流式细胞术对生乳中微生物检测的应用研究

流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种对流动的单细胞或小颗粒分子进行快速、多参数检测的新兴技术,其以快速、精确的特点,被应用于食品微生物的检测中。本研究以牛乳为材料,使用蛋白酶消化和尼龙膜过滤的方法来去除生乳中的大颗粒物质;利用7-AAD进行染色,结合荧光微球,对细菌总数进行计数;在FACS Aria II flow cytometer(BD)流式细胞仪的操作系统上建立微生物的检测程序检测细菌总数;检测限达到101 CFU/mL数量级。检测结果与平皿菌落计数法进行比较分析,结果表明,流式细胞术与平皿菌落计数法的结果呈显著相关(P0.01)。     

快速诱导细胞凋亡方法探讨

[目的]利用流式细胞仪检测细胞凋亡在基础研究、疾病诊断及预后预测及评价中具有重要的应用价值.补偿调节所需的单阳染色管的制备,是流式细胞术检测凋亡过程的一个重要步骤.探讨了快速诱导不同细胞系和原代细胞凋亡的方法,优化用于检测细胞凋亡的流式单阳染色管快速制备.[方法](1)分别用100 μmol/L H2O2、体积分数4％...     

新技术在食品微生物检验检测中的应用

现代社会中,随着人们对食品要求的增加,食品安全越来越成为人们关注的焦点,因此寻求、建立快速检测食品微生物的方法十分必要.简要介绍了几种新型的用于快速检验检测食品微生物的技术及其在实际检验检测中的应用.     

乳酸菌计数结果的比较研究

通过流式细胞术(FCM),利用SYTO?24与PI双染色对发酵乳制品即发酵乳饮料和发酵乳中的乳酸菌进行快速检测,并将检测结果与用现行国标中推荐的平板计数法检测得到的结果相比较,两者对发酵乳饮料和发酵乳中乳酸菌的计数结果的相关性系数分别为:0. 9014;和0. 9653,都符合较好.而且FCM稳定性更好,活性细菌的变异率为3. 46%,非活性细菌的变异率为3. 56%;检测速度更快,单样品检测时间不超过10 min;灵敏度更高(10~3AFU·mL~(-1)) FCM在需要快速放行的液体产品检测领域中具有广阔的应用前景.     

食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立

食品及其原料中沙门氏菌的快速、现场检测对食品安全控制具有重要意义.根据沙门氏菌invA基因核苷酸序列设计一组引物,应用环介导等温扩增技术（LAMP）,分别对7种不同血清型沙门氏菌和4种非沙门氏菌进行扩增,同时建立沙门氏菌人工污染的食品模型,比较了LAMP法与活菌计数检测的敏感性.结果表明,该方法仅对沙门氏菌产生特异性扩增,灵敏度高达336,mL-1,食品样品经细菌富集培养后,检测灵敏度高达8.25,g-1.所建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于沙门氏菌污染食品的快速检测.     

流式细胞仪检测技术在食源性致病菌检测中的应用

流式细胞术是一种灵敏度高,耗时短,程序简便的定量细胞分析分选方法,广泛应用于微生物检测、环境监测、临床医学等领域,尤其在微生物检测中表现突出.流式细胞术正逐步应用于食源性致病菌的检测,研究并介绍了流式细胞术在几种食源性致病菌检测中的应用,该方法具有广阔的发展前景.     

免疫金法快速检测食品中的甲基对硫磷

为了建立一种快速、简便的甲基对硫磷残留的检测方法,方便批量样品的初筛,本研究采用了竞争抑制免疫层析原理,研制出了一种甲基对硫磷的免疫金试纸条.结果表明:该试纸条检测限为10 μg/kg、检测时间为7min,与其他有机磷类药物交叉反应小,可用于多种食品样本的检测,且样本检测限为50 μg/kg.结论:该方法操作简便、灵敏度高,可实现对食品样品中甲基对硫磷残留的快速检测.     

表面增强拉曼光谱在食品人工合成色素的现场快速筛查中的应用

已有研究表明食品加工过程中添加的人工合成色素不仅不能提供营养物质,而且可能是导致小儿多动症的来源之一,影响儿童智力发育.基于表面增强拉曼光谱(SERS)原理和便携式拉曼光谱仪,提出了一种非定向的现场快速筛查方法.该方法只需对疑似含有人工合成色素的固体或液体状食品样品进行简单前处理,即可进行SERS检测.样品前处理和检测的总时长不超过15 min,检出质量浓度在1 mg/L水平,可有效满足政府职能部门的现场执法需求.除具有快速、方便、灵敏度高等特点之外,该检测方法的最大优势在于实现了未知样品的现场非定向测试:在同一种前处理过程和检测方法下,可对食品中常添加的亮蓝、胭脂红、日落黄、柠檬黄、苋菜红和诱惑红6种人工合成色素进行快速鉴定和半定量分析.     

