体外培养肿瘤细胞生长的微量量热法研究

应用２２７７热活性检测仪测定了ＭＫＮ－４５细胞和ＳＭＭＣ－７７２１细胞的热功率－时间曲线,通过观测化疗药物卡铂对曲的影响,进一步研究了该药物对癌细胞增殖的抑制作用,本实验所用的微量热测定的方法对于癌细胞生物学的研究有重要意义。     

AM1分析喹诺酮类药物的热降解机理

尝试了用量子化学AM1方法研究2种喹诺酮类药物的热降解机理。按照TG-DTG热重仪测定的依诺沙星、诺氟沙星分子热降解曲线，首次利用AM1方法分别计算了这些分子的优势构型和它们原子对作用能，尝试了采用从理论上推断药物的热分解过程的方法。由计算它们原子对作用能的结果分析实现了这2种药物的热分解既包含哌嗪环侧链热振动断裂的热力学过程又包含哌嗪环上羧基脱羧的动力学过程。     

微量量热法筛选促菌特效营养药的研究

用热活性检测仪测定了枸杞、黄芪、灵芝、鹿茸对金黄色葡萄球菌促进作用的热功率—时间曲线;计算了不同浓度营养药物作用下的生长速率常数;根据生长速率常数和浓度的数据,确定了营养药物的最佳浓度.     

微量量热法筛选促菌特效营养药的研究

用热活性检测仪测定了枸杞,黄芪,灵芝,鹿茸对金黄色葡萄球菌促进作用的热功率－时间曲线,计算了不同浓度营养药物作用下的生长速率常数;根据生长速率常数和浓度的数据,确定了营养药物的最佳浓度。     

细菌生长的热谱图测定和生长速率的研究

用微量热计测定了8种细菌在相同培养基下代谢完整的热谱曲线,并对几个温度下在指数生长期的热谱图进行了动力学处理,得出不同了温度下细菌生长的速率常数和激活能。这些数据为药物对细菌的抑制作用提供了科学依据。     

槲皮素镧配合物对S.Pombe细胞生长代谢热动力学的影响

采用八通道微量热法探讨槲皮素镧配合物对粟酒裂殖酵母细胞生长代谢热动力学的影响。测定在槲皮素镧配合物作用下S.Pombe细胞的生长代谢产热曲线,并研究其生长速率常数(k)、最大发热功率(pmax)、达最大发热功率时间(tmax)和抑制率(I)等热动力学参数。微量热结果表明:随着槲皮素镧配合物浓度c的增大,最大发热功率pmax和速率常数k减小;达最大发热功率时间tmax和抑制率I增大。研究表明槲皮素镧配合物对粟酒裂殖酵母细胞生长代谢产生了抑制作用。     

槲皮素镧配合物对S.Pombe细胞生长代谢热动力学的影响

采用八通道微量热法探讨槲皮素镧配合物对粟酒裂殖酵母细胞生长代谢热动力学的影响。测定在槲皮素镧配合物作用下S.Pombe细胞的生长代谢产热曲线,并研究其生长速率常数（k）、最大发热功率（pmax）、达最大发热功率时间（tmax）和抑制率（I）等热动力学参数。微量热结果表明：随着槲皮素镧配合物浓度 c 的增大,最大发热功率pmax和速率常数k减小;达最大发热功率时间tmax和抑制率I增大。研究表明槲皮素镧配合物对粟酒裂殖酵母细胞生长代谢产生了抑制作用。     

用差热分析法研究头孢菌素类药物的热稳定性

利用差热分析仪测定头孢菌素类药物在升温后发生分解反应时的热效应，得出差热曲线，求出药物的活化能，通过对几种头孢菌素类药物活化能的比较，判断头孢菌素类药物的热稳定性。     

P204Na在有机相形成反向胶束过程的热力学性质

利用 2 2 77热活性滴定微量量热仪研究在不同有机溶剂中反向胶束的形成过程 ,测定了热功率一时间曲线 ,获得了P2 0 4 Na在直链烷烃体系中的临界胶束浓度、聚集数 ,胶束生成常数和有关的热力学函数     

5A型分子筛吸附热的反相气相色谱研究

结合气相色谱分析方法的特征,应用反相气相色谱法,以N2、CO为探针分子,在不同温度下测定了新制备的分子筛5A-1、5A-2、5A-3、5A-4的保留时间,以保留时间的对数对温度倒数进行回归分析。结果得到线性关系良好的曲线,由此曲线计算得到这些分子筛对CO和N2的吸附热范围分别为26.60~30.12kJ,25.0~28.01kJ。本研究的结果表明,反相气相色谱法能测定出结构微小改变时的吸附热差别。     

芒果苷对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用及其机制研究

利用相差显微镜观察细胞形态变化情况;用MTT法测定芒果苷对A549细胞增殖作用的影响以及Western-Blot法检测芒果苷对Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白分子表达水平的影响.结果显示,与对照组相比,芒果苷对人肺腺癌A549细胞的抑制率与浓度和时间均呈正相关性.在有效浓度为3μM,作用最佳时间为48h时,A549细胞的镜下形态和结构发生显著的变化;并且导致Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性以及它们的剪切小体数量增加.表明芒果苷对人肺腺癌A549细胞具有抑制增殖的作用,并且通过caspase依赖性途径诱导A549细胞凋亡.     

