中华大蟾蜍尾退化过程中尾蛋白酶活性的变化

采用活性电泳方法对中华蟾蜍尾退化过程中尾蛋白酶活性的变化进行了研究,结果显示：（1）酸性条件（pH3．5）下,从35期到38期,检测到的蛋白酶带数目较少,活性较弱;碱性条件（pH9．5）下,除25kD的蛋白酶带之外,检测到的其它酶带与酸性条件下相似;（2）中性条件（p H7.0)下,从35期到38期,检测到的蛋白酶带逐渐增多,活性也明显增强,尤其是在尾退化的高峰期（37期、38期）,110kD、92kD、74kD的酶带活性达到峰值;另外在尾退化的高峰期还检测到了7条新酶带,其中55kD的酶带活性也达到峰值。以上结果显示,蛋白酶在中华大蟾蜍蝌蚪尾退化过程中起重要作用。     

肝再生过程中肾desmin和GFAP的表达以及MMPs的变化

采用免疫组织化学法和明胶酶谱电泳法研究大鼠肝部分切除(PH)后再生过程中肾结蛋白(desmin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2),-9(MMP-9)的活性变化.免疫组织化学结果显示,肝再生过程中肾小球系膜细胞、足细胞和间质细胞表达desmin和GFAP,而且二者的表达在PH后均经历了先减少后恢复的过程.明胶酶谱电泳结果显示,在对照组,检测到1条92 kD(pro MMP-9,MMP-9酶原形式)蛋白酶带,具有强的活性.在PH后8 d到14 d检测到了92 kD,86 kD(MMP-9),72 kD(pro MMP-2,MMP-2酶原形式)和66 kD(MMP-2)4条蛋白酶带.从第10 d到14 d,pro MMP-9和MMP-9活性逐渐增强,pro MMP-2和MMP-2活性逐渐降低.     

黄精属植物种间蛋白质和蛋白水解酶的分析比较

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术和复性电泳(G-PAGE)技术对五种黄精属植物茎和叶的蛋白谱带和蛋白水解酶谱进行了分析。结果表明:(1)茎和叶的蛋白质和蛋白水解酶种类有很大差异;(2)它们的茎中均含有66.2、54.6、38.5、28、18.6kD蛋白质和肠、55kD的蛋白水解酶;(3)蛋白质和蛋白水解酶可作为黄精属植物的分类依据之一。     

人血管抑素AK(1-3)基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

用6月龄大月份流产的新鲜肝脏组织为材料,提取总RNA,通过反转录得到cDNA,并以此为模板,经PCR得到人Angiostatin基因的AK(1-3)片段.将此PCR产物直接与载体pMD18-T连接,转化大肠杆菌DH5α.经蓝白菌落筛选,PCR和酶切检测,筛选出阳性克隆,命名为pMDA,测序证明克隆序列与GenBank发表序列一致,大小为858bp.用Sal 和Bgl 酶切将该基因插入载体pQE40,并转化宿主菌M15[pREP4].经质粒电泳PCR和酶切检测筛选阳性克隆,得到表达载体pQEA,插入基因与载体上小鼠DHFR基因重组形成嵌合基因.在30℃,2×YT培养基(Kan25μg/mL Amp200μg/mL),2mmol/LIPTG条件下诱导pQEA/M15[pREP4]表达.所得菌体总蛋白经SDS-PAGE分析,结果表明,在预期的61kD处得到一条特异带,为AK(1-3)cDNA与载体固有基因DHFR-6хHis的重组蛋白表达产物.实验结果为抗肿瘤药物的研制提供了条件.     

菠萝焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶的分离纯化及性质研究

应用硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素、Sephadex G-200、磷酸纤维素柱层析分离纯化了菠萝叶片焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP).凝胶过滤和非变性聚丙烯酰胺梯度电泳测定酶的分子量为132kD和140kD,SDS-聚丙烯酰胺电泳分析得到一条分子量为66kD的蛋白主带,表明该酶可能是由同种亚基组成的二聚体.此外,还对该酶的部分酶学性质进行了初步研究.     

用种子醇溶蛋白电泳技术鉴定外源DNA导入春小麦变异后代

采用醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对外源DNA导入技术选育的春小麦变异株系的单株及其受体种子的分析结果:小麦各变异后代电泳谱带在15～19条之间变动,受体谱带为16条.多数谱带与受体相似,也出现了受体所没有的新谱带.各后代的谱带着色深度、谱带宽度均存在显著差异,其差异的出现与外源DNA导入有关.同时说明,种子醇溶蛋白电泳技术可用于外源遗传物质导入小麦变异后代的鉴定.     

