基于Cytb和COⅠ基因序列的蟒蛇分子鉴定

基于线粒体细胞色素b(Cyt b)和细胞色素c氧化酶亚单元Ⅰ(COⅠ)片段,分析比较了蟒蛇(Python molurus)不同地理种群间的序列差异.通过PCR扩增和序列测定,得到蟒蛇线粒体2个基因片段的总长度分别为1 200 bp(Cyt b)和1 100 bp(COⅠ),其两个基因序列中碱基G含量明显低于其他3种碱基,基因片段的A+T含量都较高.用MEGA4.0软件中的NJ法和UPGMA构建系统树.以红尾筒蛇(Cylindrophis ruffus)作为外群,对福州动物园的5个蟒蛇样品和NCBI上检索的样品进行遗传距离的测算,从遗传距离上来看:有两个群体间的遗传距离很近,一个是Fuzhou1、Fuzhou4和金门蟒蛇种群;另一个是Fuzhou2、Fuzhou3、Fuzhou5、缅甸蟒蛇种群和越南蟒蛇种群;印度蟒蛇种群Python molurus molurus(HM581978)与上述两个群体间遗传距离次之,外群与其他样品距离最远.对5个蟒蛇样品和NCBI上检索的样品物种构建的系统树显示:Cyt b与COⅠ基因所构建的进化树基本一致,Fuzhou2、Fuzhou3、Fuzhou5与缅甸蟒蛇、越南蟒蛇为一支,为东南亚种群,与福建种群Fuzhou4、Fuzhou1、金门蟒蛇种群形成姐妹支,然后与印度种群Python molurus molurus(HM581978)聚到一起,构成大支.实验结果表明福州动物园的蟒蛇是福建本地种群和东南亚种群混养的.     

广西部分棘蛙类物种的分子系统学研究

以广西棘蛙类为研究对象,应用PCR方法扩增线粒体168 rRNA基因和Cytb基因的DNA片段,进行DNA序列测定。以虎纹蛙和弹琴水蛙为外群,用邻接法（NJ）和最大简约法（MP）构建3种棘蛙的系统发育关系。结果表明：所研究的棘蛙类可分为棘胸蛙居群、棘腹蛙居群和棘侧蛙居群3支,与形态分类结果相同。     

华南湍蛙的两性异形

2014年7月,在浙江开化古田山国家级自然保护区,用数显游标卡尺测量了161只华南湍蛙(Amolops ricketti)个体的头体长等12项形态指标,分析了华南湍蛙的个体大小和两性异形.结果表明,除眼间距外,其余的11个形态特征均与物种的头体长呈显著的相关关系.进一步的分析显示:华南湍蛙雌性成体的头体长、头长、头宽、吻长、眼间距和前臂及手长等形态特征均显著大于雄性成体;雌性成体头宽的生长速率明显快于雄性个体;雄性成体的眼间距与亚成体存在显著差异;而雌性成体则在眼间距和胫长2个形态特征上显著大于亚成体.     

中国蛙科一新属——肛刺蛙属(蛙科:叉舌蛙亚科)

形态比较和分子系统学分析结果表明叶氏隆肛蛙Feirana yei具有较多独特性.其雄性个体肛部隆起,肛孔下方有两个布满黑刺的大的白色球形隆起、具单咽下内声囊、第一指具婚刺等外形特征可区别于隆肛蛙属已知的另2种和蛙科叉舌蛙亚科中的其他各属;在棘蛙族系统发育关系树上独立为一支,位于Quasipaa支系的基部,与该属其他种明显分开,构成姐妹群关系.这些特性表明叶氏隆肛蛙不宜划入隆肛蛙属或Quasipaa,适宜另立一新属,即肛刺蛙属Yerana gen.nov.     

浙江省古田山自然保护区3种无尾两栖动物肥满度的比较

为了解古田山自然保护区两栖动物的营养状况和健康状况,于2014年7—8月,在保护区内分别采集了华南湍蛙287只、淡肩角蟾53只和花臭蛙111只,采用非伤害性的形态学方法比较研究了其肥满度.结果显示:不同性别和不同年龄组的3种无尾两栖类的肥满度均存在显著性差异,雌性个体肥满度均优于雄性个体,而成体的肥满度则优于亚成体;此外,3个不同物种间的肥满度也表现出显著性差异,雄性的华南湍蛙和雌性的花臭蛙肥满度最佳,而淡肩角蟾肥满度最差.     

