应用聚合酶链式反应检测犬细小病毒

将具有犬细小病毒病典型症状的病犬肠溶物经ＳＤＳ－酚裂解法提取总ＤＮＡ,并以此ＤＮＡ为模板,通过人工合成的两条２０ｍｅｒ引物进行ＰＣＲ扩增,该对引物扩增的片段为犬细小病毒结构蛋白ＶＰ２基因中间１／３区段,ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳,试验结果表明：用ＰＣＲ扩增检测犬细小病毒具有良好的特异性,应用该方法检测的２７份病犬肠溶物样品块获得了预计长度的ＤＮＡ片段（５３１ｂｐ）,而健康犬的肠溶物样品ＰＣＲ结果为     

瓢虫干标本基因组DNA的提取及RAPD分析

实验对保存多年的瓢虫干标本进行了基因组 ＤＮＡ提取和 ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增。结果显示 ＤＮＡ分子的提取与保存年代长短无直接关系;ＲＡＰＤ－ＰＣＲ增产物经琼脂糖凝胶电泳检测,分子量大小约为 １９８４ｂｐ～６３０ｂｐ;不同种瓢虫的 ＤＮＡ用同一引物,扩增片段是多态表现,同一种瓢虫的干标本保存时间虽不同,但扩增产物中均具有相同的ＤＮＡ片段。     

胜加端PCR技术改造hIGF—1cDNA

用ＤＮＡ合成仪合成了分别带有ＰｓＩ位点和ＳａｉＩ位点及张终止密码子的２个用于扩增ｈＩＤＧＦ１ｃＤＮＡ的ＰＣＲ引物，利用合成的引物，７００ｂｐ长的ｈＩＧＦ－Ｄ１ｃＤＮＡ模板和Ｔａｑ聚合酶进行ＰＣＲ扩增。     

用加端PCR技术改造h－IGF－1cDNA

用ＤＮＡ合成仪合成了分别带有ＰｓｔＩ位点和ＳａｌＩ位点及终止密码子的２个用于扩增ｈＩＧＦ－１ｃＤＮＡ的ＰＣＲ引物．利用合成的引物，７００ｂｐ长的ｈＩＧＦ－１ｃＤＮＡ模板和Ｔａｑ聚合酶进行ＰＣＲ扩增．扩增产物经电泳鉴定后克隆进Ｍ１３ｍｐ１８载体，进行核苷酸序列分析．结果显示：ＰＣＲ产物含已发表的ｈＩＧＦ－１成熟蛋白的编码序列和５＇端的ＰＳｔＩ位点及３＇端的ＳａｉＩ位点及终止密码ＴＡＧ．用加端ＰＣＲ技术成功地扩增和改造了ｈＩＧＦ－１的编码序列．     

绵羊β—乳球蛋白基因调空序的分离,克隆及序列分析

根据绵羊β－乳球蛋白基因调控区ＤＮＡ序列设计了两个引物，以绵羊基因组ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ技术扩增，得约９００ｂｐ的ＤＮＡ片段插入到ｐＵＣ１８质粒的ＸｂａＩ／ＫｐｎＩ位点之间。     

运用PCR技术检测育龄妇女宫颈分泌物中沙眼衣原体感染

运用ＰＣＲ技术检测育龄妇女宫颈分泌物中的沙眼衣原体。方法：根据国外报道的ＣＴ基因序列，利用计算机辅助设计选出一对寡核苷酸引物，扩增片段为５１０ｂｐ。结果：运用经改进完善后的ＰＣＲ技术检测育龄妇女宫颈分泌物中ＣＴ的阳性率为１４．８％，扩增的灵敏度为０．１ｆｇ／μｌ，划性为１００％。结论：ＰＣＲ技术检测ＣＴ感染快、简便、特异性强、灵敏度高。     

用PCR法检测人巨细胞病毒DNA

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法检测患者尿液中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ．结果表明，自行设计合成的引物位于ＨＣＭＶ基因组早期蛋白基因区，经ＰＣＲ仪扩增一段长４３０ｂｐ的特异序列片段，对正常人基因组ＤＮＡ或其它疱疹病毒ＤＮＡ无交叉反应．此法可检测出少至１０－１６ｇ（０．１ｆｇ）的病毒ＤＮＡ．通过对３５份尿液标本的检测，比较ＰＣＲ法和组织培养法的检测结果完全一致     