离子束介导的小麦低蛋白变异株系NRA、叶绿素含量动态分析

对离子束介导大豆DNA的小麦后代低蛋白质变异株系的旗叶硝酸还原酶活性(nitrate reductase ac-tivity NRA)、叶绿素含量进行分析.结果表明:株系05-49的NRA从抽穗中期至灌浆后期均高于对照,灌浆末期低于对照;株系05-14从扬花中期至灌浆中期均低于对照,灌浆后期至末期均高于对照.叶绿素总含量、叶绿素a和叶绿素b含量,株系05-14在被检测的各时期均高于对照,株系05-49仅在灌浆末期低于对照,其它各时期均高于对照.两变异株系叶绿素a/b值均低于对照.     

离子束介导的小麦变异株系染色体行为分析

经低能离子束将大豆DNA导入新麦九号后获得了4个性状和蛋白质含量基本稳定遗传的第六代变异株系05-5-1,05-49-1,05-61,05-8-1,对其染色体畸变及有丝分裂指数进行了分析和研究.结果表明:1.低能离子束介导的4个变异株系小麦的有丝分裂指数均明显高于对照组.2.离子束介导的变异株系小麦染色体畸变率与对照组...     

用种子醇溶蛋白电泳技术鉴定外源DNA导入春小麦变异 …

采用醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对外源ＤＮＡ导入技术选育的春小麦变异株系的单株及其受体种子的分析结果：小麦各变异后代电泳谱带在１５￣１９条之间变动,受体谱带为１６条。多数谱带与受体相似,也出现了受体所没有的新谱带。各后代的谱带着色深度,谱带宽度均存在显著差异,其差异的出现与外源ＤＮＡ导入有关。同时说明,种子醇溶蛋白电泳技术可用于外源遗传物质导入小麦变异后代的鉴定。     

大麦黄花叶病毒抗性突破株系的分子变异

通过大麦黄花叶病毒(BaYMV)抗性突破株系的核酸RNA1全序列分析并与野生株系比较表明.抗性突破株系在病毒复制酶或转运蛋白区域(6K2)和核酸RNA复制酶区域(NIb)存在二个变异位点.在这二个位点上抗性突破株系核酸分子编码的氨基酸分别为脯氨酸(Pro)和苏氨酸(Fhr),而野生株系分别为缬氨酸(Val)和丙氨酸(Ala).对该两种酶蛋白质二级结构分析显示,氨基酸的变异可能导致了蛋白质的结构、功能与性质的改变,并且此种变异与抗BaYMV冬大麦中抗性基因ym4的功能丧失有关,同时也说明了大麦品种田间致病性的差异与病毒核酸分子中的点突变关系密切.     

Low pH-induced conformational changes in 33 kD protein of photosystem Ⅱ

33 kD protein, located on the lumen side ofthylakoid membranes, is one of three extrinsic proteins ofphotosystem Ⅱ (PS Ⅱ ). Previous study showed that NBSmodification of W241, the only tryptophan in 33 kD protein,is helpful for understanding the function of W241 in main-taining functional conformation of 33 kD protein. In thispaper, studies of both circular dichroism and fluorescencespectra showed that upon decreasing pH from 6.2 to 2.5, theconformation of soluble 33 kD protein changed significantly,with an increase or a decrease in percentage of random coilor (z-helix and turns. The changes in secondary structures ofthis protein are pH reversible. After NBS modification at pH2.5, the conformational change of 33 kD protein was keptfixed. The CD ellipticity at 200 nm for NBS-modified 33 kDprotein is much lower than that for control, indicating that the unfolding degree of 33 kD protein was enhanced after the NBS modification. Moreover, the conformational flexibility islost in NBS-modified 33 kD protein, and the conformationalchange becomes pH irreversible, indicating that NBS modi-fication blocked the reversibility of conformational change of33 kD protein. The specific binding capability of NBS-modi-fled 33 kD protein is much lower than that of low pH-treatedcontrol. Furthermore, the rebinding of modified protein on PS Ⅱ membranes cannot restore the activity of oxygen evo-lution. We suggest that it is low pH but not NBS modificationof W241 that leads to the conformational change of 33 kDprotein from one functional to another non-functional state.The significant capability of proton transport of 33 kD pro-tein is discussed.     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.     

pH调控方式对微囊包埋Klebsiella pneumoniae发酵的影响

考察了不控制pH、CaCO3调节pH和KOH调节pH情况下,NaCS/PDMDAAC微胶囊包埋的肺炎克雷伯氏杆菌Klebsiella pneumoniae ZJU5205的菌体生长、底物甘油的消耗和1,3-丙二醇的生成动力学,并同时测定了过程中pH的变化情况。结果表明,通过KOH调节pH,可获得最大菌体生长量和最大的1,3-丙二醇浓度。故对固定化肺炎克雷伯氏杆菌来说,有效调控pH对发酵过程有重要影响。     

