Ⅱ型胶原诱导的关节炎大鼠滑膜成纤维细胞的培养、纯化和鉴定

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)病人滑膜成纤维细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)是研究RA发病机制和进行RA药物筛选的最理想的细胞来源.但是对于众多非医疗机构的高校和科研院所而言,由于RA病人滑膜组织不易获取而难以进行细胞水平的操作.因此,建立胶原诱导的关节炎大鼠(Collagen-induced arthritis,CIA)模型,成功分离膝关节滑膜组织并进行滑膜成纤维细胞的原代培养和纯化,将有效解决RA FLS的来源问题,为后续实验奠定基础.本实验通过皮内和皮下两次注射鸡Ⅱ型胶原诱导Wistar大鼠罹患关节炎,通过关节炎指数评分和膝关节HE染色明确CIA模型的建立;分离膝关节滑膜组织,采用Ⅱ型胶原酶和无EDTA胰酶消化法分离细胞并进行传代培养,传至第三代时,细胞免疫荧光检测细胞中VCAM-1蛋白含量以鉴定细胞纯度.结果显示,滑膜组织经过消化和培养后得到大量大鼠滑膜成纤维细胞;在显微镜下观察所得细胞呈梭形树突状,具有成纤维样细胞特征;VCAM-1蛋白阳性细胞达98%以上,确证所分离细胞为滑膜成纤维样细胞,且纯度极高.本研究建立了较简便快捷地获得大量滑膜成纤维细胞的方法,为RA的发病机制研究和药物防治提供了丰富的实验材料.     

唾液乳杆菌在类风湿性关节炎疾病进展中的作用

目的 探讨唾液乳杆菌在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)发病中的作用及其机制.方法 选取32只SPF级雄性SD大鼠，将大鼠分为健康对照组、CIA模型组(胶原诱导型(collagen-induced arthritis, CIA)大鼠模型)、唾液乳杆菌干预组、甲氨蝶呤组，每组各8只；观察大鼠外观形态，行CIA评分、足跖容积测量及HE染色，应用宏基因检测乳杆菌种类及丰富度.结果 与模型组相比，唾液乳杆菌干预可明显改善RA大鼠组织病理状态，减低关节炎严重程度，改善关节肿胀；与模型组相比，唾液乳杆菌干预组和甲氨蝶呤组的相似度、丰富度(S)、均匀度(E)和Shannon-Wiener指数(H)均显著升高.结论 唾液乳杆菌对类风湿性关节炎可能有一定的治疗效果和预防作用，可为类风湿性关节炎的治疗提供新思路.     

复方黑骨藤抗类风湿关节炎作用及机制的研究

目的:研究复方黑骨藤对类风湿关节炎(RA)的治疗作用及其作用的分子机制.方法:将实验大鼠分组并建立佐剂性关节炎(AA)动物模型,观察复方黑骨藤低、中、高剂量对AA大鼠足肿胀、体重、器官指数及血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量水平的影响.结果:复方黑骨藤能有效抑制AA大鼠足肿胀,降低胸腺指数,下调AA大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量水平.结论:复方黑骨藤具有良好的抗RA作用,其作用机制可能与调节免疫器官功能及减少IL-1、IL-6、TNF-α的产生,从而达到抗炎消肿和阻止关节软骨破坏的作用有关.     

苗药石楠藤、黑骨藤不同萃取部位抗RA作用研究

为探究苗药石楠藤与黑骨藤不同萃取部位对完全弗氏佐剂(CFA)所致SD大鼠类风湿性关节炎模型的治疗效果,本实验将黑骨藤、石楠藤70%乙醇提取物分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取;构建SD大鼠RA模型,通过大鼠足肿胀程度,脾脏与胸腺指数,IL-1β、IL-6及TNF-α炎症因子含量等指标,评价两种苗药不同萃取部位对治疗RA的效果.结果表明,石楠藤与黑骨藤各萃取部位均能降低RA模型大鼠的足肿胀程度,改善大鼠滑膜增生现象,降低胸腺和脾脏指数,降低血清中IL-1β、IL-6及TNF-α含量;且两者治疗效果相当,均有较好的抗RA作用,其中黑骨藤以正丁醇萃取部位疗效最好,石楠藤以正丁醇萃取部位疗效最好.研究结果为石楠藤与黑骨藤治疗类风湿性关节炎疾病的研究奠定了理论和实验基础.     

