小鼠早期胚胎体外培养技术中几种化学因素的影响

与胚胎体外培养有关的一些化学物质，如液体石蜡、ＣＯ２、乙醇和水质等，对小鼠早期胚胎发育有明显的影响．有的液体石蜡对胚胎有毒害作用，这种毒害作用与其比重和所含的硝基萘杂质无关．有的国产液体石蜡适合于做早期胚胎培养之用．培养液中混入乙醇对胚胎发育危害很大，浓度达到０．８％时，胚胎完全不发育，而浓度低于０．０５％时，则无明显影响．酒精厂生产的ＣＯ２粗制品，乙醇含量约为～０．１８％，完全适合于做胚胎培养的ＣＯ２气源．用三蒸水配制的培养液进行胚胎体外培养，可获得良好效果．     

小鼠早期胚胎体外培养技术中几种化学因素的影响

与胚胎体外培养有关的一些化学物质，如液体石蜡、ＣＯ２、乙醇和水质等，对小鼠早期胚胎发育有明显的影响。有的液体石蜡对胚胎有毒害作用，这种毒害作用与其比重和所含的硝基萘杂质无关。有的国产液体石蜡适合于做早期胚胎培养之用。培养液中混入乙醇对胚胎发育危害很大，浓度达到０．８％时，胚胎完全不发育，而浓度低于０．０５％，则无明显影响。酒精厂生产的ＣＯ２粗制品，乙醇含量约为￣０．１８％，完全适合于做胚胎培养的Ｃ     

人输卯管组织与小鼠胚胎共培养的初步观察

为了检测人输卵管组织共培养系统对胚胎早期体外发育的影响,将超排得来的小鼠2细胞期胚胎与人输卵管组织共培养,或以人输卵管组织培养后的条件培养液进行培养。培养液为Ham's F10+10％FCS,并以其作为对照培养液。实验结果显示:无论是组织共培养或是条件培养液共培养,胚胎体外发育达囊胚率,胚胎逸出透明带率及胚胎的发育速度都较F10对照组高。其中输卵管壶腹部组织共培养及其条件培养液共培养对胚胎发育的促进作用较峡部大,而且其条件培养液共培养是以组织培养一周内所得的条件培养液效果最好。组织共培养和条件培养液共培养发育的胚胎正常分裂,没有差别,形态也均正常。实验提示人类输卵管上皮可能分泌某种因子能促进胚胎发育。     

昆明鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定

目的：从昆明系小鼠的早期胚胎分离和培养胚胎干细胞(ES细胞)．方法：收集小鼠3．5d胚龄的囊胚，将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，5—6d后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养，观察集落的生长情况并通过碱性磷酸酶染色、原位杂交、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定．结果：KS细胞集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性．结论：昆明系小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成ES细胞，并能进行传代培养．     

克服昆明小鼠早胚2-细胞阻滞的研究

目的：评价两种培养液对昆明小鼠胚胎２－细胞阻滞的克服效果。方法：用添加１５％ＦＣＳ或ＢＳＡ的Ｍ１６和ＣＺＢ培养液培养昆明小鼠２－细胞胚胎和体外受精卵,以观察这两种培养液对昆明小鼠早胚发育的影响及在克服昆明小鼠２－细胞阻滞中的作用,并通过ＣＺＢ培养液中葡萄糖成份的增减,了解其作用及效应的时间。结果：添加ＦＣＳ的Ｍ１６和ＣＺＢ培养注均能较好地支持２－细胞胚胎发育到囊胚（７８．９％,７２．７％）,当进行     

久效磷对小鼠早期胚胎体外发育的影响

采用小鼠早期胚胎的体外培养技术,研究了久效磷对小鼠着床前胚胎发育的影响。结果表明,剂量低于0.22mmol/L对小鼠早期胚胎无明显作用,剂量为0.34mmol/L时,70.6％的8细胞胚胎能发育至囊胚,剂量达0.45mmol/L,对小鼠早期胚胎有显著的毒害作用,只有5.7％可以发育至囊胚。在经久效磷处理的小鼠早期胚胎电镜照片上可以看到,细胞内网架结构保持完好,线粒体被破坏,数量变少,空泡变大、增多,细胞内不同结构对久效磷的敏感性有一定差异。     

小鼠早期胚胎内细胞团分化潜能的研究

用免疫手术去除小鼠早期胚胎的外层细胞或滋养层细胞后，其内细胞闭经２４ｈ体外培养后能够重新形成滋养层，从晚期桑椹胚，早期胚泡和晚期胚泡分离的ＩＣＭ的洋养层分化率分别为７０．３％、６９．３％和１１．１％。晚期胚泡ＩＣＭ的洋养层分化率明显低于早低于早期胚泡和桑甚胚的滋养层分化率，实验结果表明小鼠早期胚泡的ＩＣＭ仍角具有较强的分化为洋养层的能力，但晚期胚泡的ＩＣＭ分化为滋养层的能力明显减弱。从而推断晚期胚     