小麦耐盐突变体筛选及生理生化特性分析

以小麦幼穗、幼胚为原料材料,进行耐盐突变体的筛选,并对其愈伤组织及再生植株后代进行耐盐稳定性的生理生化分析,结果表明 （１）耐盐系在高盐浓度下其鲜重、干重明显高于对照系;（２）耐盐系保持较高的Ｋ＾＋／Ｎａ＾＋比;（３）对照系种子有１１条醇溶蛋白电泳带,而耐盐系为１４条,与对照系相比Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４带为耐盐所特有,Ｂ１带含量高于对照物,但Ｂ５带含量低于对照系;（４）耐盐系再生植株后代可溶蛋白电泳带为     

一株海洋蛭弧菌类生物对海水细菌的生物控制和水质的影响

 研究了一株海洋蛭弧菌类生物(Bdellovibrio-and-like organisms,BALOs) DA5与溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）在海水中共培养时的相互作用;并研究了DA5对添加营养的自然海水中细菌的生物控制效果及对水体pH、化学需氧量(COD)、氨氮(NH₃-N)和亚硝酸氮(NO₂-N)含量的影响。结果表明DA5在振荡培养条件下对溶藻弧菌具有明显的裂解作用,较高的感染比有助于快速减少寄主菌,但长时间的共培养也不能完全清除溶藻弧菌。DA5对自然海水中异养细菌和弧菌均有一定的清除作用,且对弧菌的消减作用更明显,但对水体pH、COD、NH₃-N和NO₂-N含量均无显著影响,且BALOs含量总体上与细菌或弧菌的含量呈正相关。     

水稻土壤宏基因组中的β-葡萄糖苷酶基因克隆、表达及酶活的研究

β-葡萄糖苷酶(Ec3.2.1.21)属于糖苷水解酶家族3,它能够水解非还原性末端的β-D葡萄糖苷键,释放出游离的葡萄糖及相应的配基。β-葡萄糖苷酶是纤维素降解中的关键酶,对于可再生资源纤维素的利用具有十分重要的意义。本研究从水稻土壤中分离得到β-葡萄糖苷酶基因pds5,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,转化BL21大肠杆菌中,并诱导表达该基因。重组BL21大肠杆菌用IPTG诱导后,所提取的酶蛋白具有β-葡萄糖苷酶的活性,经SDS-PAGE分析,确定其相对分子质量为83 kD。通过控制pH和温度的方法,测得该酶酶活最适pH为7.0,最适温度为37.5℃。     

芽孢杆菌（Bacillus subtilis No.16A）苎麻脱胶聚半乳糖醛酸裂解酶的纯化及酶学性质

通过丙酮沉淀,阳离子交换层析,凝胶过滤,从苎麻脱胶菌Bacillus subtilis No.16A发酵液中纯化了聚半乳糖醛酸酶（PGase）.结果表明该酶分子量为30.2?ｋu,最适作用pH为9.0,最适作用温度为50?℃,在55?℃以下、中性pH（6.0～8.0）范围内稳定, Ca2+、Mg2+对该酶有激活作用, Cu2+、Mn2+、Co2+、Hg2+有抑制作用,酶解产物在235 nm处有强吸收峰,说明该酶是聚半乳糖醛酸裂解酶.     

莽山烙铁头蛇粗毒双向凝胶电泳分析

采用固相pH梯度等电点聚焦-SDS双向聚丙烯酰胺凝胶电泳对莽山烙铁头粗毒进行了分析,通过银染法显色,电脑软件识别出约40个蛋白质点.其中分子量超过130 kD的蛋白质点很少,分子量90 kD~10 kD的区域均有蛋白质点分布,分子量34 kD区域的蛋白质点较为密集,且它们的含量明显较高.从蛋白质点的等电点分布范围分析,偏于碱性端的蛋白质明显多于酸性端的蛋白质,且分布在中性偏碱(pH 7~8)的区域.质谱数据的数据库搜寻结果表明:莽山烙铁头蛇毒中含有类凝血酶组分、纤溶酶组分、血小板聚集蛋白、抗血小板聚集蛋白和平滑肌钙离子通道阻断剂等组分.     

进水pH值对悬浮载体生物流化床处理效能影响的研究

采用悬浮载体生物流化床工艺处理城市生活污水,考察了进水pH对其处理效果的影响.结果表明,进水pH变化不影响有机物去除效果;氨氮(NH3-N)去除率随pH上升而上升,最佳pH为7.5;当pH在6.5~8.0之间变化时,总氮(TN)去除率基本保持在50%以上,但当pH值>8.2和<6.1时,TN去除效率有着下降的趋势.因此在指定试验条件下,pH变化不影响有机物的去除;pH为中性或偏碱性的环境下,反应器对NH3-N及TN有很好的去除效果.