人肿瘤细胞株中细小病毒H—1的DNA扩增与非结构蛋白NS—1基因的表达

研究三株人癌细胞和两株对照细胞对细小病毒Ｈ－１杀伤作用敏感性的分子机制．表明了在感染复数ｍｏｉ（ｍｕｌｔｉｐｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）为５ｐｆｕ（ｐｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）／细胞的情况下，作为Ｈ—１病毒复制受纳细胞的人肝癌细胞株ＯＧＹ－７７０３和人胃癌细胞株ＳＧＣ—７９０１，能够支持病毒ＤＮＡ扩增和非结构蛋白ＮＳ—１基因的表达，这和作为阳性对照的由ＳＶ４０转化的新生儿肾细胞株ＮＢ—Ｋ一样，但对Ｈ—１病毒感染有抗性的人肾癌细胞株ＯＵＲ—１０和它的对照人胎肾细胞株ＨｕＫ—１，并不支持病毒ＤＮＡ扩增和ＮＳ—１蛋白的表达．本文结果指出，细小病毒Ｈ—１的杀伤作用与细胞中的病毒ＤＮＡ扩增及ＮＳ—１基因表达的程度相关．     

Study on interleukin-18 gene transfer into human breast cancer cells to prevent tumorigenicity

To study the effect of interleukin-18 gene transfection on the tumorigenesis of breast cancer cell line Bacp37, human breast cancer cell line Bcap37 were transfected with Lipofectamine and selected by G418. The biological expression of rhIL-18 was tested by RT-PCR and ELISA method; nude mice were injected with Bcap37 cell with or without the hIL-18 gene. The hIL-18 cDNA was successfully integrated into Bcap37 cell; 126.3+/-4.5 pg hIL-18 secreted by one million transduced cells in 24 hours. Nude mice injected with IL-18 gene engineered Bcap37 cell had no tumor growth. These findings indicated that human breast cancer cells were successfully modified by the gene of IL-18 cytokine; the IL-18 gene engineered Bcap37 cells secreted hIL-18 and lost their tumorigenicity. The Bcap37 cells transduced with IL-18 gene may be used as breast cancer vaccine.     

眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人鼻咽癌CNE-2细胞株的影响

目的：了解眼镜蛇毒灌胃后的兔血清(serum of rabbit taking orally cobra venom，SRCV)对人鼻咽癌CNE-2细胞的影响。方法：采用体外细胞培养的方法，观察SRCV对人鼻咽癌CNE-2细胞及人胚肺成纤维细胞的细胞毒作用，及对细胞生长和分裂指数的影响。结果：发现SRCV能够明显抑制鼻咽癌CNE-2细胞的生长，且其抑制效应随剂量的增加而增加，但该血清对正常人胚肺成纤维细胞的生长却没有明显影响。结论：SRCV对鼻咽癌CNE-2细胞的生长有明显的抑制作用，并且有高度的选择性。     

氢化诺卜基3同烷基卤化铵的合成与结构分析

将以β-蒎烯为初始原料依次经Prins反应、催化氢化、卤代等合成反应得到的氢化诺卜基卤代物分别与三甲胺、三乙胺、三正丁胺反应,制得氢化诺卜基三甲基卤化铵、氢化诺卜基三乙基卤化铵和氢化诺卜基三正丁基卤化铵共8种含氢化诺卜基的季铵盐类化合物,并对它们的结构进行了质谱、核磁共振及红外光谱分析。其中的氢化诺卜基三乙基碘化铵及氢化诺卜基三正丁基溴化铵在体外抗肿瘤活性试验中表现出对人肺癌H460细胞、人胃癌MKN-45细胞、人肝癌SMMC-7721细胞、人乳腺癌MCF7细胞具有体外抗肿瘤活性。     

阿霉素诱导肝癌QGY-7701细胞凋亡的研究

观察阿霉素对人肝癌细胞株QGY-7701的凋亡诱导作用。实验用阿霉素处理QGY-7701细胞后,用台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性;光镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞凋亡形态;DNA琼脂糖凝胶电泳技术观察分析细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果显示,阿霉素处理QGY-7701细胞后,出现了明显的凋亡现象,而且随着药物浓度的增加,细胞凋亡的趋势越明显。分析结果可知,阿霉素作用QGY-7701细胞48 h的IC50值为4.9μg/mL。流式细胞仪检测出阿霉素处理QGY-7701细胞的凋亡率逐渐上升。综上所述,阿霉素可以诱导QGY-7701细胞出现凋亡的现象。     

