中国沿海真鲷群体遗传多样性的同工酶电泳分析

用同工酶电泳技术研究威海、厦门、北部湾3个海区真鲷群体的遗传多态性和群体之间的遗传趋异，共观测了LDH、MDH和EST3种酶11个基因位点，其中LDH的3个位点在3个群体都为单态，MDH有1个位点、EST有2—4个位点表现多态，3个群体多态位点数量和平均杂合度以威海群体最高(45．5％与0．161)，厦门群体次之(27．3％与0．156)，北部湾群体最低(27．3％与0．120)，北部湾与厦门海区的真鲷在遗传上较为相似，遗传距离0．012，威海海区真鲷与二者的差异较大，遗传距离分别达0．021(与厦门标本)和0．025(与北部湾标本)。     

pH对真鲷蛋白酶和淀粉酶活力的影响

应用酶学分析研究不同pH度条件下真鲷成鱼胃、肠、肝胰脏和幽门盲囊4个部位蛋白酶和淀粉酶活力的变化.结果表明,真鲷成鱼胃、肠、肝胰脏和幽门盲囊蛋白酶的最适pH分别为6.4,7.2,7.6和8.4,淀粉酶的最适pH分别为6.4,8.0,8.0和7.6.     

盐度影响真鲷幼鱼消化酶活力的研究

报告了海水盐度对真鲷幼鱼消化酶活性的影响．４１日龄的真鲷幼鱼的蛋白酶、α－淀粉酶和脂肪酶的比活力均在盐度２５时达最高值,随着盐度的上升或下降,消化酶的比活力下降．从３种酶的相对比活力来看,盐度对消化酶的活性影响较大,其中对脂肪酶的活性影响更大．这对于真鲷的人工育苗和养殖有参考价值．     

几种鱼肌肉蛋白的电泳分析

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对鲤鱼、草鱼、白鲫鱼、鲢鱼、罗非鱼及鲨鱼的肌肉蛋白做鉴别分析．实验采用4种不同抽提液对肌浆蛋白和肌原纤维蛋白进行提取．肌肉蛋白经电泳后以银染色或考马斯亮蓝染色并对蛋白质图谱作对比分析．根据蛋白质条带的数量、迁移率及浓度等特点,得出各鱼种间的相似性及差异性．结果表明,以SDS-PAGE电泳法可实现对水产食品原料品种的初步鉴别．     

海水养殖真鲷肝CYP1A基因的克隆与表达

根据国外已发表野生真鲷(Pagrus major)肝CYP1A cDNA同源序列,利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从我国海水养殖真鲷(Pagrus major)的肝脏中扩增出P4501A基因全长cDNA序列(1 548 bp).用基因重组技术将P4501A cDNA克隆于pTrc-CKS载体,在大肠杆菌TOP10F′诱导表达,将细菌总蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析;其表达产物为89 ku,获得了表达融合蛋白CKS-CYP1A.该项研究将为利用免疫学技术研究有机污染物的毒性效应机制以及探讨P450酶作为毒性效应的生物标志物奠定基础.     

真鲷卵黄蛋白原的诱导、纯化及初步鉴定

采用腹腔注射17β-雌二醇（E2），使真鲷雌鱼在一星期内产生大量卵黄蛋白原（Vtg）；利用阴离子交换高效液相色谱系统分离纯化E2诱导后的Vtg．Native-PAGE电泳结果表明。真鲷有两种形式的Vtg。分子量分别为570kDa和360kDa；SDS-PAGE电泳结果表明，它们由两个不同的亚基构成，分子量分别为180kDa和115kDa；磷、脂、糖蛋白分析证实，所获取的Vtg是一类含磷、脂、糖的大分子蛋白．同时考察了4-壬基酚（4-NP）对真鲷Vtg的诱导作用．     

温度对秋冬季生殖真鲷胚胎发育及仔、稚鱼存活的影响

秋冬季生殖的真鲷胚胎发育的适宜水温低于２７℃而高于１５℃，最适水温在２４～１８℃范围之内；胚胎发育的生物学零度是１０．６℃，胚胎发育时间与水温呈显著的负相关关系，仔、稚鱼对降温的适应能力与其个体大小，起止温度高低正相关，而与水温的下降速度、下降幅度负相关，水温低于１５℃时容易出现仔、稚鱼大量死亡。     

