家蝇抗菌肽的分离纯化及性质研究

采用阳离子交换法,分别以pH5.1的乙酸铵和pH6.6的甲酸铵作缓冲液进行2次离子梯度洗脱,从家蝇成虫血淋巴中分离得到1种抗菌肽CM-Ⅲ.SDS-PAGE电泳显示为1条带,分子量约为10000μ,耐受高温的能力强,100℃处理10 min仍有活性.它对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、白葡萄球菌)和阴性菌(绿脓假单胞菌、大肠杆菌、肠炎沙门氏菌)都有抗性,其中对致病性金黄色葡萄球菌6538P抑菌活力最强.CM-Ⅲ对血细胞没有凝聚作用.其抗菌机理尚待进一步研究.     

拟穴青蟹抗菌肽Crustin新变体的表达特性与抗菌功能

Crustins是一类较早发现并广泛分布在甲壳动物中且富含半胱氨酸的阳离子抗菌肽,能够参与抗菌免疫应答.从拟穴青蟹(Scylla paramamosain)中克隆获得一个Crustin基因新变体,命名为SpCrus1a,其cDNA序列全长744bp,开放阅读框编码113个氨基酸,成熟肽分子质量10.03ku,理论等电点8.30.表达分析结果发现其转录本主要存在于鳃、卵巢、上皮组织中,经脂多糖刺激后SpCrus1a表达会上调.体外合成SpCrus1a的第29～47位氨基酸(SpCrus1a29-47)进行抗菌活性实验,发现其对革兰氏阳性菌具有较强的抗菌活性,而对被测的革兰氏阴性菌抗菌活性较弱或无抗菌活性.浓度24μmol/L的合成肽SpCrus1a29-47能够在5min内杀死大多数的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),在120min内杀死全部的金黄色葡萄球菌.扫描电镜分析发现合成肽SpCrus1a29-47可造成金黄色葡萄球菌表面结构崎岖不平,高浓度SpCrus1a29-47会引起细菌大量死亡.上述结果表明SpCrus1a是抗菌肽Crustin的新变体.     

抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌稳定性及其抗菌机理

Lc-NKlysin-1是从海洋鱼类——大黄鱼(Larimichthys crocea)中获得的抗菌肽,为进一步优化该抗菌肽和研究其结构与功能的关系,本文截取了其N末端的12个氨基酸残基,设计并合成了抗菌肽Lc-NKlysin-1a,同时,通过琼脂板打孔法,对其抗菌活性,不同温度、pH值、盐浓度等对其抗菌活性的影响,其溶血活性,最低抑菌质量浓度,其抗菌特征等进行了研究,并在扫描电镜下观察了其对细菌形态结构的影响.结果表明:抗菌肽LcNKlysin-1a对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)和革兰氏阴性菌(大肠杆菌、副溶血弧菌、铜绿假单胞菌、抗链霉素大肠杆菌)均具有抗菌活性;但对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和抗链霉素大肠杆菌的抗菌活性最好,其最低抑菌质量浓度(MIC)在15.62531.25μg·mL~(-1)之间;相对于Lc-NKlysin-1,Lc-NKlysin-1a的抗菌活性明显增强;Lc-NKlysin-1a在15.62531.25μg·mL~(-1)时,其溶血率为3.80%7.37%,溶血活性较低;Lc-NKlysin-1a对温度、pH和盐等具有良好的耐受性,且稳定性高.此外,通过扫描电镜还观察到,抗菌肽Lc-NKlysin-1a作用于细菌后细菌的形态发生了明显改变,其细胞膜出现了褶皱和塌陷的现象,最终导致了内溶物外泻而死亡.改造后的抗菌肽其相对分子质量小,活性高,稳定性强,更易于被开发成抗菌肽类药物.     