中国河南西峡恐龙蛋化石中18SrDNA部分片段的克隆及序列…

本文从河南省西峡晚白垩世的一枚保存方式特殊的恐龙蛋化石中提取ＤＮＡ，经过＾３２Ｐ同位素标记和电泳分析，发现在蛋内腔的絮状物样品中确在ＤＮＡ片段存在。它们的大小约在１０００ｂｐ至几十ｂｐ之间，大多数片段在４００ｂｐ以下。用１８ＳｒＤＮＡ特异引物，以上述ＤＮＡ为模板进行了ＰＣＲ扩增，经电泳分析得到约２００ｂｐ的ＰＣＲ产物。经过连接、转化到大肠杆菌，最终筛选出６个阳性克隆。测序分析和同源性比较发现这６个     

单引物PCR扩增DNA指纹图谱的稳定性研究

以人胶原蛋白基因下游一段ＤＮＡ的互补序列设计引物，对人染色体ＤＮＡ进行单引物ＰＣＲ扩增，在低温退火的条件下，这种引物与ＤＮＡ模板的一处完全配对，并且可以随机地结合在其他一些位置上。由此进行单引物ＰＣＲ扩增，它们的扩增产物形成了稳定的引物－模板特异的ＤＮＡ指纹图谱。本文所建立的单引物ＰＣＲ扩增技术在类似的研究中均可获得稳定的实验结果，具有一定的应用价值。     

猪兰尼定受体基因的PCR—RFLPS检测

从血样中提取２０种头猪的基因组ＤＮＡ，利用合成的特异性引物，进行ＰＣＲ扩增，得到了含兰尼定受体基因第１８４３碱基的６５９ｂｐＤＮＡ片段，利用ＨｈａⅠ酶切和电泳检测了兰尼定受体基因的变异，结果表明，在２０头猪中，基因型Ｎｎ的杂合子猪４头，占２０％基因型为ＮＮ的兰尼定受体基因正常猪１６头，占８０％，未检测到兰尼定受体基因突变纯合子，作者的研究证实利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰＳ技术检测兰尼定受体基因型具有快速，     

几种番茄品种基因组DNA的相似指数初步分析

用４种随机引物（１０ｂｐ）,对普通番茄５个品种的基因组ＤＮＡ进行了ＰＣＲ扩增,并对其ＲＡＰＤ带谱进行了统计处理,发现不同随机引物扩增出来的ＲＡＰＤ标记所表现的相似指数有所不同,综合考虑,普通番茄种内不同品种同ＤＮＡ多态性保持了较高的稳定性。     

三种不同方法检测鸡马立克氏病毒的效果比较

研究比较了核酸斑点杂交技术、多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增和病毒分离技术在检测ＭＤＶ中的效果和相关性，试验结果表明：以ＰＣＲ扩增Ｉ型ＭＤＶ１３２ｂｐ重复序列或以此序列标记的Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ探针进行Ｄｏｔ－ＤＮＡ分子杂交检测ＭＤＶ，均具有较好的效果，灵敏度比常规病毒分离高近万倍，其特异性较强，并能快速鉴别ＭＤＶⅠ型毒，使诊断时间缩短了许多。     

盐藻磷酸甘油脱氢酶基因cDNA文库的构建

采用Ｌａｍｂｄａ ｇｔ１０载体构建了盐藻ｃＤＮＡ文库，文库大小为１０＾６／ｍＬ插入片段平均长度大于１ｋｂ。根据果蝇，兔，鼠编码其３－磷酸甘油脱氢酶基因的辅酶ＮＡＤ的结合功能区保守序列设计一对引物，大小分别为２１ｂｐ和１８ｂｐ。ＰＣＲ扩增得到与果蝇相同的２９０ｂｐ特异扩增片段，以该片段为探针，采用缺口平移系统标记原位杂交，从盐藻ｃＤＮＡ文库中获得３６个３－磷酸甘油脱氢酶基因的阳性克隆。     

HSV1-tk基因的部分DNA序列分析

采用ＰＣＲ技术从商品质粒ｐＨＳＶ１０６扩增出ＨＳＶ１－ｔｋ基因（１１２８ｂｐ）,ＰＣＲ产物用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后定向克隆至真核表达载体ｐｃＤＮＡ３,然后以重组质粒ｐｃＴＫ为模板ｔｋ基因的５端引物为ＤＮＡ测序引物进行部分ＤＮＡ序列分析,部分ＤＮＡ序列分析证明ＰＣＲ产物为ＨＳＶ１－ｔｋ基因正确无误,成功筛选到ＨＳＶ１－ｔｋ基因的真核表达载体ｐｃＴＫ,并为利用ｔｋ基因在实验动物体内进行自杀性基     