流式细胞术检测二甲亚砜对内皮细胞周期的影响

流式细胞术检测二甲亚砜对内皮细胞周期的影响张利华，李方勇，王耀发（华东师范大学河口海岸国家重点实验室上海２０００６２）流式细胞术（ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）是７０年代末发展起来的一种快速高效的单细胞分析及分选的新技术。它在细胞生物学上的一个...     

基于量子点荧光层析试纸条法快速检测三聚氰胺

文章制备了水溶性量子点,建立了一种基于荧光量子点的侧向层析试纸检测新方法,并将该方法用于食品中非法添加剂三聚氰胺的检测。实验结果表明,该荧光试纸条对三聚氰胺检测的肉眼检测限能达到10ng/mL,检测时间为10min。该方法省时、快捷、经济,适合于三聚氰胺现场快速检测。     

细胞周期检测作为生物相容性评价指标的研究

应用体外细胞培养法,观察不同质量分数羟基磷灰石浸提液对L-929细胞的细胞学形态的影响,同时采用MTT比色法评价羟基磷灰石对L-929生长和增殖的影响,流式细胞仪检测羟基磷灰石浸提液对L-929 细胞生长周期及凋亡的影响.结果表明,羟基磷灰石浸提液对体外培养的细胞形态无明显影响,对细胞生长和增殖无明显抑制作用;不同质量分数材料浸提液的细胞毒性为0～1级;随羟基磷灰石浸提液质量分数的升高,细胞凋亡率逐渐上升;50%、75%、100%羟基磷灰石浸提液组能明显降低G0/G1期细胞比例,增加S,G2/M期细胞比例,能增加L-929细胞DNA的合成,促进细胞生长和组织修复.细胞周期检测是生物材料生物相容性评价的一种可靠方法和指标.     

Modeling cavitation flow of cryogenic fluids with thermodynamic phase-change theory

Cavitation is the formation of vapor bubbles within a liquid where the flow dynamics causes the local static pressure to drop below the vapor pressure. The so-called full cavitation model (FCM) developed by Singhal has been widely used in numerical modeling of the cavitation flow for thermosensible and non-thermosensible fluids. Within the FCM, the bubble size is taken to be equivalent to the maximum possible value to forego the calculation of bubble number density. We developed a new cavitation model by re-calculating the bubble radius in FCM to account for the effects of local pressure. The new model was obtained by combining the thermodynamic phase-change theory and the Young-Laplace equation with the assumption of thermodynamic equilibrium during the cavitation process. The cavitation calculations were performed based on the mathematical framework of the homogeneous equilibrium flow model and the transport-equation-based model for vapor phase mass fraction. The model was validated by modeling the cavitating flow of liquid nitrogen and liquid hydrogen through NASA hydrofoil and Ogive with consideration of the phase-change thermal effects. The temperature and pressure distributions with the new model are found to agree well with data from existing experimental studies, as well as the simulations with the FCM.     

血管生成抑制素对体外培养的血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

为研究血管生成抑制素对体外培养的血管内皮细胞生长的影响,采用MTT法观察细胞的增殖情况,利用Hoest染色和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果发现血管生成抑制素能够抑制血管内皮细胞的增殖,其IC50为1.19 mg/L,并干扰内皮细胞的周期,出现G0/G1期阻滞。     

新型肿瘤细胞膜重组脂质体体外免疫激活作用的实验研究

将肿瘤细胞膜与人工脂质体重组,制备新型重组复合体并探索其体外免疫活性.热处理S180细胞并收集裂解细胞膜,重组于人工脂质体得重组复合体,电镜和Weston杂交鉴定重组复合体.体外培养观察该复合体对小鼠树突状细胞及淋巴细胞的影响,流式细胞仪分析CD11c,CD80,CD86等表面标志,3H-TdR掺入测定淋巴细胞增殖.设立单纯细胞膜碎片及单纯脂质体组为对照.裂解肿瘤细胞膜可以重组复合于人工脂质体,形成稳定的复合物,可刺激DC成熟,促进淋巴细胞增殖,与对照组均有显著差异(P<0.05).肿瘤细胞膜重组脂质体可以显著改善肿瘤的体外免疫原性,为快速的个体化肿瘤免疫治疗提供了新思路.     