云南鸡血藤水提物和醇提物的体外抗菌活性研究

为了研究云南鸡血藤水提物及醇提物的体外抗菌活性,采用琼脂扩散法和微量肉汤稀释法研究云南鸡血藤水提物及75%乙醇提取物对6种细菌(表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌)和2种真菌(白假丝酵母菌和黑曲霉)的抗菌活性。进一步研究云南鸡血藤的不同提取物对热、紫外光的稳定性。结果表明,云南鸡血藤叶水提物及75%醇提物对各种革兰氏阳性菌均敏感,且75%醇提物的抗菌活性明显强于水提取物。云南鸡血藤75%乙醇提取物对革兰氏阳性菌的最小抑菌浓度（MIC）范围为1.03～4.12 mg/mL,而水提取物对革兰氏阳性菌的最小抑菌浓度(MIC)范围为2.06～4.12 mg/mL。云南鸡血藤提取物对100℃以下温度不敏感,经121℃高温处理,75%乙醇提取物抗金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌效力显著降低,水提物抗表皮葡萄球菌的效力显著降低。随着紫外光照射时间的延长,两种不同提取物的抗菌活性基本不变。云南鸡血藤醇提物的体外抗菌活性优于水提物的体外抗菌活性,本研究为临床上应用云南鸡血藤提取物作为抗菌制剂提供了理论基础和实验依据。     

鳞翅目昆虫细胞抗菌肽的诱导、筛选及抗菌活性的研究

选取3种离体培养的鳞翅目昆虫细胞系,采用热灭活的大肠杆菌诱导的方法,诱导其产生抗菌肽,并进行抗菌活性检测、诱导动力学研究及Tricine SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析．结果筛选到1株诱导抗菌活性较高的昆虫细胞系——粉纹夜蛾BTI-Tn-5B1细胞系,并发现该粉纹夜蛾5B1细胞在诱导后16h产生了1个分子量大约为8000的抗菌肽,抗菌活性检测表明其对金黄色葡萄球菌（Sta phylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli K12D31）、德氏卑沙门氏菌（Salmonella derby）均有不同程度的抑制作用,其中特别是对革兰氏阴性菌——大肠杆菌K12D31和德氏卑沙门氏菌有较强的抑菌活性．     

人工合成蚯蚓29肽的特性

为了解蚯蚓抗菌29肽的特性,采用菌落计数法对其抗菌谱、热稳定性、作用时间,以及最低抑制浓度等性质进行了研究.结果证实:该抗菌肽1)具有广谱性,即不仅有效抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等常见细菌,而且还能够抑制酿酒酵母、露湿漆斑菌、总状毛霉等真菌;2)活力高,当质量浓度为0.009 g/L时对大肠杆菌就有明显抑制效果;3)稳定性强,在pH为2.2或11的环境中抑菌活性不变,而且在煮沸10 min后仍能保留80%以上的活性.     

金银花抗菌物质的提取及其抑菌作用的研究

研究了金银花中天然抗菌物质的提取工艺条件和抑菌效果.实验结果表明提取物的最高吸收峰为324 m,抗菌物质的最佳提取工艺条件为料水比为125,当浸提温度70℃,浸提pH值40,漫提时间60 min;金银花提取对供试菌种的最低抑菌浓度≤8%(提取物粉末g/100g水,下同),10%的金银花提取液相当于100μmol/min青霉素对大肠杆蓖和金黄色葡萄球菌的抑菌效果.     

紫贻贝加工下脚料抗菌肽的分离及其稳定性研究

以紫贻贝加工下脚料为原料,采用超声辅助乙酸粗提抗菌肽粗提物,筛选其抑菌活性敏感指示菌。在此基础上,以固相萃取、Sephadex G-25层析和半制备RP-HPLC对抗菌肽进行分离纯化及其稳定性分析。结果显示,金黄色葡萄球菌为最敏感菌株,获得的Sp40-2-4和Sp40-2-5组分抑菌活性显著高于抗菌肽粗提物(P0.05),凝胶过滤色谱分析表明Sp40-2-4组分单一,相对分子质量约为1 970.78 Da;Sp40-2-4组分具有一定的热稳定性(100℃、20 min,抑菌活性残留率72.42%)、反复冻融性(冻融次数≤10,抑菌活性残留率91.42%以上)和抗胃蛋白酶水解能力(抑菌活性残留率75.59%)。     