小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养

目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离与培养。方法取BALB/c小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对MEF的生长形态进行观察,并对传代细胞培养液、胚胎胎龄、胰蛋白酶浓度进行筛选。结果 MEF在体外为贴壁生长型细胞,第三、四、五代细胞纯度较高且增殖最为旺盛;添加血清的M199和DMEM均能较好的满足原代细胞的生长,两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异;11.5～16.5d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;0.1%胰蛋白酶消化MEF时间以8～11min为宜。结论通过对MEF分离培养影响因素的筛选,为MEF的进一步研究奠定了基础。     

小鼠胚胎干细胞R1表面特异结合多肽的筛选

胚胎干细胞是从哺乳动物胚胎发育早期的囊胚的内细胞团内分离出来的一类细胞,具有自我更新和全能性的基本特征.作者利用M13噬菌体展示技术筛选与未分化的小鼠胚胎干细胞R1表面特异结合的多肽.实验利用未分化的小鼠胚胎干细胞为筛选靶细胞,分化的小鼠胚胎干细胞为吸附细胞,进行3轮的消减筛选,经细胞ELISA鉴定,噬菌体DNA测序和多肽序列分析,得到13条能与小鼠胚胎干细胞特异结合的多肽.通过BLASTP比对发现有11个体内的同源蛋白,为进一步研究小鼠胚胎干细胞表面分子提供研究基础.     

稀土氧化物对小鼠胚胎体外发育和胚胎移植影响的初步研究

近年来，很多学者对常用的胚胎培养液以及添加的血清、蛋白质的种类、浓度等进行了一系列的比较研究，但仍未获得较为一致的结论。还有人试用了羊水作培养液，或直接在培养液中添加生长因子如胰岛素、激素混合物等。已有很多研究发现稀土元素及其化合物浓度恰当时对多种农作物、藻类、细菌等具有刺激生长的效应。但其对哺乳动物组织、细胞乃至胚胎的体外培养的作用尚未见报道。本实验在Ham’sF10培养液中分别加人不同浓度的稀土氧化物培养小鼠2细胞胚胎，初步研究了它们对小鼠胚胎体外发育速度及移植后的胚胎活力的影响。结果见表1和表2。…     

保藏食用菌几种母种培养基的研究

本文以棉籽壳、稻草、锯末、麦麸、高梁、玉米、马粪、腐殖土、（活性碳）分别制成沸水浸提液，加营养液，琼脂为综合培养基；另以胡萝卜（ＤａｕｃｕｓｃａｒｏｔａＬ．ｖａｒ．ｓａｔｉｖａＤＣ）马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍｔｕｂｅｒｏｓｕｍｌ）紫菜头（Ｂｅｔａｖｕｌｇａｒｉｓｖａｒ．ｒｏｓｅａＭｏｑ．）切条分别为天然培养基；对照培养基为葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素Ｂ１加琼脂和水。将其综合培养基和天然培养基与对照培养基进行比较，结果表明：棉子壳和稻草培养基能用于食用菌母种保藏培养基。胡萝卜培养基做生产或短期（三个月）保藏食用菌母种培养基尤为经济简便。     

南方红豆杉离体胚的培养

将南方红豆杉离体胚分别在黑暗和光照条件下置于White、B5、MS、DCR四种培养基上培养,以研究不同培养基对离体胚萌发和生长的影响.实验结果表明不同培养基对离体胚的萌发率有显著影响,以B5培养基效果最好,可达96%左右.胚萌发的时间也随培养基的改变而不同.在同样培养条件下,光照下胚的萌发率略高于黑暗下的萌发率,光照更利于幼苗生长.已萌发的胚在不同培养基上生长的状况不同,以B5培养基的存活率最高（70%）,生根情况最好.本实验为打破南方红豆杉种子休眠提供了一种切实有效的方法,并为南方红豆杉的快繁、保护利用以及紫杉醇的提取提供了潜在的参考价值.     

