水中SaV GⅣ的提取及荧光定量PCR检出方法研究

札幌病毒(Sapovirus/SaV)是引起急性腹泻的常见病毒,水体是SaV传播的主要途径之一。由于设备和检测水平的限制,水体中病毒的检出费时费力。本文利用分子诊断学中灵敏度高的水中病毒富集技术结合荧光定量PCR方法,对水中SaV GⅣ基因型快速检测方法进行了研究。获得了一套水中病毒富集、核酸提取及分子诊断学检出方法。对比了TaqMan探针法与SYBRGreen染料法在检测中的效果。初步建立了利用水中病毒分离装置富集SaV GⅣ病毒,应用TaqMan探针法与SYBRGreen染料法两种荧光定量PCR方法快速检出SaV GⅣ的分子诊断学方法。     

大豆启动功能片段的PCR检测

启动子在基因的表达调控中起着关键作用．已克隆到大豆的启动子，并保存于质粒pBI 10l的多克隆住点(HindⅢ和BamHI间)上．根据GenBank中质粒pBI10l、pBI 12l的全序列设计引物，来扩增这一启动功能片段．阴性、阳性对照都得到预期的泳带，但目的启动子带却与阴性带相同，说明质粒中的启动子片段在保存过程中已丢失．     

实时荧光定量PCR技术在人类细小病毒B19检测中的应用

人类微小病毒B19(Human parvovirus B19,HPV B19)是儿科常见的出疹性疾病——传染性红斑(又称第五病,Erythema infection,EI)的病因.除了这一轻型自限性感染外;B19病毒还可使慢性溶血病病人发生再障危象及急性多关节病.在免疫缺损病人中可造成持续性感染.由于细小病毒B19致病的广泛性和复杂性,目前国际上对该病毒的研究比较活跃.B19可通过呼吸道传播,也可通过输血和使用血液制品传播,从而引起多种疾病.B19病毒的近期感染主要通过IgM抗体的检测,常用捕获法或放射免疫测定,IgG抗体对诊断急性感染无意义,其存在仅表明曾感染过,主要用于血清流行病学调查.目前实验室和临床检测中,最敏感检测病毒的方法是PCR法,通过对B19进行实时荧光定量PCR检测,能突破窗口期的局限性,更利于B19病毒的早期诊断和治疗.本文,笔者根据荧光定量PCR的原理建立了人类细小病毒B19的实时荧光定量PCR检测方法,经过对临床样本的检测,显示建立的方法敏感性高,特异性好,适合B19病毒的筛查和核酸定量检测.     

荧光淬灭法测定人发样中的铜

本文研究了在酸性介质中,以荧光素(Flzcorescein)为荧光试剂的荧光淬灭法测定微量铜的方法.建立了最佳测试条件,其最佳激发波长和荧光波长分别为439.7nm和510.3nm,反应的适宜酸度范围pH2.00～7.10,铜含量在0.0～0.2μg/ml范围内成直线关系,回收率为96.5％～98.3％,符合方法学的要求,用于人发中铜含量的测定与原子吸收法比较结果基本一致.     

半定量RT-PCR法检测Wee1基因在水稻胚乳发育过程中的表达模式

通过半定量RT-PCR研究Wee1基因在水稻胚乳中的表达模式．结果发现Wee1基因的表达伴随水稻种子胚乳的整个发育过程．在所检测的几个时期中,授粉后第4d（4days after pollination,4DAP）的胚乳中Wee1基因表达量最大;以后随着发育的进行,其表达量逐渐降低,直至15DAP的胚乳中仍有微弱表达．     

基于数字PCR技术的Y染色体微缺失检测方法开发

为验证数字PCR(dPCR)技术在Y染色体微缺失检测中应用的可行性,以无精子区域(Azoospermia factor,AZF)中的AZFa,AZFb及AZFc为靶标,选择特异性引物并验证其有效性,通过退火温度优化去除可能的非特异性扩增,最终通过已知缺失类型的临床样本验证检测方法的灵敏度及准确性.优化后的dPCR方法检...     

相控阵检测技术在缺陷定位、定性、定量准确性的探讨

应用相控阵、TOFD、射线和A超超声波对同一模拟试板进行检测,分析相控阵检测在缺陷定性、定位和定量的准确性。结果表明:相控阵检测在缺陷定位和定量的准确性较高,但对于缺陷定性比较困难,测缺陷自身高度时误差也比较大。研究结果有助于相控阵检测技术的推广应用,为无损检测方法的选择提供参考。     

直接PCR法在猕猴桃溃疡病检测中的建立

通过优化PCR反应体系和反应程序,本文建立了使用猕猴桃枝条为样品,直接检测猕猴桃溃疡病PSA病原菌的方法。该方法跳过了病原菌培养和DNA提取步骤,大大缩短了检测时长,利用微型PCR仪系统,使针对猕猴桃溃疡病的简单、低成本、快速现场检测成为可能。     

利用Wittig反应合成荧光增白剂DX.EB

基于Wittig反应原理,利用(邻氰基苄基)膦酸二甲酯、(对氰基苄基)膦酸二甲酯、对苯二甲醛和甲醇钠合成了荧光增白剂DX.EB,研究了合成工艺.当原料(邻氰基苄基)膦酸二甲酯∶(对氰基苄基)膦酸二甲酯=1∶1.5,40℃滴加甲醇钠时,收率为最佳,可达74.72%.     

荧光原位杂交技术的应用进展

从荧光原位杂交技术的实验方法和技术要点出发,介绍了最近几年荧光原位杂交技术在环境微生物监测、医学诊断和分子生物学研究中的应用进展.