迷迭香酸的抗菌机理研究

为了了解迷迭香酸的抗菌活性及抗菌机理,采用平板生长抑制法,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）,聚合酶链式反应（PCR）分析等方法,研究了迷迭香酸对大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的抗菌活性及其抗菌机理。结果表明,迷迭香酸对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抗菌活性,且对金黄色葡萄球菌的活性大于对大肠杆菌的活性;迷迭香酸可改变细菌细胞膜的通透性,导致还原糖和蛋白质的渗漏而影响细胞代谢,通过抑制DNA聚合酶的活性而影响DNA复制,从而发挥了抑菌作用。     

某院金黄色葡萄球菌的临床分布及耐药性分析

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)在医院的临床分布特征及耐药情况,该文以四川某医院2018年收集的539株S.aureus为研究对象,采用微量肉汤稀释法测定其对15种抗生素的最低抑菌浓度(MIC),并用统计学方法进行分析。结果显示,539株S.aureus中有142株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA);MRSA主要分布于皮肤性病科(30株,21.1%);S.aureus对青霉素、红霉素、克林霉素耐药率较高,分别为96.10%、63.50%、60.30%,但对利奈唑胺、万古霉素等敏感;MRSA菌株对苯唑西林、青霉素、红霉素等的耐药率均明显高于甲氧西林敏感型金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphylococcus aureus,MSSA)菌株;在预防和治疗S.aureus感染时,需根据药敏实验合理选择使用抗菌药物。     

不同纯度和极性的香蕉果皮黄酮抑菌活性的研究

采用滤纸片法,以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为供试菌,对香蕉果皮黄酮粗提物、纯化物、不同极性的黄酮以及香蕉果皮黄酮-丙酸复配剂的抑菌活性进行了研究.结果表明,香蕉果皮黄酮纯度越高,极性越大,抑菌活性越强,对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌的抑菌活性明显大于对革兰氏阴性菌大肠杆菌的抑菌活性.香蕉果皮黄酮纯化后对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为13.00 mg·m L-1和3.25 mg·m L-1,其与丙酸复配能显著增加对大肠杆菌的抑菌活性,2者具有协同增效作用.     

齐墩果酸衍生物的合成与表征及其抑菌活性的研究

齐墩果酸属于五环三萜类化合物,在自然界中分布广泛,并显示出多种生物活性,如:保肝、抗炎、抗病毒、抗癌等多种药理作用,并具有良好的抑菌活性.因此本文以齐墩果酸为先导化合物,对其结构进行了修饰,合成4个中间体和6个新的目标产物,并经过IR、1 H NMR波谱测试技术对其结构进行了表征.并以其对培养于MHB(高铁血红蛋白)的S.a(金黄色葡萄球菌)4220、S.a(金黄色葡萄球菌)209、MRSA(抗甲氧西林金黄色葡萄球菌)3167、MRSA(抗甲氧西林金黄色葡萄球菌)3506、QRSA(抗喹诺酮金黄色葡萄球菌)3505、QRSA(抗喹诺酮金黄色葡萄球菌)3519和培养于BHI中的E.coli(大肠杆菌)1682、E.coli(大肠杆菌)1356等8种菌种进行抑菌活性测试,结果表明,部分化合物的抑菌活性较标准抗菌药物有明显提高.     

复合诱变原生质体选育高抑菌活性纳豆菌

采用紫外化学复合诱变法对纳豆菌原生质体进行诱变,以期获得高抑菌活性的优良菌株.结果表明,在溶菌酶质量浓度为0.3mg/mL、酶解时间为40min、酶解温度为35℃、酶解pH为7.0下原生质体的形成率和再生率达到最高.通过紫外化学复合诱变,得到一株高抑菌活性菌株.与原菌株比较,其对金黄色葡萄球菌的抗菌作用提高了19.7%,对大肠杆菌的抗菌作用提高了19.5%.连续传代培养10代,抗菌活性稳定.     

