按大肠杆菌高表达序列设计的入干扰素α—2b基因的化学合成和克隆

根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人干扰素α—2b基因编码区的核苷酸序列，应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段，经互补片段分别退火和连接后，将完整编码区分两段分别克隆于pUC19质粒中，进行DNA序列分析，分别选取序列完全正确的两种克隆片段进行重组，获得了与设计序列完全一致的含有完整编码区的人干扰素α—2b基因。     

改造人干扰素α2b基因在大肠杆菌中获得高效表达的理论方法

按照Ｅ．ｃｏｌｉ甚高表达基因中同义密码子使用,密码子内和密码之间碱基关联的ＥＥＮＳ模式,对人干扰素α２ｂ基因编码区中的同义密码子进行置换,理论上使得人干扰素α２ｂ基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达水平有非常显的提高,在理论上,未改造的人干扰素α２ｂ基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达水平为ＣＡＩ＝０．３２３,ＣＤＩ＝０．５７４,ＣＥＩ＝０．６２９,是较低表达水平的基因,估计实际表达水平在１０～１０＾３ｍｏｌ／ｃｅ     

重组人干扰素α-2b工程菌培养条件的优化研究

对重组人干扰素α-2b工程菌的培养条件、诱导条件进行研究.提高菌体目标蛋白表达量.通过实验条件的优化确定了适合重组人干扰素α-2b表达的诱导温度、诱导时间和诱导收获时间等.改进工艺后,目的蛋白的表达量大大提高,为进一步的下游工艺的开发奠定了基础.     

人TRAIL基因胞外段的化学合成和克隆

根据大肠杆菌高表达序列重新设计了人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)胞外段的基因编码区的核苷酸序列, 应用化学合成的方法合成了多个互补DNA片段,经互补片段分别退火和连接后, 将完整编码区克隆于pMD18-T质粒中,进行DNA 序列分析,获得了与设计序列完全一致的含有完整编码区的人TRAIL胞外段基因,并成功构建了高效的TRAIL胞膜外段原核表达载体pTWIN1/TRAIL111-281.     

重组人干扰素α-2b水针、粉针的稳定性及与干扰素标准品的比较研究

研究重组人干扰素α-2b(商品名:安福隆)的稳定性.采用细胞病变法(CPE)检测在4℃贮存条件下放置不同时段的干扰素α-2b水针、粉针和干扰素标准品的抗病毒能力,与标准品比较,评价了水针和粉针的稳定性.结果显示,在4℃的贮存条件下,干扰素α-2b水针和粉针的抗病毒能力基本相同;经两年贮存后,也没有明显地变化,且均比标准品抗病毒能力强.说明干扰素α-2b水针和粉针稳定性均较好,其辅料配方合理,可有效保护干扰素α-2b,减少其降解.     

重组大肠杆菌BL21(pBAI)生产人干扰素α2b

通过培养重组大肠杆菌BL21(pBAI)表达人干扰素α2b(Human Interferon α2b,hIFNα2b).hIFNα2b表达由PL,启动子控制,通过升温至42℃诱导表达.本研究比较了分批培养和多种补料分批培养方式下hIFNα2b的生产,其中通过恒速流加葡萄糖,hIFNα2b的表达量达到6 540 mg/L,平均生产速率和比速率分别为546 mg/(L·h)和27 mg/(g·h).升温前1.5 h补充25 g酵母提取物,并以0.27 g/(g·h)的比速率供应葡萄糖,hIFNα2b的平均生产速率达到1 006 mg/(L·h),比生产速率为54 mg/(g·h),对有机氮源的得率提高到138 mg/g.     