北美五倍子蚜mtDNA COI基因序列遗传分化

通过测定北美五倍子蚜(Melaphis rhois)3个种群共32个个体的mtDNACOI基因部分序列,分析北美倍蚜种群的遗传结构和变异。在测得的683bp COI基因序列中有75个变异位点(占所测核苷酸序列的11.0%),4种核苷酸T、C、A、G的组成分别为40.2%、15.0%、32.5%和12.3%,具有较高的A+T含量72.7%。M.rhois 32个个体的COI基因序列共产生10个单倍型,其中两个单倍型为主体单倍型,除阿肯色的一个个体与新泽西的6个个体共享一个单倍型外,其余单倍型单独或由同一种群的个体共享。AMOVA分析显示,五倍子蚜种群内核苷酸多样度低,种群间的遗传变异较高,分化显著。TCS网络图和聚类关系显示,五倍子蚜不同单倍型按地理分布形成明显的簇群,其中俄亥俄种群的单倍型单独构成一个分支,与其余两个种群关系较远;俄亥俄种群与其他两种群间的遗传距离也比较大,该种群可能属于五倍子蚜的一个亚种或新种。     

五个昆明小鼠封闭群遗传生化位点比较研究

目的为了进行昆明小鼠标准化研究,探讨了不同种群遗传生化位点的差异.方法随机选取北京生物制品研究所、长春生物制品研究所、华北药厂、中国医学科学院实验动物研究所和中国药品生物制品检定所昆明小鼠各40只(雌雄各半),测定Es3等十三个生化位点的基因型分布.结果各群在AKP1、Es1和Trf位点均为一个表现型,即b型;北京生物制品研究所、长春生物制品研究所和华北药厂的Ce2为单一的a型;Es3位点除北京生物制品研究所和长春生物制品研究所外,均无a型、ac和ab型;中国医学科学院实验动物研究所种群还在Hbb(s)和Idh1(a)位点只有一种表现型.各封闭群的基因频率在多数位点上处于平衡状态,遗传距离计算的结果表明,基因分布与种群的来源有密切关系.结论不同昆明小鼠种群之间存在差异,需要进一步标准化.     

施氏屋顶鼠和海南屋顶鼠的线粒体12S rRNA基因序列的歧异及其系统进化关系

屋顶鼠的两个亚种--施氏屋顶鼠和海南屋顶鼠的外形和毛色相似,在一些标本的测量记录中,它们间的主要区别特征之一的尾长与体长比却是不肯定的.在广东,海南屋顶鼠仅分布于粤西区,而施氏屋顶鼠则分布于其余区域.在我们的这项研究中,采用了9个分别来自于施氏屋顶鼠(龙门种群和香港种群)及海南屋顶鼠的样品进行了线粒体12S rRNA 基因的测序,在所分析的 385个核苷酸位点长度的片段中,包含有26个变异位点和14个简约信息点,观察到3个插入/缺失位点.通过邻接法和最大简约法重建这些鼠类样品的系统进化关系.相比于施氏屋顶鼠的香港种群,海南屋顶鼠与施氏屋顶鼠的龙门种群有着更紧密的亲缘关系.基于12S rRNA 基因片段的序列数据,本项分析不赞同把海南屋顶鼠分类成为一个亚种的观点,认为海南屋顶鼠的形态变化是自然选择的结果,并由此导致当地适应和地理隔离.     