天然调味料对鱿鱼腐败菌的抑菌作用研究

以鱿鱼自然腐败菌为指示菌,研究大葱、生姜、大蒜提取液以及陈醋的抑菌作用。结果表明:大蒜水溶性和醇溶性提取液、陈醋对鱿鱼腐败菌有强抑菌作用,生姜仅醇溶性提取液有抑菌活性,而大葱水溶性和醇溶性提取液抑菌活性不明显。经测定大蒜水溶性提取液对鱿鱼腐败菌的最小杀菌浓度(MBC)和最小抑菌浓度(MIC)分别为原蒜液和原蒜液稀释4倍,陈醋的MBC和MIC分别为原醋液稀释16倍和32倍。在60~100℃下加热10~40 min,大蒜液的抑菌活性随着加热温度升高和加热时间的延长而降低,而陈醋的抑菌活性则在加热温度高于70℃,加热时间超过30 min后显著提高。不同比例的姜液、蒜液和陈醋混合液对鱿鱼腐败菌的抑菌效果不同,当复配液中陈醋相对含量高,而姜、蒜液相对含量低时抑菌效果好。     

海南温莪术挥发油的抑菌活性及提取工艺研究

文章研究海南温莪术挥发油的抑菌活性及最佳提取工艺.采用微量稀释法测定海南温莪术挥发油对白色念珠菌(Candida albicans)、白色葡萄球菌(Staphylococcus albus)、四联球菌(Micrococcus tetragenus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抑菌活性,并与浙江温莪术进行比较;以对白色念珠菌的抑菌活性为评价指标,用正交试验法研究海南温莪术挥发油的提取工艺.结果表明:海南温莪术挥发油的抑菌活性上优于浙江;海南温莪术挥发油抑菌活性成分的最佳提取工艺为:料液比1∶6(g/m L),提取1次,提取时间40 min.为海南温莪术的开发利用提供依据.     

抗菌肽Brevinin-GR23抗金黄色葡萄球菌作用机制的初步研究

Brevinin-2GHe是从海南沼蛙(Hylarana guentheri)皮肤中获得的抗菌肽,为进一步优化该抗菌肽和分析其结构与生物学活性之间的关系,本研究去除了Brevinin-2GHe的7个C-末端氨基酸,并通过固相合成获得了含有23个氨基酸的brevinin-GR23;同时,检测了抗菌肽brevinin-GR23的抗菌活性和最低抑制浓度以及brevinin-GR23的时间杀菌曲线;判断了brevinin-GR23对细菌细胞膜完整性的影响;分析了brevinin-GR23对细菌体内DNA的作用;测定了其对兔红细胞的毒性作用;检测了brevinin-GR23在不同溶液环境中的二级结构,并通过在线软件分析了其3D结构.结果表明:抗菌肽brevinin-GR23对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抗菌活性最好,最低抑制浓度为16. 6μmol/L;在120 min时,其抑制细菌的效率最高,但对兔红细胞的溶血活性却较低.核酸泄露的实验结果显示,brevinin-GR23不仅能增加S. aureus的细胞膜渗透性,而且它还能与细菌DNA结合,干扰金黄色葡萄球菌DNA的复制,从而发挥抑菌作用.二级结构分析表明:brevinin-GR23在PBS溶液中以不规则结构为主,而在膜模拟溶液中其却能转变成α螺旋结构,这有利于其与细菌细胞膜的结合,因而致使细菌细胞膜的完整性发生了改变.在线软件的分析显示:其3D结构为α螺旋,经改造后的brevinin-GR23,其分子量更小,且活性强、毒性小、化学合成成本较低,这更有利于进一步的开发与应用.     