真鲷幼鱼消化酶活性与温度的关系

报告了真鲷幼鱼３种消化酶在不同的反应温度和不同的饲养温度下活性变化的研究结果．在１８～３８℃反应温度范围内,蛋白酶和淀粉酶的活性随温度的升高而增大．其中蛋白酶活性在１３０℃以上增加较快,淀粉酶在２３～３０℃时增加较快．脂肪酶在１８～３０℃时活性随温度上升而增大,其中２３～２６℃时上升较快,超过３０℃,酶活性略有下降．在２３～３０℃饲养水温下,３种酶活性随水温升高而增大．但增幅不同．与反应温度比较脂肪酶活性增幅前者略大于后,蛋白酶活性增幅则前者远大于后者,淀粉酶活性增幅前者略小于后者．作者认为,饲养温度除了直接影响酶的活性外,还通过调节机体的代谢,改变体内的离子浓度、ｐＨ等,从而间接影响了酶活性．     

盐度对秋冬季生殖真鲷的胚胎发育和仔鱼成活的影响

本研究采用不同盐度的海水，以秋冬季生殖真鲷的受精卵和仔鱼为材料，观察不同盐度下真鲷的受精卵的沉浮性；不同盐度对胚胎的孵化时间和孵化率的影响；不同盐度下仔鱼的分布状态和死亡率，研究结果表明，真鲷受精卵在盐度２７．８％以下的海水中呈沉性；在３１．２％以上的海水中则呈浮住；盐度２８．１５‰～３０．２‰．则为由沉性变为浮性的过渡阶段。真鲷受精卵在盐度１１．０８‰～４８．８５‰范围内均能孵化，但孵化的适盐范围为２７．１％～３８．０５‰，而孵化的最适盐度为２８．１５‰～３２．７０‰，从仔鱼的分布状态和仔鱼的成活率综合分析，真鲷仔鱼培育的最适盐度范围为２８．１５‰－３２．７０‰。     

真鲷耗氧率的初步研究

应用测定流水中溶氧量的方法 ,对真鲷耗氧率进行研究 .结果表明 :真鲷耗氧率随水温的升高而升高 ,鱼平均体重 1 2 0 .6～ 1 3 2 .4g,水温 1 9℃时 ,按鱼体重计 (下同 ) ,耗氧率为 2 .677μg/(g·min) ;2 9℃时 ,耗氧率达 5 .841 μg/(g·min) .真鲷的耗氧量随个体的增大而增大 ,耗氧率则随个体的增大而降低 .在水源 pH7.4、盐度 2 1、水温 1 9℃条件下 ,鱼平均体重 1 2 9.5 g ,耗氧率存在昼夜变化 ,1 7∶0 0耗氧率最高 ,为 (3 .877±0 .2 5 7) μg/(g·min) ,0 7∶0 0耗氧率最低 ,为 (1 .0 3 1 ± 0 .2 5 5 ) μg/(g·min) .真鲷白天的平均耗氧率为 2 .1 62 μg/(g·min) ,夜间的平均耗氧率为 2 .2 71 μg/(g·min) ,其代谢水平的昼夜变化不明显 .     

厦门海区真鲷同工酶的组织特异性的初步研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳对厦门海区真鲷的肌肉、眼睛、心脏、胃、肝脏、肠、脾、肾、精巢、鳃等10种组织或器官进行了10种同工酶(LDH、MDH、IDH、GDH、ADH、EST、POX、ALP、ACP、α-AMY)的电泳研究，并对各种酶的同工酶位点表达及酶谱表型进行了初步分析．结果表明：LDH、MDH、IDH、GDH、ADH、EST和POX存在不同程度的组织或器官特异性，ALP酶具有活性，但图谱表现不明显，α-AMY、ACP未检测到酶活性．     

真鲷精液和精巢超低温冷冻保存

以精子的活率和游动时间为指标，研究了福建南部沿海秋冬季真鲷生殖群体精液和精巢超低温冷冻保存的方法和鲜精在不同盐度或酸碱度条件下的生理特性．结果表明，以０．８％的ＮａＣｌ和０．０５％的ＫＣｌ配制的稀释液适合于真鲷精液的冷冻保存．Ｋ＋有助于提高精子的活率．添加甘氨酸可延长精子的游动时间．甘油、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）和甲醇均可作为真鲷精液的抗冻保护剂，但以甘油和ＤＭＳＯ混合使用时的抗冻效果较好．冷冻精液的效果优于冷冻精巢．鲜精在弱碱环境和盐度为３０时平均活率最高，游动时间最长．     