苜蓿盲蝽属(Adelphocoris)细胞色素B基因片段序列分析(半翅目:异翅亚目:盲蝽科)

用蛋白酶K消化法提取并正反链双向测序获得半翅目盲蝽科盲蝽亚科苜蓿盲蝽属（Adelphocoris）6个种以及苜蓿盲蝽Ad．lineaolatus的3个种群的线粒体DNA细胞色素b基因片段的序列,应用Mega计算该8个cytb432bp片段序列的碱基组成、核苷酸的种间变异率和所编码的144个氨基酸的变异率,序列的碱基组成中A＋T的平均含量较高且在第三位点最高。平均达到81．6％,表明该基因在密码子的使用上具有偏向性,变异位点和信号位点多发生在三联体密码子的第三位点,第二位点最为保守,不同异型序列间的转换＋颠换（ns＋nv）值最高的为100,最小的为0;转换／颠换（ns／nv）值最高为9．33,在Ad．fasciaticollis与Ad．sutualis之间,最低为0．88,在Ad．lineaolatus的宁夏和甘肃种群之间。几种颠换类型都能够在本属的异型序列之间看到,苜蓿盲蝽属的不同异型序列间的差别大小各异,差异最大的是苜蓿盲蝽Ad．lineaolatus的甘肃种群（Ad．lineaozatus2）与内蒙古种群（Ad．lineaolatus3）之间,具有100个碱基的差异,宁夏种群与甘肃种群之间的核苷酸变异率为7％,而二者与内蒙古种群的变异率分别为23％和28％,大于或等于与其他种类间的变异,所以该2个种群与内蒙古种群（典型的Ad．lineaolatus）已处在种化过程的末期,已经形成不同的新种,种间差异最小的是Ad．rufescens与Ad．luridus,变异率为0,应为同一个种,所以Ad．rufescens的分类地位有待于进一步研究证实。     

两栖动物——蛙

蛙的种类很多,世界上最小蛙是矮蛙,它生长在古巴岛上。最大蛙是1926年在喀麦隆发现的,身长有32厘米,当时人们把它叫做巨蛙。还有一些如北美的牛蛙也是一种极其巨大的蛙,它的身体长20厘米,体重600克。牛蛙的近亲是湖蛙,身长有17厘米,它给人类带来一定的损害,因为它吃鱼卵和小鱼。还有一些不常见的蛙,如雨蛙,夜晚在栖息灌木上,白天在树根附近,分布四川、江西、浙江、广东。浮蛙,别称(尖舌浮蛙),生活在池沼,常浮出水面,分布在我国福建、广东。湍蛙,别称华南湍蛙,生活于山区溪流湍急处,分布于我国福建、江西、浙江等地。虎纹蛙,生活于近山的旷野…     

柳树NAC基因的克隆与表达模式分析

【目的】研究柳树重要抗逆转录因子基因家族,为揭示柳树抗逆分子机制提供理论依据。【方法】以‘苏柳2345’的转录组测序数据为基础,克隆了柳树NAC家族,并分析其序列结构、组织表达特异性以及不同胁迫条件下的表达模式。【结果】克隆的两个柳树NAC转录因子基因分别命名为SlNAC1和SlNAC2。生物信息学分析表明:SlNAC1序列全长为1 126 bp,编码产物含343个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于细胞核;SlNAC2序列全长为1 139 bp,编码产物含291个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于叶绿体。两个基因均具有典型的NAM结构域及A、B、C、D、E 5个亚结构域,还包括共同的LPPG、YPNG 和DEE保守基序及NAC抑制结构域。系统进化树分析显示, SlNAC1基因与木薯亲缘关系最近,SlNAC2基因与茄子亲缘关系最近。定量PCR结果显示SlNAC1和SlNAC2均在叶片表达,根中没有表达,为叶片特异性转录因子。定量PCR结果显示SlNAC1基因在脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)处理24 h后显著上调,SlNAC2基因在聚乙二醇(PEG)、ABA和GA胁迫后显著上调。【结论】柳树SlNAC1基因在非生物胁迫下表达较为稳定,受ABA和GA胁迫诱导;SlNAC2受干旱、ABA和GA胁迫诱导,受影响明显高于SlNAC1,不受乙烯剂(ETH)胁迫影响。推测SlNAC1和SlNAC2参与GA、ABA信号传导,可能不参与ETH的信号途径。     

