不同体外培养系统对牛体外受精胚胎冷冻解冻后孵化能力的影响

采用ＳＯＦ和ＴＣＭ１９９与输卵管上皮细胞共同培养系统对牛体外受精卵进行培养,观察了在这两种培养条件下得到的囊胚经冷冻—解冻后的孵化能力．在ＳＯＦ＋输卵管上皮细胞的培养条件下,囊胚的发育率为２１．３％,囊胚经冷冻—解冻后的孵化率为３７．５％;在ＴＣＭ１９９＋输卵管上皮细胞的培养条件下,囊胚的发育率为２６．０％,囊胚经冷冻—解冻后的孵化率为４７．７％．研究结果表明这两种体外培养系统的培养效果无显著差异（Ｐ＞０．０５）．     

不同体外培养条件对牛体外受精胚胎质量影响的研究

研究探讨了不同体外培养条件下牛体外受精胚胎的发育速度及囊胚细胞数，从而了解不同体外培养系统对牛体外受精胚胎质量的影响，实验一中伴体外受精卵分别在ＳＯＦ＋牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）和ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ两种培养系统内培养，在这两种培养条件下囊胚发育率分别为２２．２％和２１．２％，囊胚细胞数分别为１１３．３±５．０和９７．９±８．３，受精后第６～９ｄ的囊胚出现率分别为４０．１％，３７．０％，１９．     

平衡方法及平衡和解冻温度对牛体外受精胚胎玻璃化冷…

以体外成熟，体外受受精并体外发育的牛囊胚为实验材料进行玻璃化冷冻保存，分别探讨了防冻剂的平衡方法以及平衡和解冻温度对胚胎冻冷效果的影响。实验结果显示，在室温下（１８℃）以二步法或三步法添加防冻剂的冷冻效果，明显优于在４℃下，以二步法添加防冻剂的效果，其冷冻一解冻胚的发育率分别为６２．８％（５９／９４）、５３．１％（５２／９８）和１４．６％（１２／８２（Ｐ＜０．０１）；另外，室温下以二步法玻璃化冷冻     

平衡方法及平衡和解冻温度对牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存效果的研究

以体外成熟、体外受精并体外发育的牛囊胚为实验材料进行玻璃化冷冻保存，分别探讨了防冻剂的平衡方法以及平衡和解冻温度对胚胎冷冻效果的影响．实验结果显示，在室温下（１８℃）以二步法或三步法添加防冻剂的冷冻效果，明显优于在４℃下，以二步法添加防冻剂的效果，其冷冻—解冻胚的发育率分别为６２．８％（５９／９４）、５３．１％（５２／９８）和１４．６％（１２／８２）（Ｐ＜０．０１）；另外，室温下以二步法玻璃化冷冻的胚胎，在２０℃水浴中解冻的发育率明显高于３７℃解冻的效果，６２．７％（３７／６２）、２６．２％（１６／６１）（Ｐ＜０．０１）．结果表明：体外成熟、体外受精的牛胚胎可以进行玻璃化冷冻保存，并能得到较高的培养存活率，在室温下，以二步法添加防冻剂，并于２０℃下解冻的玻璃化冷冻保存方法是一种快速、简便而有效的方法．     

牛体外受精卵的冷冻保存研究

将胚胎分别以PBS 20?S 10%乙二醇和PBS 20?S 10%甘油为冷冻保护液,或者在PBS 20?S 10%乙二醇中添加或不加蔗糖为保护液,用常规冷冻方法进行冷冻处理.胚胎保存1～18天后将其解冻,并在发育用培养液TCM199 10%OCS(发情母牛血清) 丙酮酸钠中培养48小时.结果表明解冻胚的形态正常率和培养后的发育率在乙二醇处理组和甘油处理组中分别为81.2%(13/19)、56.2%(9/16)和84.6%(11/13)、46.2%(6/13),两组之间无量著差异.在添加蔗糖和不加蔗糖的处理组中,胚胎解冻后的形态正常率和培养后的发育率分别为75.0%(15/20)、55.0%(11/20)和83.3%(15/18)、61.1%(11/18),两组之间也无明曼差异.试验结果证明,用乙二醇为防冻剂对牛体外受精胚胎进行冷冻保存,其效果相当于或略优于甘油,在乙二醇处理组中,添加蔗糖与否并不影响其冷冻效果.     