人参皂苷Rb1通过抑制NF-κB信号通路减轻了大鼠佐剂性关节炎

本研究旨在探讨人参皂苷Rb1对佐剂性关节炎(AIA)大鼠的保护作用及机制.AIA大鼠腹腔注射给药Rb1,连续给药14 d,观察大鼠足肿胀、关节病理及血清炎症细胞因子水平.并通过体外实验检测Rb1对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α及IL-6水平的影响,进一步评估Rb1的抗炎作用.Western blot检测关节滑膜及RAW264.7细胞中NF-κB信号通路相关蛋白表达,阐明Rb1抗RA作用机制.结果显示,Rb1显著减轻AIA大鼠足肿胀和关节破坏,降低血清TNF-α、IL-1β及IL-6水平并抑制LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α及IL-6水平.Western blot显示Rb1下调关节滑膜p-IκBα及p-p65的表达,上调RAW264.7细胞IκBα的表达.以上结果提示,Rb1对AIA大鼠具有保护作用,与抑制关节滑膜中NF-κB信号通路的激活有关.     

葛根素-钆抗痛风性关节炎活性与机理初探

以葛根素为配体,以金属钆为配位中心,通过控制反应条件,设计合成了葛根素-钆(Gd)配合物,并对葛根素-钆的结构进行红外(IR)表征.采用尿酸钠诱导的急性痛风性关节炎大鼠模型,利用敷线法考察造模后2～48 h大鼠踝关节肿胀率的变化,并对大鼠血清、肝脏及滑膜中PGE2、IL-1β、TNF-α的水平进行检测.结果表明,葛根素与稀土金属钆发生配位,得到葛根素-钆(Gd)配合物.葛根素-钆配合物对大鼠痛风性关节炎肿胀抑制作用比葛根素强,葛根素-钆配合物组大鼠血清、肝脏及滑膜中的PGE2、IL-1β和TNF-α水平均低于葛根素组.综上,说明葛根素-钆配合物抗痛风性关节炎活性优于其配体葛根素,其抗炎机制可能与降低体内PGE2、IL-1β和TNF-α的水平有关.     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白生物仿制药对大鼠类风湿性关节炎的治疗作用

目的:评价重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(TNFR-Fc)生物仿制药对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用.方法:将大鼠随机分成6组:阴性对照组(生理盐水)、阳性药物组(Enbrel)和TNFR-Fc高、中、低质量分数组,空白组(无炎症),每组6只,弗氏完全佐剂(CFA)建立类风湿性关节炎模型.给药13 d后,分别测量大鼠体重、后足足垫厚度,关节炎指数评分,ELISA法测量细胞因子水平.结果:与阴性对照组相比,Enbrel组和TNFR-Fc大、中、小质量分数组的大鼠体质量明显增加(P0.05)、继发性足肿胀减弱(P0.05)、关节炎评分分值、IL-1β、TNF-α、IL-6含量均减小(P0.05),IL-10含量升高(P0.05).结论:TNFR-Fc通过降低炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及升高IL-10水平来发挥治疗类风湿性关节炎的作用.     