一种新型基因枪的研究

为研制一种适应各种场合 ,尤其是在野外操作的基因枪 ,满足将目的基因导入动植物细胞 ,使之稳定表达并遗传 ,实现培育或改良新的优良品种。以压缩弹簧为动力 ,运用撞击发射原理 ,对裹着基因的微粒进行加速 ,使之获得足够的动能 ,去射击靶细胞。弹簧预压力不同 ,微弹的动能随之不同 ,可适应不同细胞的要求。利用所设计的装置 ,在常压下将GUS基因导入番茄叶片细胞 ,经检测 ,得到表达 ;将质粒psv- luc2 0转入小鼠的皮肤、腹部肌肉和肝脏内 ,也得到表达。实验表明 ,该构思是可行的 ,实验装置可以在常压下操作 ,能在各种条件下使用     

Progress of gene targeting in mouse

Gene targeting is a powerful approach of studying the gene function in vivo. Specific genetic modifications, including simple gene disruption, point mutations, large chromosomal deletions and rearrangements, targeted incorporation of foreign genes, could be introduced into the mouse genome by gene targeting. Recent studies make it possible to do the gene targeting with temporal and spatial control.     

GCK2软件在p53基因克隆过程中的应用

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因,通过克隆p53基因对其表达调控进行研究。利用 分子生物学软件GCK2.0对整个克隆过程进行分析,制定克隆策略,通过测序鉴定结果,得到了含目的基因 p53cDNA全序列的pTRE-p53重组质粒,通过GCK2.0分析,减少了基因克隆的盲目性,提高了工作效率。     

四种原发恶性肿瘤中p16基因的缺失和突变研究

采用双重PCR、PCR－SSCP和序列分析方法,对31例非小细胞肺癌、15例食管癌、12例胃癌、9例乳腺癌共68例原发肿瘤组织标p16进行在肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌的缺失率分别为16％（5／31）、,20－％（3／15）,8％（1／13）,0（0／9）,2例突变：一例食管癌在第130位氨基酸密码由AGA变为ATA,编码的氨基酸由精氨酸变为异亮氨酸,一例肺癌第140位氨基酸的CGG处的C缺失,导致移码突变,p16基因在人类恶性肿瘤发生发展中起重要作用,是多肿瘤抑制基因。     

GCK2软件在p53基因克隆过程中的应用

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的押癌基因，通过克隆p53基因对其表达调控进行研究。利用分子生物学软件GCK2．0对整个克隆过程进行分析，制定克隆策略，通过测序鉴定结果，得到了舍目的基因p53cDNA全序列的pTRE—p53重组质粒。通过GCK2．0分析，减少了基因克隆的盲目性，提高了工作效率。     

Inheritance and expression of multiple disease and insect resistance genes in transgenic rice

2—3 anti-fungal disease genes are coinserted with hygromycin phosphotransferase in the same vector. Two insecticidal genes and PPT acetyl transferase genes are placed in another one. The vectors are co-delivered to rice embryonic cellus tissue at a molar ratio of 1︰1 using the particle gun method. 55 independent regenerated lines have been obtained through screening for hygromycin resistance. Of these, 70% transgenic plants harbor 6—7 foreign genes. The genes on the same vectors are always co-delivered to rice plant. Northern blot analysis has indicated that the multiple foreign genes give stable expression. In the 6 transgenic plants carrying 6—7 foreign genes, multiple foreign genes tend to integrate in 1 or 2 genetic loci. Progeny segregation is consistent with Mendel’s 3︰1 segregation law. 8 homozygous R₁ transgenic plants harboring 2—3 anti-fungal and 2 insecticidal genes are selected from large number of transgenic progeny screening for hygromycin and Basta resistance.     

抗菌肽的研究及其在植物基因工程中的应用

抗菌肽是一类新型的抗菌物质,在低等生物到高等动植物有广泛分布．抗菌肽及人工合成的抗菌肽基因在植物体中可以被表达并具有杀菌活性,能够应用于植物抗病工程方面,从而提高植物的抗病性．本文简要介绍了抗菌肽的发现、分类、结构、作用机理、基因结构和基因改造,以及抗菌肽在植物基因工程中的应用．