牛体外受精胚胎成份明确培养系统的建立

以 SOF为基本培养液 ,分别添加血清、PVA以及同时添加 PVA、肌醇和柠檬酸钠 ,进行牛体外受精卵的发育培养 ,三个处理组的囊胚发育率分别为 :3 2 .6%、1 1 .9%和 1 5 .9% ,血清处理组极显著高于两个 PVA处理组 (p<0 .0 1 ) .在此基础上 ,将受精处理后的卵子去掉卵丘细胞后 ,培养于 SOF PVA 肌醇 柠檬酸钠培养液内 ,以未去掉卵丘细胞的卵子为对照 ,两个处理组的囊胚发育率分别为 1 0 .8%和 2 1 .1 % .二者间没有显著差异 .结果表明没有血清和卵丘细胞的成份明确的培养系统能够支持牛体外受精卵发育至囊胚阶段 .     

牛体外受精胚胎与输卵管上皮细胞和卵丘细胞的共同培养

采用四种方法以对牛体外精胚进行培养，以便了解牛输卵上皮细胞和卵丘细胞对牛体外受精胚发育的影响。其中方法１是输卵管上皮细胞培养法，２是卵丘细胞培养法，３是输卵管上皮细胞＋卵丘细胞培养法，４是输卵管上皮＋ＥＧＦ培养法，实验１采用方法１、２和３进行培养，结果采用方法３的囊胚发育率为１９．２％，显著低于采用方法１的整胚发育率。实验２采用方法１、２和４进行培养，结果采用方法１和４的囊胚发育分别为１９．４％和     

牛体外受精胚胎在成份确定培养液内的发育

将牛体外受精胚胎培养于化学成份确定的 SOF+PVA的培养系统内 ,观察了不同PVA浓度对胚胎体外发育的影响 .结果在 1 mg/ml、3mg/ml和 5mg/ml的 PVA浓度条件下 ,囊胚的发育率分别为 2 7.5% a、1 9.1 % a和 4 .3% b( a>b,P<0 .0 1 ) .将体外受精胚胎分别培养于 M1 99+输卵管上皮细胞、SOF+BSA和 SOF+PVA的三种培养系统内 ,囊胚的发育率分别为 2 0 .4 %、2 9.0 %和 2 7.5% ,结果表明本研究确立的化学成份确定的体外培养系统可以用于牛体外受精胚胎的发育培养 .     

K+和Ca2+对牛体外受精胚胎体外发育的作用

研究观察了在SOF+PVA这一化学成分明确培养系统条件下,不同浓度的K+和Ca2+对牛体外受精胚胎体外发育的影响,以便为今后进一步探讨影响牛早期胚胎体外发育的因素提供实验依据.实验1 将牛体外受精卵培养分别于含有0、5.0、8.35和21.2mMK+的SOF+PVA培养系统中,结果卵裂率分别为20.0%a、87.0%b、80.8%b和85.7%b(a<b, P<0.01),囊胚的发育率分别为0%c、20.0%d、10.1%e和18.7%f(c<d,e,f, P<0.01;d>e, P<0.05).实验2 将牛体外受精卵分别培养于含有0、1.13、1.71和3.0mMCa2+的SOF+PVA培养系统中,结果卵裂率分别为0.9%g、86.6%h、80.9%h和92.0%h (g＜h, P<0.01),囊胚的发育率分别为0%i、17.6%j、15.7%j和15.0%j (i＜j, P<0.01).上述结果表明,K+和Ca2+在和牛受精卵的卵裂及早期发育中起重要作用,培养系统中这两种离子的缺乏会严重影响卵裂及胚胎早期发育;5.0mM的K+更适合于胚胎的早期发育,而Ca2+在一定范围内浓度的变化对卵裂及胚胎早期发育过程的影响不大.     