细菌内毒素诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨细菌内毒素对人肝癌细胞株7721的影响程度.方法:用含有细菌内毒素1000 EU/mL、500EU/mL、100 EU/mL、50 EU/mL、0EU/mL的DMEM细胞培养液来培养7721细胞,通过细胞计数来绘制细胞生长曲线,台盼蓝排除法测定细胞活率、用DNA梯形条带法及TUNEL原位法检测细胞凋亡情况.结果:细菌内毒素对肝癌细胞7721生长有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.此种抑制是通过诱导细胞凋亡达到的,肿瘤坏死因子检测结果没有发现规律性.结论:内毒素在体外可以诱导肺腺癌细胞的凋亡,且存在明显的剂量关系,并且此凋亡不是依赖TNF-α途径发生的,为临床上诱导肿瘤细胞凋亡,从而为预防和治疗肿瘤提供了理论依据.     

高转移的人卵巢癌细胞遗传学研究

本文对自建的人卵巢癌细胞系（ＨＯ－８９１０）和用该细胞建成的高转移人卵巢癌裸鼠皮下移植癌模型（ＮＳＭＯ）进行了细胞遗传学的比较研究。结果提示：两株细胞均属超二倍体核型，众数为５４条。１、３、１５和２２号染色体常见缺失，１０、１６、１９和２２号染色体常见增加，部分核型中Ｘ染色体有１条缺失，同时发现由１、３、１３、１４和１５号染色体异常而形成的４个标记染色体。ＨＯ－８９１０核型不同的特征是除了４个出现频率较高的标记染色体外，还可见一些其他异常染色体，而ＮＳＭＯ核型中只出现与ＨＯ－８９１０同样的４个标记染色体，很少见有其他异常的染色体，这４个标记染色体可能是高转移卵巢癌独特的遗传特征，这对深入探讨卵巢癌病因和癌变机理有其重要意义。     

噬菌体显示抗乳腺癌单链抗体的基因克隆和筛选

克隆和连接乳腺癌杂交瘤单克隆抗体的轻、重链可变区基因，构建该单链抗体的噬菌体显示系统，经严格的相关肿瘤细胞株的固相细胞正负筛选和多步液相结合-洗脱细胞筛选，得到特异性高、亲和力强的单链抗体基因，用于进一步构建重组免疫毒素，为临床乳腺癌和生物靶向治疗奠定基础.     

表达肿瘤抗原HPV-58 E7的HLA-A*0201阳性宫颈癌细胞模型的构建和鉴定

为建立内源性表达58型人乳头瘤病毒(Huamn papillomavirus type 58,HPV-58)重要癌抗原E7蛋白的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型.以HPV-58全基因组为模板,采用PCR法扩增E7蛋白的编码基因,构建真核表达载体pEGFP-N2-HPV58E7;转化大肠杆菌DH5α,通过DNA测序鉴定质粒载体;经除内毒素纯化后,将大量制备的重组质粒瞬时转染293T细胞,采用RT-PCR和细胞免疫荧光方法研究重组质粒在人源细胞中的表达情况;最后,选择HPV检出阴性的HLA-A*0201阳性人宫颈癌C33A细胞株为宿主细胞,采用脂质体转染、G418抗性加压筛选和细胞克隆化培养技术,建立能够稳定表达HPV-58 E7的恒定转染细胞株.采用RT-PCR、Western-blot和细胞增殖测定等方法从转录、翻译和表型等3个层次对所建细胞株进行鉴定研究.研究结果显示:克隆制备了HPV-58 E7蛋白的编码基因;构建获得了能够在人源细胞中表达HPV58E7-EGFP融合蛋白的真核表达质粒;并成功建立了能够稳定表达HPV-58 E7的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型;核酸和蛋白水平的鉴定结果表明所建模型细胞能够表达HPV-58 E7癌抗原,宿主细胞本身表达的Ⅰ类组织相容性抗原HLA-A*0201有望通过内源性抗原加工途径将E7抗原的细胞毒性T细胞(Cytotoxic lyphocyte,CTL)表位提呈到细胞表面;另外,细胞增殖试验结果亦表明该细胞模型体现出E7蛋白显著的诱导细胞增殖的生物学特征.总之,能够稳定表达HPV-58 E7癌蛋白的HLA-A*0201阳性人宫颈癌细胞模型的建立为后续即将展开的以HPV-58 E7为靶标的宫颈癌治疗性疫苗和药物的寻找和研究奠定基础.