体重指数与育龄男性性激素水平的相关性研究

目的探讨体重指数与男性性激素水平之间的关联性,为男性不育的治疗提供理论根据。方法随机选取2018年1月～2018年12月济宁市第一人民医院生殖医学中心男科门诊就诊患者,测量患者身高与体重,计算体重指数,根据其体重指数(BMI),将患者分为四组:低体重组(BMI18.5)、正常体重组(18.5≤BMI24)、超重组(24≤BMI28)和肥胖组(BMI≥28);检测其性激素五项(睾酮、促卵泡生成素、泌乳素、促黄体生成素、雌二醇),并对结果进行统计处理。结果共纳入研究对象387人,其中低体重组6人、正常体重组140人、超重组149人、肥胖组92人。四组间睾酮和雌二醇差异有统计学意义(P0.05),睾酮与BMI指数负相关(r=-0.234,P0.001);雌二醇与BMI指数正相关(r=0.130,P0.001)。结论肥胖可以影响男性性激素水平,也是造成男性不育的一个重要因素。     

榼藤对牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠的治疗作用研究

研究榼藤提取物对牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型的治疗作用.通过牛Ⅱ型胶原与弗氏佐剂来诱导大鼠CIA模型,建模期间通过体征观察和足趾肿胀度评分来判定建模是否成功.将造模成功的大鼠随机分为模型组,榼藤提取物低(93.75 mg/kg)、中(187.50...     

几种氯代芳烃对鱼体内性激素水平的影响研究

选取了工业废水中普遍存在的几种氯代芳烃 ,以腹腔注射的方法对鲫鱼进行染毒 .分别用放射免疫测定方法测定未染毒和染毒的鲫鱼体内的性激素 (睾酮和 17β -雌二醇 )含量 ,并对测定结果进行比较 .结果发现染毒鲫鱼体内睾酮的浓度水平与未染毒鲫鱼体内睾酮水平相比存在着明显的差异 ,而 17β -雌二醇浓度水平与未染毒鲫鱼体内 17β -雌二醇水平相比基本上没有显著差异 .表明上述氯代芳烃类化合物进入水生动物尤其是高等水生动物体内后 ,能显著影响睾酮的合成与释放及其正常生理功能 ,而对 17β -雌二醇的影响还需进一步的研究     

自拟方"通痹祛风汾"对大鼠急性痛风性关节炎抗炎作用研究

目的:观察"通痹祛风汤"对急性痛风性关节炎模型大鼠不同时相的影响,探讨其治疗急性痛风性关节炎的作用机制.方法:注射尿酸钠建立大鼠痛风性关节炎模型,大鼠灌胃给药,观察对大鼠关节肿胀率及关节滑膜囊表达IL-1β mRNA和TNF-α mRNA(RT-PCR)的影响.结果:"通痹祛风汤"可有效抑制大鼠踝关节肿胀程度;关节滑膜囊TNF-αmRNA和IL-1βmRNAr的表达明显减低.结论:"通痹祛风汤"可抑制痛风性关节炎TNF-α和IL-1的产生而发挥抗炎作用,明显减轻关节的病理性损伤,有效抑制关节炎的临床进程.     

单关节类风湿性关节炎滑膜组织中uPA、uPAR、PAI-1蛋白表达及意义

为探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)及其受体(urokinase-type plas-minogen activator receptor,uPAR)、纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor,PAI-1)在单关节发病类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的表达。采用免疫组化方法检测13例单关节发病RA、19例典型RA和20例正常滑膜组织中uPAu、PAR、PAI-1蛋白表达情况。结果显示:13例单关节RA滑膜组织中uPA、u PAR、PAI-1阳性表达主要分布在滑膜衬里细胞、滑膜下层单核细胞及血管内皮细胞,阳性表达部位与典型RA相同,但表达强度明显低于典型RA(P<0.05)。与正常滑膜组织相比,单关节RA滑膜中uPA、uPAR、PAI-1蛋白表达明显增高(P<0.05)。由此可知:单关节RA滑膜组织中uPA、uPAR、PAI-1表达明显低于典型RA滑膜组织,可能与单关节RA为典型RA病程早期阶段,滑膜中uPA、uPAR、PAI-1蛋白尚处于低水平表达阶段有关。     