牛胚胎体外生产技术的应用研究

利用屠宰牛卵巢抽出的卵母细胞，以卵裂率和囊胚发育为标准，对牛胚胎体外生产过程进行了简化试验，结果显示：不加卵丘细胞的高密度卵母细胞体外成熟（１００－２００枚／平皿）可代替加卵丘细胞标准密度培养，其卵裂率和囊胚发育率没有显著变化，体外授精时间可从成熟培养后２２小时延长至２７小时，卵裂率和囊胚发育率均没有显著变化。卵母细胞体外成熟后可以不经洗涤直接移入受精滴，原成熟培养皿内残留孵丘细胞再培养４８小时形     

K~ 和Ca~(2 )对牛体外受精胚胎体外发育的作用

研究观察了在 SOF PVA这一化学成分明确培养系统条件下 ,不同浓度的 K 和 Ca2 对牛体外受精胚胎体外发育的影响 ,以便为今后进一步探讨影响牛早期胚胎体外发育的因素提供实验依据 .实验 1将牛体外受精卵培养分别于含有 0、5 .0、8.3 5和 2 1 .2 m MK 的 SOF PVA培养系统中 ,结果卵裂率分别为 2 0 .0 % a、87.0 % b、80 .8% b和 85 .7% b(ae,P<0 .0 5 ) .实验 2将牛体外受精卵分别培养于含有 0、1 .1 3、1 .71和 3 .0 m MCa2 的 SOF PVA培养系统中 ,结果卵裂率分别为 0 .9% g、86.6% h、80 .9% h 和 92 .0 % h(g相似文献   

胚胎的培养液平均拥有量和单独或群体培养对牛体外受精胚胎发育的影响

采用化学成分明确的培养系统,研究了胚胎的培养液平均拥有量以及单独或群体培养对牛IVF卵体外发育的影响.将牛体外受精(IVF)卵分别以每100、50和20μl培养液小滴内10枚卵子的形式进行发育培养,三个处理组的囊胚发育率分别为:6.0%、9.4%和14.3%,三者间无显著差异.在此基础上,选择培养效果较好的每枚胚胎2μl的培养液量,分别在20、10、4、2μl小滴内培养10、5、2、1枚胚胎,四个组的囊胚发育率分别为:10.0%、16.4%、10.0%、4.0%,5枚胚胎/10μl小滴处理组的囊胚率显著高于1枚胚胎/2μl处理组(p<0.05).研究结果表明:不同培养液拥有量以及单独或群体培养都可支持部分胚胎发育至囊胚阶段,降低培养液体积和群体培养更有助于牛IVF卵的体外发育.     

卵母细胞的不同对牛体外受精效果的影响

为了进一步提高牛体外受精（ＢＩＶＦ）胚的发育率，探讨了来自不同大小卵泡、具有不同卵丘细胞层数以及细胞质形态不同的卵母细胞对牛体外受精效果的影响。结果表明：１）分别采自直径大于５ｍｍ、２￣５ｍｍ和小于２ｍｍ的卵泡的卵母细胞，经体外成熟、体外受精后，卵裂率分别为５４．５％（３０／５５）、６４．４％（８５／１３２）和５０．４％（６３／１２５）。其中，２￣５ｍｍ卵泡的卵母细胞的体外受精结果显高于小于２ｍ     

不同冷冻保护剂对鸡胚胎干细胞冻存与复苏的影响

通过计算复苏后细胞存活率以及观察细胞生长状态.比较了二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)和甘油3种冷冻保护剂对鸡ES细胞的冷冻保存效果.结果 显示:1)当DMSO的浓度为5%、10%和15%时.鸡ES细胞复苏后的存活率分别为73.57%、85.47%和78.90%;当EG浓度为5%,10%和15%时.复苏后细胞存活率分别为68%、74.30%和67.70%:当甘油浓度为5%、10%,和15%时细咆的复苏存活率分别为31.20%、51.40%和50.60%.在相同浓度下.以DMSO保护效果最佳.EG次之.甘油最差,同一种保护剂.以10%浓度的保存效果最好;2)以DMSO为冷冻保护剂.复苏后的鸡ES原代培养在饲养层上可以较好的生长.并形成集落.当浓度为10%时AKP阳性克隆数最高为23.5个,上述结果提示.以10%的DMsO作为鸡ES细胞的冷冻保护剂效果最佳.     