手性固定相合成中原料YWG-NH_2与Spher-NH_2性能的比较

利用液相色谱手性固定相进行手性分离的研究越来越多，因此手性固定相的合成也就成了该项研究中必不可少的关键问题．在手性固定相的合成中氨丙基硅胶作为手性固定相的键合基体，其性质的好坏直接影响手性固定相的手性分离能力．分别利用国产和进口分装的氨丙基硅胶作基体，合成结构完全相同的手性固定相，结果表明进口的氨丙基硅胶合成的手性固定相的性能优于用国产氨丙基硅胶合成的手性固定相，并论述了可能产生这种差别的原因．     

Calcium-releasing activity induced by nuclei of mouse fertilized early embryos

At fertilization,repectitive transient rises of intracellular calcium concentration occur in all mammals studied so far .It has been shown that calcium rises could be induced when mouse fertilized 1-,2-cell nuclei were trans-planted into unfertilized eggs and that the reconstituted embryo could be activated .Howerver,whecther the capability of inducing calcium rises occurs in all stages of mammalian embryos remains unknown ,In this study ,by using the nuclear transplantation technique and measurement of intracellular calcium rises in living cells,we showed that only the nuclei from mouse fertilized 1-cell and 2-cell embryos ,neither the nuclei from 4-,8-cell and ethanol activated parthe-nogenetic embryos nor 2 or 3 nuclei of electrofused 4-cell stage syncytium ,have calcium -releasing activity when they were transferred into unfertilized mature oocytes,Our results indicate that the calcium-releasing activity in nuclei of 1-,2-cell embryos is produced during fertilization and exists at the special stage of fertilized early embryos.These sug-gested that the capacity of inducting calcium release activity in fertilized early embryos is important for normal embryonic development.     

兔胚胎在不同培养液中体外发育的比较

本试验对比兔2细胞胚胎在三种培养液中体外培养144h后的发育状况。三种培养液分别为：加小牛血清的A组M199培养液、加牛白蛋白5片段的B组M199培养液和加胰岛素、转铁蛋白及谷氨酰胺的C组M199培养液。从发育速度看,A组和B组比C组的胚胎发育快;从发育效果看,发育到囊胚和孵化囊胚的比例,A、B、C三组分别为77．0％、64．8％及7．0％。这两方面结果都说明A、B组培养效果接近,C组的培养效果较差。试验结果表明,B组培养液是研究影响兔胚胎发育因素的适宜培养液。     

Derivation of pluripotent epiblast stem cells from mammalian embryos

Although the first mouse embryonic stem (ES) cell lines were derived 25 years ago using feeder-layer-based blastocyst cultures, subsequent efforts to extend the approach to other mammals, including both laboratory and domestic species, have been relatively unsuccessful. The most notable exceptions were the derivation of non-human primate ES cell lines followed shortly thereafter by their derivation of human ES cells. Despite the apparent common origin and the similar pluripotency of mouse and human embryonic stem cells, recent studies have revealed that they use different signalling pathways to maintain their pluripotent status. Mouse ES cells depend on leukaemia inhibitory factor and bone morphogenetic protein, whereas their human counterparts rely on activin (INHBA)/nodal (NODAL) and fibroblast growth factor (FGF). Here we show that pluripotent stem cells can be derived from the late epiblast layer of post-implantation mouse and rat embryos using chemically defined, activin-containing culture medium that is sufficient for long-term maintenance of human embryonic stem cells. Our results demonstrate that activin/Nodal signalling has an evolutionarily conserved role in the derivation and the maintenance of pluripotency in these novel stem cells. Epiblast stem cells provide a valuable experimental system for determining whether distinctions between mouse and human embryonic stem cells reflect species differences or diverse temporal origins.     

Aberrant DNA methylation patterns in cultured mouse embryos

Mouse early embryos undergo genome-wide demethylation and remethylation events during pre-implantation development. Abnormal methylation reprogramming is thought to be associated with development arrest. Using immunofluorescence staining with an antibody against 5-methylcytosine (MeC), we examined the genome methylation patterns of mouse embryos cultured in vitro. The results did not show the difference in staining patterns between development-blocked two-cell embryos that cultured in vitro and the two-cell embryos that were freshly collected from the donor mice. But in vitro-arrested morulae displayed a strong positive staining when compared to the morulae freshly collected from the donor mice. At the blastocyst stage, although most embryos showed the expected methylation patterns, with highly stained inner cell mass (ICM) and weekly stained trophectoderm (TE), a proportion of embryos were dimly stained in both ICM and TE. These results indicated that the methylation profile of the embryos could be changed by culturing in vitro when the embryos were in the transition from morulae to blastocyst.     

石防风胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚的发生

石防风幼苗的根在含0.1-50mg/L 2,4-D的 MS 培养基中能诱导产生愈伤组织,最适浓度为0.5mg/L.愈伤组织来源于中柱内部的细胞。在0.5mg/L2,4-D 存在下,细胞分裂生长并发育至胚性细胞团或原胚,转移至无激素培养基后,愈伤组织表面及内部分化出发育阶段不同的体细胞胚,最后发育成为完整植株。在初生幼苗的胚轴上(有时在根或叶)常有次级胚的发生,它们能继续长成次级苗,并在苗上再次长胚,如此不断,直至多次。由此可见石防风体细胞胚发生的能力,是十分强大的。