野西瓜总皂苷诱导SGC-7901凋亡的初步研究

探讨野西瓜总皂苷诱导人胃癌SGC-7901细胞的凋亡作用.采用MTT法检测野西瓜总皂苷对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;采用荧光倒置显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;采用流式细胞术分析野西瓜总皂苷对SGC-7901细胞凋亡率的影响;采用激光共聚焦显微镜观测细胞内[Ca2+]i的变化.5、25、50、100、200和400 μg/mL的野西瓜总皂苷作用于SGC-7901细胞72 h后,野西瓜总皂苷可抑制SGC-7901细胞的增殖,其IC50为31.542 μg/mL;野西瓜总皂苷作用SGC-7901细胞40 h后,细胞出现早期凋亡细胞的形态;15、30、60 μg/mL的野西瓜总皂苷作用于SGC-7901细胞72 h后,细胞凋亡率分别为58.6%、92.298%、95.898%;15、30、60 μg/mL野西瓜总皂苷作用SGC-7901细胞24 h后,细胞内[Ca2+]i升高,并随野西瓜总皂苷给药剂量的增加而升高.野西瓜总皂苷能够促进SGC-7901细胞的凋亡,其作用机制可能与野西瓜总皂苷升高细胞内[Ca2+]i有关.     

鸡肉中盐酸硫利达嗪的高效液相色谱分析方法

为了建立鸡肉中盐酸硫利达嗪的高效液相色谱分析方法,应用高效液相色谱法连接二极管阵列检测器确定盐酸硫利达嗪最佳检测波长,样品前处理以乙酸乙酯为提取溶剂,正己烷去脂肪,氮吹浓缩,乙腈溶解,用60 mg HLB固相萃取柱净化,经0.22 μm有机滤膜过滤.色谱条件:乙腈-体积分数为0.1%甲酸溶液(体积比35∶65)为流动相,流速1 mL/min,二极管阵列检测器检测,外标法定量.结果表明:该方法在0.1~10.0 μg/mL内的线性关系良好,相关系数r²=0.999 9,检出限为1.2 μg/kg,定量限为4.0 μg/kg,回收率为88.96%~98.58%.本研究建立的鸡肉中盐酸硫利达嗪的高效液相色谱分析方法,具有精密度好、操作方便快捷、回收率高等优点,为动物源性食品中镇静剂的检测提供技术支持.     

JAK-STAT/survivin通路对过氧化氢预处理诱导的适应性细胞保护作用的影响

为了探讨H_2O_2预处理对存活素(survivin)表达的影响及JAK-STAT/survivin通路在H_2O_2预处理的适应性细胞保护中的作用,用PC12细胞建立H_2O_2预处理对抗H_2O_2诱导细胞凋亡的实验模型,应用甲氮甲哇蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst染色检测细胞凋亡的形态学改变,免疫印迹法(Western blot)测定survivin表达水平.结果显示:用100μmol/L H_2O_2预处理PC12细胞90min可明显地抑制300μmol/L H_2O_2作用12 h后引起的细胞毒性和细胞凋亡,并可以显著地促进PC12细胞survivin的表达;JAK_2抑制剂AG-490不仅可以抑制survivin的表达.而且能拮抗H_2O_2预处理的适应性细胞保护作用.研究表明,survivin是JAK-STAT通路的靶基因,JAK-STAT/survivin通路在H_2O_2预处理诱导的适应性细胞保护机制中起着重要的作用.     

赛若金对HepG2.2.15细胞株HBV复制的抑制作用

以转染有ＨＢＶ的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞株为实验模型,用ＭＴＴ法测定赛若金对２．２．１５细胞的生长抑制作用,流式细胞仪测定药物对２．２．１５细胞周期时相的改变,通过ＥＬＩＳＡ方法观察赛若金对２．２．１５细胞分泌ＨＢｅＡｇ及ＨＢｓＡｇ的影响,ＰＣＲ－Ｈｙｂ杂交法检测赛若金对２．２．１５细胞ＨＢＶ ＤＮＡ复制的抑制作用。结果显示,赛若金对转染乙肝病毒的２．２．１５细胞有生长抑制作用,抑制率随药物浓度呈