虎纹蛙在产卵前后血浆性激素变化的研究

本文研究了虎纹蛙产卵前后血浆性激素变化,得到如下结果;雄性虎纹蛙在交配期血浆睾酮的含量较非交配期高,提示间质细胞分泌的激素与精子的形成相关。雌性虎纹蛙在产卵前血浆雌二醇含量较产卵后高,说明卵泡分泌的激素可能影响其他性征的发育。     

电针刺激去势雌性大鼠肾俞脾俞双穴对其血清中睾酮、雌二醇和孕酮浓度的影响

目的 :为研究针刺治疗更年期综合征的作用机制提供实验依据 .方法 :以去势 4～ 5月龄雌性SD大鼠为更年期模型 ,选取“肾俞”、“脾俞”两个穴位 ,电针治疗 7天后 ,测定血清雌二醇 (E2 ) ,睾酮 (T)以及孕激素 (P)的含量 .实验结果表明 ,电针雌性大鼠“肾俞”、“脾俞”穴可使老年大鼠血清中雌二醇的水平升高 ,睾酮的水平降低 ;对青年大鼠血清中孕酮、雌二醇、睾酮的水平无明显影响 .结论 :电针刺激“肾俞”、“脾俞”双穴对大鼠体内雌二醇和睾酮水平有调节作用 ,可以使老年大鼠体内雌二醇水平升高 ,从而缓解了更年期症状 .     

草鱼胆中毒大鼠致急性肾损伤TNF-α动态水平测定

目的：研究血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）在不同时间段鱼胆中毒大鼠体内的变化及其与鱼胆中毒后急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）发生和发展的关系。方法：健康SD大鼠30只（雌雄各半）,采用ELISA测定20只不同时间段鱼胆中毒大鼠与10只正常对照大鼠的血清TNF-α水平,比较鱼胆中毒大鼠血清TNF-α与正常对照大鼠血清TNF-α的水平。结果：①草鱼胆中毒大鼠肾组织病理改变主要在肾小管,表现为变性、坏死并且随时间延长病变越严重;②鱼胆中毒大鼠血TNF-α较正常对照组明显升高,其升高程度与时间成正比。结论：鱼胆中毒的发病机制与血清TNF-α密切相关,血清TNF-α参与了鱼胆中毒后AKI的发生与进展。鱼胆中毒时间越长引起中毒的程度越重,血清TNF-α升高就越明显。     

炎症因子在肩袖损伤大鼠中的表达及其临床意义

目的:探讨肩袖损伤大鼠肩关节液中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等炎症因子的表达规律及其与大鼠疼痛等症状之间的相关性,为研究肩袖损伤诊治及康复的病理生理学过程提供理论基础.方法:选择60只spraguedaw(SD)大鼠,分为手术组及假手术组,每组30只,手术组切断约1/2冈上肌肌腱模拟肩袖损伤.于术后第2、4、8周,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测关节液及滑囊TNF-α、IL-1β、IL-6水平,统计组间差异.同时评估大鼠关节疼痛评分,并分析炎症因子与疼痛之间的相关性.结果:在3个观测时间点,手术组的TNF-α、IL-1β、IL-6水平和关节疼痛评分均高于对照组(P0.05),随着术后时间的延长,炎症因子表达水平和关节疼痛评分逐渐降低,手术组关节疼痛评分与IL-1β、IL-6、TNF-α的含量呈正相关.结论:肩袖损伤可导致关节液中炎症因子的过度表达,并加剧肩关节疼痛,随着术后时间的延长,炎症因子逐渐消退,疼痛逐渐减轻.关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α3种炎症因子与关节疼痛呈正相关,炎症因子水平可作为肩袖损伤疼痛诊治疗效评价的客观依据.     

