分析,确定为1条Chla、1条ChlC2、1条β-胡萝卜素、1条去镁Chlα、1条多甲藻素以及硅甲藻黄素和硅藻黄素等其他4条叶黄素带,此外还有2—3条Chla或ChlC2衍生物带．进一步摸索了反相C18柱高效液相色谱（HPLC）分离东海原甲藻色素的条件,选用440nm波长检测,可得到至少30种组分．分离结果为进一步了解东海原甲藻的生长和光合特性以及赤潮研究提供了理论依据．     

东海赤潮生物具齿原甲藻及其特征

2000年至今连续三年的5月在东海的舟山海域发生大规模红褐色具齿原甲藻赤潮。在赤潮监测中对该种的形态及习性作了观察研究，结果表明：本种分布于我国东南沿海，主要分布于盐度较高的水域，5月份是繁殖盛期易发生赤潮，在河口低盐水域和高温季节不易发生赤潮，具齿原甲藻赤潮在近几年频繁发生与东海沿岸富营养化加剧有关。具齿原甲藻具有昼夜垂直移动特性，使得它们在获得光能、营养盐方面更具优势，在低磷环境中具有较强的种间竞争能力。对于大规模赤潮发生的原因、富营养化的贡献、种间竞争在赤潮发生过程中的作用等问题有待于进一步深入研究。     

塔玛亚历山大藻溶血毒素对东海原甲藻的化感作用

为明确塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)对东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense Lu)生长的化感作用,揭示塔玛亚历山大藻和东海原甲藻的藻间竞争关系,本研究探讨了不同营养盐条件下塔玛亚历山大藻无藻细胞滤液中溶血毒素对东海原甲藻生长的影响.研究发现,塔玛亚历山大藻的无藻细胞滤液中溶血毒素对东海原甲藻的生长有显著的抑制作用;无藻细胞滤液中溶血毒素的活性强弱依次为:N-限制,Fe-限制,富营养与P-限制;溶血毒素的抑制作用大小与溶血毒素活性强弱一致.提示溶血毒素在塔玛亚历山大藻的化感作用中可能扮演重要角色.     

氮和磷对东海原甲藻吸收Cd(Ⅱ)及其分布的影响

研究了不同氮和磷浓度下,东海原甲藻(Prorocen trum dongha ineseLu)对微量Cd(Ⅱ)的吸收及其在细胞亚结构和大分子物质中的分布.结果表明,硝酸盐的添加促进了藻细胞对Cd(Ⅱ)的吸收,而磷酸盐的添加在低浓度Cd(Ⅱ)时对藻细胞吸收Cd(Ⅱ)没有影响,但在高浓度Cd(Ⅱ)时则抑制藻细胞对Cd(Ⅱ)的吸收;尿素为氮源时,细胞中Cd(Ⅱ)的含量较硝酸盐为氮源时高.细胞内的Cd(Ⅱ)主要分布在可溶性物质中.硝酸盐的添加主要影响Cd(Ⅱ)在细胞亚结构中的分布,细胞壁中Cd(Ⅱ)的含量随培养液中硝酸盐浓度的增加而降低,而细胞器中的含量却随培养液中硝酸盐浓度的增加而增加;培养液中磷浓度的添加增加了细胞壁内Cd(Ⅱ)的含量.Cd(Ⅱ)在各生化组成中的分布以蛋白质中含量最高,可达总Cd(Ⅱ)含量的55.0%~79.6%,脂类中含量最低,仅为总Cd(Ⅱ)含量的5.9%~7.1%,蛋白质内Cd(Ⅱ)的含量随培养液中硝态氮浓度的增加而增加.蛋白质内Cd(Ⅱ)的含量与藻细胞内的蛋白质含量密切相关.     

钙调蛋白拮抗剂研究进展

本文介绍了钙调蛋白及其在细胞增殖中的作用和钙调蛋白拮抗剂的研究进展,提示新型钙调蛋白拮抗剂——小檗胺及其衍生物是一种具有很大潜力,值得开发和研究的抗肿瘤化合物。     

钙调蛋白的功能

钙调蛋白（Calmodulin,CaM）是Ca~(2 )的重要受体,大量事实表明CaM—Ca~(2 )参与调控酶的活性、促进细胞增殖、调节微管解聚。研究钙调蛋白的功能具有重要的理论意义和实际意义。     

东海原甲藻和链状亚历山大藻对硝酸盐和氨盐的生理响应

比较研究了硝酸盐和氨盐培养下,两种甲藻(东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense Lu)和链状亚历山大藻(Alexandriumcatenella DH01))对氮营养盐的生理响应.结果表明,两种赤潮生物的最大比增长率均随着培养液中硝酸盐浓度的升高(20～80μmol/L)而增加,且硝酸盐培养下的最大比增长速率高于同浓度的氨盐,表明在高浓度下,硝酸盐是适宜的氮源.东海原甲藻硝酸还原酶活力(1.14～5.20 fmol/(cell.L.min))与硝酸盐吸收速率呈正相关,链状亚历山大藻中则未检测到硝酸还原酶活力;两种赤潮生物谷酰氨合成酶活力对硝酸盐和氨盐的响应存在差异,链状亚历山大藻谷氨酰胺合成酶活力(10.93～30.97 pmol/(cell.L.min))要远高于东海原甲藻(0.34～0.95 pmol/(cell.L.min)).两种赤潮生物对硝酸盐和氨盐的不同生理响应可能是引起赤潮期间种群更替的一个重要原因.     