真鲷视顶盖的细胞构筑

次甲基蓝染色及快Golgi法显示,真(?)(Chrysophrys major)视顶盖结构组成由表及里依次为边缘层、视觉层、表面灰管及纤维层、中央灰质层、中央白质层、(?)脑室层,除边缘层外,每一层各含有不同类型的神经元。     

真鲷视网膜和视网膜运动反应的发育

真鲷仔鱼视网膜在孵后３ｄ功能化，变态以前，仔鱼眼睛为纯视锥视网膜，孵后２８ｄ，视杆细胞出现，单锥细胞开始融合为双锥细胞，同时，暗适应条件下的色素指数明显下降，视网膜运动反应出现，当发育到４６ｄ视网膜中单锥细胞和双锥细胞的排列已呈方形镶嵌，视锥细胞密度由３ｄ时的４４个／１００μｍ降为４６ｄ的１９个／１００μｍ，眼睛的焦距由３ｄ时的０．０５７ｍｍ增加到４６ｄ的０．６０ｍｍ，代表视敏度的最小分辨角由３ｄ     

南麂海区真鲷深水网箱养殖技术研究

2003年 4月 30日从福建沙埕购进平均体重 150 g的大规格真鲷鱼种 17633尾在南麂大沙岙半开放性海区深水网箱中进行试养,运输成活率高达 99.7 %,养至 2004年 5月 1日平均体重达 475 g,养殖成活率为 89.9 %,饵料系数为 8.38,投入产出比为 1: 1.297,毛利率为 22.9 %.此外,还对南麂海区深水网箱养殖真鲷的有关技术问题进行了初步探讨.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的表达与纯化

根据GenBank报道的PRRSV VR2332基因序列设计引物,经RT - PCR扩增,得到大小约为390 bp的阳性产物;利用Bam H Ⅰ,EcoR Ⅰ位点将N蛋白基因片段克隆到pET-28a载体,构建原核重组表达质粒pET-N,转化BL21(DE3)并进行SDS-PAGE,Western blot分析.结果表明:克隆的N蛋白基因与GenBank报道的VR2332基因同源性为93.83％;重组菌株经IPTG诱导后,N蛋白基因得到了高效表达;经筛选得到最佳诱导条件,即1 mmol/L IPTG诱导6h,蛋白表达量可达菌体蛋白总量的52.635％,SDS-PAGE后切胶回收可得到纯化的N蛋白,为进一步制备免疫胶体金试纸条或ELISA试剂盒提供基础.     

草鱼和团头鲂的核型及其C带带型的研究

采用用血淋巴细胞培养制备染色体和BSG 显带枝术,研究了草鱼和团头鲂的核型和C 带带型,草鱼、团头鲂都是2n=48,均有8对中部着丝点染色体,10对亚中着丝点和6对亚端着丝点染色体,它们在核型中除第9对染色体短臂有显著差异外,其余染色体形态很为相似,在C 带带型中,大多数染色体都具着丝点C 带,但它们各有特殊的带型,差异较大,草鱼有两对不同圆颗粒状带型亚中着丝点C 带染色体,并有6对短臂全深染的端位型亚端着丝点C 带染色体,还有两对在短臂C带与随体相联的染色体.团头鲂有的在同源染色体长臂间显示对称和不对称的两种插入型C 带,次缢痕位于第9对染色体短臂上,亦为C 带染色阳性,位于缢痕的裂隙内,无端位带,并对草鱼和团头鲂不同亚科的核型特征以及它们染色体与其物种进化的关系进行了初步讨论.     

MSP58基因在肝癌中的表达分析

探讨MSP58基因在人类肝癌肿瘤组织及肝癌细胞系中的表达情况,应用半定量RT-PCR和Western blot方法分别检测MSP58在肝癌细胞系及肝癌肿瘤组织中的mRNA水平及蛋白水平的表达.两种肝癌细胞系HHCC、HepG2,22例肝癌癌区组织,13例正常肝组织作为对照.结果在两种肝癌细胞系中MSP58 mRNA水平和蛋白水平都有明显表达;在22例肝癌肿瘤组织中,不同级别的人肝癌肿瘤标本中mRNA及蛋白均有MSP58表达,并且MSP58的表达量随着人肝癌肿瘤恶性病理级别的增高而增高;13例正常肝组织无表达.MSP58在肝癌肿瘤组织和肝癌细胞系中均有表达,说明其可能对肝癌肿瘤的发生或发展有重要作用.