α2b干扰素基因与Ag85B基因在毕赤氏酵母中的融合表达

Ag85是结核分枝杆菌的一种分枝菌酸转移酶复合体,在结核分枝杆菌的细胞壁合成过程中起着重要作用Ag85B是该复合体的一个组分,具有较好的免疫原性通过连接多肽（G4S）4的编码序列,将α2b干扰素基因与Ag85B基因连成融合基因,然后克隆到毕赤氏酵母表达载体pPIC9上,转化Pichia pastoris SMD1168后获得重组酵母工程菌SMD1168／pPIC9-α2bAg85B,经甲醇诱导培养,发酵上清液经抗病毒活性测定,Western blot鉴定以及初步纯化,结果表明,分泌表达的融合蛋白具有一定的抗病毒活性．     

重组人干扰素α-2b-卡介苗（hIFN—α-2b—BCG）药物敏感性分析

通过BACTECMGITTM960全自动分枝杆菌培养鉴定／药敏仪对重组人干扰素α-2b卡介苗hIFN-α-2b-BCG）菌株进行利福平等10种抗菌药物的敏感性试验,以野生BCG作对照观察药物对重组BCG菌株活性的潜在影响．结果发现：重组人干扰素α-2b-卡介苗在系统感染上对喹酮类的氧氟沙星、环丙沙星敏感,对氨基糖苷类药物的庆大霉素和卡那霉素耐药．在抗结核类药物中,除对吡嗪酰胺耐药外,外利福平等其他几种抗生素均敏感．因尿液回收率高,几乎所有的抗茵药物都对膀胱中的菌株有影响．     

重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂疗效观察

目的：评价重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂的疗效及安全性。方法：采用多中心、随机、双盲、基质平行对照试验，按病例接纳顺序随机表分治疗组120例、对照组90例，观察时间为6周。结果：重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂痊愈率50．0％，总有效率98．3％，与对照组比较，有显著性差异（P〈O．05）。结论：重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂有较好的临床疗效，使用方便安全。     

重组人干扰素α-2b联合盐酸伐昔洛韦片治疗老年人带状疱疹临床疗效观察

目的观察比较重组人干扰素α-2b联合盐酸伐昔洛韦片与单用盐酸伐昔洛韦片治疗老年带状疱疹患者效果。方法将2010-2014年收治的66例带状疱疹患者随机分为观察组和对照组;观察组32例,对照组34例。观察比较两组患者接受治疗前后临床指标、治疗过程中副反应、临床疗效及带状疱疹后遗神经痛发生率等情况。结果 1观察组疗效明显优于对照组(P<0.05)。2治疗后,观察组疼痛评分低于对照组(P<0.05)。3治疗后,两组患者的后遗神经痛发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组人干扰素α-2b联合盐酸伐昔洛韦片治疗老年带状疱疹疗效优于单用盐酸伐昔洛韦片,且未增多药物副反应。但对减少带状疱疹后遗神经痛方面未发现明显效果。     

比色法测定聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量

建立比色法测定聚乙二醇化干扰素α2b(PEG-IFNα2b)注射液中吐温80含量,并评估聚乙二醇(PEG,分子量:20KD)对该测定方法的影响。     

脉冲电离子联合α-2b干扰素预防尖锐湿疣复发疗效探讨

为探讨脉冲电离子联合α-2b干扰素预防尖锐湿疣复发的疗效和作用机制，采用随机对比法，两组均电灼去掉疣体后，治疗组病损处注射α-2b干扰素，对照组全身肌注α-2b干扰素，比较4个月后复发率分别为8．9％和28．9％．提示电灼联合α-2b干扰素局部给药是降低尖锐湿疣复发率新的有效途径．     

重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂疗效观察

目的评价重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂的疗效及安全性。方法采用多中心、随机、双盲、基质平行对照试验,按病例接纳顺序随机表分治疗组120例、对照组90例,观察时间为6周。结果重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂痊愈率50.0%,总有效率98.3%,与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂有较好的临床疗效,使用方便安全。     

重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂疗效观察

目的 评价重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂的疗效及安全性.方法 采用多中心、随机、双盲、基质平行对照试验,按病例接纳顺序随机表分治疗组120例、对照组90例,观察时间为6周.结果 重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂痊愈率50.0%,总有效率98.3%,与对照组比较,有显著性差异(P＜0.05).结论 重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂有较好的临床疗效,使用方便安全.     