白芍总苷对葡聚糖硫酸钠致大鼠实验性结肠炎作用机制研究

目的探讨白芍总苷(tatol glucosides of paeony,TGP)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)致大鼠实验性结肠炎的治疗作用及机制。方法由DSS诱导大鼠实验性结肠炎模型,给予白芍总苷治疗,观察大鼠一般状况、疾病活动度指数(Disease activity index,DAI)和组织学评分,ELISA法检测大鼠结肠组织TNF-α、IL-4和PGE2水平,免疫组化法检测NF-κBp65的表达水平。结果白芍总苷能明显改善结肠炎大鼠一般状况,减低DAI评分和组织学评分。与模型组相比,TNF-α、PGE2和NF-κBp65水平均显著降低(P<0.05),IL-4水平虽有上升趋势,但差异无显著性。结论白芍总苷可能通过抑制NF-κBp65活化,减少TNF-α和PGE2等炎症因子表达来有效缓解结肠炎大鼠结肠炎症状态。     

Alzheimer病患者性激素水平测定与ApoE基因分型研究

检测散发性Alzheimer病(AD)患者与健康老年人血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、促滤泡成熟素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平,分析ApoE基因型和性激素水平与中国AD患者的相关性.采用放射免疫分析方法对81例Alzheimer病患者和98例正常老年人性激素水平测定,用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法分析ApoE基因型.结果为:AD组女性血清雌二醇37.25 pg·mL-1、男性睾酮2.22 ng·mL-1、促滤泡成熟素男性10.39 U·L-1、女性21.52 U·L-1、促黄体生成素男性7.54 U·L-1、女性9.42 U·L-1;正常组女性血清雌二醇39.09 pg·mL-1、男性睾酮4.07 ng·mL-1、促滤泡成熟素男性11.74 U·L-1、女性28.93 U·L-1、促黄体生成素男性1.62 U·L-1、女性6.28 U·L-1.AD组和正常对照组的ApoE基因频率存在差异,携带ApoE4的比例分别为16.1%、12.2%.ApoE4等位基因可能是中国散发性AD发生的危险因素.携带ApoE4基因型的AD患者血清雌二醇、睾酮水平明显低于对照组.提示雌二醇、睾酮水平下降可能与AD发病相关.     

华中枸骨叶总黄酮纯化及抗RA滑膜炎症活性评价

以总黄酮含量和转移率为评价指标,采用多种方法提取纯化华中枸骨叶总黄酮(ICTF),并以TNF-α诱导人关节滑膜成纤维细胞MH7A为滑膜炎症细胞模型评价其抗RA滑膜炎症活性,试剂盒测定炎症介质NO含量,RT-qPCR检测炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8mRNA的转录水平.结果表明,华中枸骨叶乙醇总提取物经石油醚脱脂...     

维吾尔族类风湿关节炎患者血清、关节滑液中RANTES水平的变化及其临床意义

为探讨血清、关节滑液中调节活化正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)与维吾尔族类风湿关节炎(RA)患者与骨关节炎(OA)疾病活动的相关性。选取已经确诊的维吾尔族RA患者60例、OA患者30例和对照组30例作为研究对象。采用酶联免疫法(ELISA)检测血清及关节滑液中RANTES水平,同期记录相关临床资料及实验室指标。用SPSS19.0进行统计学分析。结果显示RA患者血清、关节滑液中RANTES水平均明显高于OA组和对照组;RA患者关节滑液中RANTES水平较血清中明显增高(t=-2.58,P=0.01)。RA患者血清中RANTES水平与CRP、抗CCP抗体、关节肿胀指数呈正相关(Spearman相关系数r值分别为0.41,0.30,0.29);RA患者关节滑液中RANTES水平与CRP、关节肿胀指数呈正相关(Spearman相关系数r值分别为0.03,0.01)。由此可知,维族RA患者血清、关节滑液中的RANTES水平增高,病变关节组织是RANTES产生的主要部位;血清RANTES可以作为判断维吾尔族类风湿关节炎患者疾病活动性的指标。