青蒿精油的提取及抑菌性能研究

采用水蒸气蒸馏法提取青蒿叶和花蕾中的精油并研究其抑菌活性。通过单因素试验和正交试验优化青蒿精油的提取工艺;以5种代表性的微生物:金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CICC 10384、大肠埃希菌(Escherichia coli)CICC 23657、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) CICC 10275、黑曲霉(Aspergillus niger)CICC 2487、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC 33032作为指示菌,利用滤纸片法检测青蒿精油的抑菌活性,采用液体培养基倍比稀释法进一步测定青蒿精油对这5种指示菌的最低抑菌浓度。结果表明:水蒸气蒸馏法提取青蒿叶和花蕾中精油的最佳工艺条件为:浸泡时间1.5 h,蒸馏时间3 h,料液比1∶8;此条件下提取出的青蒿精油对5种指示菌(包含革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和真菌)均有一定的抑菌活性,其中对金黄色葡萄球菌和酿酒酵母的抑菌效果最好,MIC均为48.5μL/mL。     

生防细菌LM-3的鉴定及其抗菌蛋白的研究

LM-3是一株来自土壤的广谱拮抗细菌.经革兰氏染色、形态特征、培养特征和生理生化特征等分析,LM-3菌株被鉴定为多粘类芽孢杆菌.采用盐析法提取获得了该菌株的抗菌粗蛋白,抑菌活性测定表明抗菌蛋白对辣椒炭疽病菌等多种植物病原真菌有强烈的抑制作用.抗菌蛋白对链霉蛋白酶E和胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K部分敏感;高温(120℃)处理20min后抗菌蛋白仍保留84.71%的活性;酸碱处理发现抗菌蛋白在pH 8.5时最为稳定,而在pH 2.5时80℃处理1h完全失活;25W紫外灯(2400lx)照射8h对其活性没有影响.发酵上清液经硫酸铵盐析、高温(100℃)处理和SDS-PAGE分析,该抗菌蛋白的分子量介于6kDa和14.2kDa之间.     

藏药大籽蒿提取物体外抗菌活性研究

目的:研究藏药大籽蒿全草和花蕾提取物的体外抗菌活性.方法:以试管稀释法测定提取物对大肠埃希菌(ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)和铜绿假单胞菌(ATCC27853)标准菌株的最小抑菌浓度(MIC),同时测定最小杀菌浓度(MBC).结果:藏药大籽蒿水、乙醇提取物在体外对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抗菌作用,并有一定的杀菌作用;乙醇的热提取物对铜绿假单胞菌也具有明显的抑菌和杀菌活性.结论:藏药大籽蒿对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌标准菌株具有一定抗菌作用,其抗菌活性部位为水提取物和乙醇提取物;同一溶剂的大籽蒿全草与花蕾提取物具有相同的抗菌活性.     

蝇蛆抗菌肽对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎治疗效果的研究

目的研究蝇蛆抗菌肽对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎的治疗效果。方法本试验采用金黄色葡萄球菌诱导蝇蛆,从蝇蛆中提取抗菌肽并用于治疗金黄色葡萄球菌性乳腺炎。采用分娩后6～8 d的BALB/C雌鼠120只,随机分组:空白对照组、生理盐水治疗组、抗生素治疗组和抗菌肽治疗组,每组30只。空白对照组不做处理,另外3组用金黄色葡萄球菌感染小鼠建立小鼠乳腺炎模型,建模成功后,各试验组使用相对应的药物连续治疗7 d,并于第3、5、7天每组分别断颈处死10只小鼠,观察小鼠乳腺病理组织及HE染色切片,测定小鼠乳腺组织中TNF-α含量和金黄色葡萄球菌数量。结果经过金黄色葡萄球菌诱导产生的抗菌肽浓度显著高于未诱导组(P0.05)、对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性、对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.5 mg/L,蝇蛆抗菌肽可显著抑制小鼠乳腺组织中金黄色葡萄球菌的生长(P0.05)、降低乳腺组织的损伤和极显著下调TNF-α的含量(P0.01)。结论蝇蛆抗菌肽对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎治疗有一定治疗效果。