人α－干扰素基因在小菜蛾细胞中的表达及其影响因素探讨

将含有人α－干扰素（ＩＦＮα）基因的杆状病毒转移载体（ｐＡｃ３７３－ＩＦＮα）与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－Ｐｘ２－ＨＮＵ３,Ｐｘ）,空斑纯化后,利用细胞致病效应（ＣＰＥ）抑制法检测得到了干扰素效价（６８７２．６ＩＵ）,证明得到了可以在Ｐｘ细胞中表达ＩＦＮα的重组病毒（Ａｃ－ＩＦＮα）．并探讨了培养温度和血清浓度对ＩＦＮα表达水平的影响,结果表明：在２８℃时,培养基中补加２％的小牛血清,可获得最高的ＩＦＮα效价（１７４３５．９ＩＵ）．     

重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白的分离纯化

考察了大肠杆菌E.coli表达的重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白包涵体的变性、复性及融合蛋白的分离纯化过程。实验结果表明：包涵体经7mol/L盐酸胍,10mmol/L DTT变性;1mol/L尿素,2mmol/L还原型谷胱甘肽,0.2mmol/L氧化型谷胱甘肽脉冲加样稀释复性;金属螯合层析收集0.3mol/L咪唑洗脱峰,冷干后经重组肠激酶30℃酶切24h、Sephadex G50 柱纯化,可得到纯度达90%的重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白,且最终目的融合蛋白产量达68mg/g干菌体。     

rhIFNα2b与EDQM rhIFNα2b化学参比物质结构对比研究

通过高分辨率分子量、圆二色谱、氨基酸组成、质量肽图、N-末端序列、反相纯度研究,进行重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)与欧洲药品质量管理局(EDQM)rhIFNα2b化学参比物质(欧洲对照品)结构对比。     

干扰素α-2b与5-氯代尿嘧啶相互作用的荧光光谱

通过加入５－氯代尿嘧啶后干扰素α－２ｂ荧光发射谱和发射光谱的变化,说明干扰素α－２ｂ与５－氯代尿嘧啶存在分子间结合作用,这种作用对酪氨酸空间位形的影响,改变了干扰素分子内酪氨酸向色氨酸的能量转移     

3%氯化钠联合重组人干扰素α-1b高频雾化吸入治疗毛细支气管炎的临床观察

研究3%氯化钠联合重组人干扰素α-1b高频雾化吸入治疗毛细支气管炎的临床效果。选择靖远煤业集团有限责任公司总医院儿科收治的毛细支气管炎患儿82例,按照床位单双号分为两组,其中观察组38例,常规组44例,常规组给予基础治疗,观察组在此基础上给予3%高渗盐水2ml+重组人干扰素α-1b,高频雾化吸入治疗,观察两组患儿临床症状及体征,记录喘憋消失的时间、气促消失的时间、咳嗽消失时间、肺部哮鸣音消失的时间及住院时间。观察组的患儿治疗后临床表现缓解时间(喘憋消失、气促消失、咳嗽消失及肺部哮鸣音消失)均明显短于常规组,差异具有统计学意义(P0.05)。3%氯化钠联合重组人干扰素α-1b高频雾化吸入治疗毛细支气管炎,能够较快缓解患儿喘憋时间,减轻临床症状及体征,提高患儿的治疗效果。     

Pichia pastoris发酵表达重组人复合α干扰素

在Pichia pastoris表达系统中,研究了甘油补料周期、甲醇流加策略和诱导pH对cIFN表达的影响,优化后的发酵条件是:甘油补料周期为4 h,诱导pH为5.0,基于在线甲醇检测维持甲醇浓度不超过5 g/L。培养96 h后,最大细胞干重、cIFN的表达量和生物活性分别达到168 g/L、1.24 g/L和5.4×107U/mL。