利用WSBV的引物扩增对虾的杆状病毒DNA

利用台湾报道的ＷＳＢＶ的ＰＣＲ引物，成功地扩增出了１４００ｂｐ左右的中国对虾的杆状病毒的ＤＮＡ片段，与预计的产物长度吻合，该引物对经初步离心处理的病虾组织出能扩增出特异性ＤＮＡ条带，而在对正常虾组织ＤＮＡ、昆虫杆状病毒ＤＮＡ进行了扩增，均获得阴性结果，说明该引物的特异性较高，对中国对虾的杆状病毒的检测具有一定的实际应用价值。实验结果同时说明ＷＳＢＶ与中国对虾的杆状有同源序列存在，具有一定的保守性，     

中国河南西峡恐龙蛋化石中18SrDNA部分片段的克隆及序列分析

本文从河南省西峡晚白垩世的一枚保存方式特殊的恐龙蛋化石中提取ＤＮＡ，经过￣３２Ｐ同位素标记和电泳分析，发现在蛋内腔的絮状物样品中确有ＤＮＡ片段存在。它们的大小约在１０００ｂｐ至几十ｂｐ之间，大多数片段在４００ｂｐ以下。用１８ＳｒＤＮＡ特异引物，以上述ＤＮＡ为模板进行了ＰＣＲ扩增，经电泳分析得到约２００ｂｐ的ＰＣＲ产物。经过连接、转化到大肠杆菌，最终筛选出６个阳性克隆。测序分析和同源性比较发现这６个克隆的序列与两栖类、爬行类、鸟类及人类等的１８ＳｒＤＮＡ具有很高的同源性，但是与原核生物没有发现同源性，而且没有检索出与该基因完全相同的已知序列。     

马立克氏病病毒疫苗CV1988株囊膜糖蛋白gI基因的序列分析

根据马立克氏病病毒（ＭＤＶ）国际标准株ＧＡ株的基因序列设计合成了可扩增ｇＩ基因（１０６０ｂｐ）的引物，用ＰＣＲ技术，以ＣＶ１９８８基因组为模板，扩增得到了预期大小的ＰＣＲ产物，将此ＰＣＲ产物和ｐＵＣ１８经同样的限制性内切酶ＫｐｎＩ和ＢａｍＨＩ处理后，连接、转化、鉴定，得到了含有ｇＩ基因的质粒。将此质粒进行序列分析，比较了它与其他强毒和超强毒株的同源性，用ＤＮＡａｓｔａｎ软件对其编码的氨基酸的疏水性     

利用RAPD技术检测精神病患者基因组DNA

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术检测了１６例精神分裂症,１６例情感性精神障碍患者的基因组ＤＮＡ。结果表明：引物ＯＰＡＹ１７在扩增基因组中,情感性精神障碍４条带（５１５．５,６０６．８,９４７．２和１８２７ｂｐ）,精神分裂症３条带（５１５．５,６０６．８和９４７．２ｂｐ）,而正常人仅扩增出１条４２６．７ｂｐ的条带,５１５．５ｂｐ的条带有可能是精神分裂症和情感性精神障碍的特异性标记,１８２７ｂｐ的条带有可能是情感性精神障碍的特异性标记。     

AP—PCR在肿瘤DNA多态性研究中的应用

首次将ＡＰ－ＰＣＲ应用于ＤＮＡ多态性研究。研究了ＡＰ－ＰＣＲ的反应程度，找到实现稳定扩增的适宜条件，并发现模板ＤＮＡ浓度的变化在相当范围内不会改变扩增图谱；对肿瘤瘤周组织以及正常组织进行分析，在１１个引物中发现２个引物的扩增结果是多态的。初步结论：多态现象与癌变相关。     

桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶原基因的初步研究

从桂北五步蛇毒腺中抽提蛇毒总ＲＮＡ,采用一步法（ＲＴ－ＰＣＲ和ＰＣＲ在同一试管内进行）扩增纤溶酶金属蛋白酶原基因,并进行电泳检测,可见３条特异的ＤＮＡ条带,分别约为１．５Ｋｂ、１．３Ｋｂ和８００ｂｐ,利用平端连接的方法将其中的８００ｂｐＰＣＲ产物克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体,挑选白色菌落,用酶切和ＰＣＲ法对其进行鉴定。