不同种公牛精液对牛卵母细胞体外受精效果影响的研究

分别利用不同个体的海伏特、安格斯和荷斯坦种公牛精液进行体外受精，观察了不同品种不同个体种公牛精液的体外受精效果，利用五种海伏特种公牛精液进行体外受精后卵裂率为１７．６％～７４．７％，囊胚发育率为１．０％～３２．６％，不同个体间差异极显（Ｐ〈０．０１）。利用五种安格斯种公牛精液进行体外受精后卵裂率为３４．７％～８５．３％，囊胚发育率为６．２～４０．５％，不同个体间具极显差异（Ｐ〈０．０１）。利用     

体外培养高产奶牛胚胎的研究

研究体外培养法培养效果及对体外受精胚胎发育的影响。体外受精胚胎分别在加输卵管上皮细胞单层和颗粒细胞单层（2×106个／ml）的体外培养体系的培养液中培养。结果发现,冷冻胚胎解冻后停留时间对胚胎培养效果影响极显著（P〈0．01）;冷冻胚胎解冻后胚胎等级对胚胎培养效果影响显著（P〈0．05）,解冻后A级胚胎存活率79％、囊胚孵化率56％,显著高于B级胚胎存活率60％和囊胚孵化率39％（P〈0．05）。体外培养体系囊胚形成主要集中在第8d,加体细胞的体外培养体系显著好于不加体细胞的简单体外培养法。     

受精滴中精子不同平衡时间对牛卵母细胞体外受精的影响

为寻找精子在受精滴中的最佳平衡时间, 以加入精子时间为０ ｈ （对照组）, 分别在０ｈ, ０．５ ｈ, １ ｈ, ２ ｈ, ４ ｈ 随机加入等数卵母细胞到各受精滴, 结果显示： ０ ｈ, ０．５ ｈ 组卵裂率较高, 分别为８７．７％ 、８４．７％ , 与其他组相比差异显著（ Ｐ＜ ０．０１）; ０．５ｈ 组的囊胚率最高,为６７．５％ ,与对照组的５７．７％ 比较差异显著（ Ｐ＜ ０．０１）。结果表明,受精滴中精子经过０．５ｈ 平衡后, 弱精及死精粘聚沉淀, 余下活力强的健壮精子, 此时加入牛卵母细胞受精, 可获得较高卵裂率及囊胚率     

肝素及血小板激活因子对牛卵母细胞体外受精的影响

在受精液中添加不同浓度的肝素（２，６，１８，５４，１６２，４８６ｍｇ／Ｌ）均能明显提高牛卵母细胞的受精分裂率（分别为８３．６，８４．９，８５．７，８９．２，８４．５和９０．２％，比对照组７３．６％，Ｐ〈０．０５）和卵裂指数（授精后４４－４５ｈ大于２－细胞的卵裂数占卵裂总数的百分率，分别为８５．７，８５．０，８９．９，９．８７，８７．４和８５．５％，对对照组５７．６％，Ｐ〈０．０１。然而，卵母细胞的     

生长因子对牛体外受精卵体外发育的影响

本研究探讨了在成熟培养液和发育培养液内添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α对牛体外受精卵发育的影响，在成熟培养液内分别添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α，经体外受精处理后卵裂率分别为７８．３％和８２．６％，显著高于对照组６０．２％的卵裂率；三个处理组囊胚发育率分别为１９．６％、２４．５％和１８．７％，三者间无显著差异．在发育培养液内分别添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α，其囊胚发育率分别为３０．０％和２３．４％，与对照组２１．０％的囊胚发育率相比差异不显著．在成熟培养液内添加ＴＧＦ－α，在发育培养液内添加ＥＧＦ，经这两种生长因子分别作用后，体外受精卵翼胚发育率为２１．０％，与单独使用其中一种生长因子相比囊胚发育率无明显提高．