基于核糖体DNA大亚基片断序列探讨中国东海海域赤潮原甲藻的分子分类

采用PCR扩增技术对分类上有争议的中国东海赤潮原因种(被称为东海原甲藻．本简称：东海株系)的基因组DNA进行了核糖体DNA大亚基片断(LSU rDNA)的扩增和测序．并与一同扩增的来自美国CCMP的被称为具齿原甲藻(本简称：CCMP株系)的同源序列进行分析比较。结果表明，两710bp的LSUrDNA同源序列中仅存在7个碱基的差异．遗传相似度高达99．01％．遗传差异为0．99％．进一步与Genebank其他3种原甲藻即P．mezicanum、P．mieans和P．minimum的同源序列进行比较，发现其他3种原甲藻两两问的种间遗传相似度在91．1％～95．5％之间．而P.micans和P．minimum种内不同株系的遗传相似度为99．4％～99．9％．均为99％以上．综合这些数据说明东海株系与CCMP株系之间的0．99％的遗传差异应视为种内差异．原甲藻的东海株系与CCMP株系当属异名同种．因此本试验结果从分子水平支持了被称为东海原甲藻的原甲藻与被称为具齿原甲藻(P．deantatum)的原甲藻同为一种的观点。     

豇豆钙调蛋白cDNA的克隆及序列分析

从豇豆成熟叶片中提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,根据钙调蛋白结构基因两端保守序列设计引物,PCR扩增豇豆钙调蛋白基因,克隆到T-easy载体上并测定了其全序列.序列分析结果表明,豇豆钙调蛋白基因由450个核苷酸组成,编码150个氨基酸.与已知的多种植物钙调蛋白基因相比有很高的相似性,核苷酸序列相似性在80%以上,编码的氨基酸序列相似性在90%以上.     

EST analysis of Prorocentrum donghaiense with emphasis on genes involved in PCD

Prorocentrum donghaiense has caused large-scale red tides off the Chinese coast in recent years.Ex-pressed sequence tag(EST)analysis was carried out for this dinoflageilate in order to identify the func-tional genes involved in its biological processes.A cDNA library was constructed for P.donghaiense atexponential growth phase,and 565 usable sequencing reads were obtained from 700 clones selected ran-domly.Messenger RNA corresponding reads were clustered into 36 contigs and 272 singletons(ESTgroups).Twe...     

新型钙调蛋白拮抗剂(EBB、BB、B_0)对CaM基因表达的影响

本文初步探讨了小檗胺 ( B0 )及其衍生物 ( EBB胺 BB)对 Ca M基因表达的影响 .结果表明三种化合物不仅能拮抗 Ca M的调控功能 ,而且对 Ca M基因表达系统亦有抑制作用 .为进一步探讨 Ca M拮抗剂的分子机制具有一定的参考价值 .     

工程菌表达马铃薯钙调素(PCM 6)的抗体制备及鉴定

PCM6是马铃薯钙调素亚型中与其他植物钙调素在氨基酸序列上最为保守的一种，利用大肠杆菌表达系统，表达并纯化了这种蛋白，以纯化的重组马铃薯CaM(PCM6）蛋白为抗原，免疫新西兰兔，获得了高效价（1：16000）抗体，免疫印迹检测表明，制备的抗体与植物钙调素有特异性的免疫交叉反应。     

植物钙调素的分离纯化及其特性研究

本文以烟草愈伤组织和花椰菜这花序为材料，分离纯化钙调素。所得ＣａＭ的纯度用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定；生物活性用其对牛心肌环腺苷酸磷二酯酶（ＰＤＥ）的激活作用测定（ＣａＭ）的产量用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定。并比较了上Ｐｈｎｅｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱前对ＣａＭ溶液的不同处理。纯化的烟草愈伤组织和菜花ＣａＭ，具有牛脑ＣａＭ所特有的一些性质。它对牛心肌ＰＤＥ有明显激活作用，在含有Ｃａ＾２＋     

蚯蚓钙调素二级结构的研究及Ca^2＋,Tb^3＋的影响

运用ＦＴ－ＩＲ方法的分辨率增强及曲线拟合技术对水化膜中蚯蚓钙调素ＣａＭ的二级结构以及加入不同比例Ｃａ＾２＋、Ｔｂ＾３＋后ＣａＭ二级结构的变化进行了研究。结果表明，水化膜中ＣａＭ及含不同比例Ｃａ＾２＋或Ｔｂ＾３＋的蛋白复合物的α－ｈｅｌｉｘ的含量较晶体和溶液中为低，而β－ｓｈｅｅｔ和ｔｕｒｎ结构的含量相对较高。研究发现不同比例金属离子的加入，引起了ＣａＭ二级结构不同程度的变化，但各类结构在总量上观察     

转CaM基因工程菌的培养及重组钙调素的提纯

研究了转植物ＣａＭ基因的大肠杆菌的培养以及从该工程菌中分离纯化ＣａＭ的方法,观察到在含氨苄青霉素及氯菌素的ＬＢ液体培养其中,     

两株好氧氨氧化菌(AOB)的分离纯化及菌属鉴定

在生物脱氮过程中,好氧氨氧化细菌( AOB)发挥重要作用.本研究通过梯度稀释培养、平板划线分离进行AOB分离纯化,获得两株氨氧化能力较强的AOB菌株A2和A7,它们能将培养液中的大部分氨氮氧化.对A2和A7菌株进行革兰氏染色,并通过光学显微镜及扫描电镜观察细胞形态,发现A2和A7均为革兰氏阴性菌,细胞呈杆状,长为1~1.5μm,宽约0.5μm.生理生化实验表明,A2和A7属于自养微生物,不能利用有机碳源.系统发育分析表明,A2和A7均为亚硝化单胞菌( Nitrosomonas).