柱层析法纯化重组人肿瘤坏死因子α及其抑癌作用

半合成人肿瘤坏死因子ＴＮＦ－α在大肠杆菌中高表达．发酵后收集菌体经超声破碎，然后在１２０００ｒ／ｍｉｎ４℃离心１０ｍｉｎ，上清经６０℃热处理３０ｍｉｎ，离心上清用６０％饱和度的硫酸铰沉淀，再依次经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—２５、ＤＥＡＥ—５２纤维素和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—７５柱层析，得到的纯化ｒｈＴＮＦ—α比活性为２×１０７ｕ／ｍｇ，回收率为２４％．经过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳和ＨＰＬＣ鉴定，纯度达９５％左右，分子量为１７×１０３．ｒｈＴＮ—α对热稳定性试验表明，—２０℃下贮存一年或者０℃下贮存一个月，ｒｈＴＮＦ—α活性仍保留５０％．人胃癌和肝癌细胞株的体外抑瘤试验和接种小鼠的活体抑瘤试验表明，本实验取得的ｒｈＴＮＦ—α具有明显的抑瘤生长作用．     

黑曲霉胞外葡萄糖淀粉酶的纯化及特性

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ７２８）的粗酶液，经硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤脱盐，ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换柱层析和ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－１００凝胶层析纯化，经ＰＡＧＥ鉴定为一条带ＳＤＳ凝胶电泳测定分子量为７００００．金属离子Ｆｅ３＋对该酶有一定的抑制作用，该酶的等电点为３．７，最适ｐＨ为４，最适温度为６０℃．Ｅ２８０１％为１５．７２，Ｋｍ值为０．１１２×１０－３ｍ．     

竹叶青（Trimeresurus stejnegeri）蛇毒

用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－５－分离竹叶青粗毒，再经ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－ＣＬ－６Ｂ、ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－５０和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００纯化，得到一个５－核苷酸酶，对血小板聚织要具有强抑制作用，在ＳＤＳ－聚丙烯酰谘电泳图谱上为一单一蛋白带，分子量为８２５００，是一个糖蛋白，含６．７％中性糖和０．７％唾液酸。     

猪凝血酶的分离纯化与鉴定

本文报导以猪血为材料，制备凝血酶，血浆在低离子强度下经等电沉淀得优球蛋白，从该沉淀中采用稀盐溶液提取，氢氧化镁吸附和二氧化碳解吸等步骤获得凝血酶原粗品。后者经脑提取液激活，再经乙醇分级、ＤＥＡＥ－纤维素与磷酸纤维素离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤，得凝血酶制品，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，制品呈单一条带，分子量约为３９ｋＤ，比活达１６１０ＮＩＨＵ／ｍｇ蛋白，以活化的粗品活性为１００％，活性回收率为４８％，纯化倍数约为１０。     

饭豆铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

饭豆种子粗提液中有６条Ｃｕ·Ｚｎ—ＳＯＤ活性谱带，经氯仿－乙醇混合液处理，硫酸铵盐析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析被分离，获得了两组ＳＯＤ同工酶组分（ＳＯＤ—１，ＳＯＤ—２）．它们在酶分子结构上可能存在一定差异．ＳＯＤ－１含与粗提液相对的、电泳迁移率较小的活性谱带，它在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）图谱上的活性染色带和蛋白染色带相互对在；在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳图谱上均呈现单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．该酶分子量为３１３００，亚基分子量为１６５００，等电点为４．２，在紫外区的吸收值为２６４．０ｎｍ．该必在０—７５℃范围内稳定．纯化的ＳＯＤ—１比活性为１７８９Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ—２比活性为２８４Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ活力回收率为３２％．     

染料脱色酶特性研究

从脱色优势菌ＮＤ１ 提取脱色酶,对酶特性进行研究．结果表明酶的最适作用条件为ｐＨ ７,３７℃,无氧环境,反应需ＮＡＤＨ 的参与;纯化结果表明经ＤＥＡＥ柱层析及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００ 凝胶层析后脱色速率分别提高１０ 倍和５０倍,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００ 凝胶层析中２～４ 管蛋白具有偶氮和蒽醌染料脱色酶活性,６～１２ 管具有蒽醌染料脱色酶活性．     

小麦巯基蛋白酶抑制剂的纯化和性质研究

将小麦麦胚和麸皮的浸取液，经加热和利用ｐＨ沉淀，获得疏基蛋白酶抑制剂粗品；再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ柱上得到均为单一蛋白带的小麦ＣＰＩ纯品。其纯化度为原料浸液的４２倍。由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＣＰＩ分子为单一肽链     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的性质

对短小芽孢杆菌ｃ１７２（ｐＢＸ９６）转化子发酵淀粉产生的碱性蛋白酶,采用硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５脱盐、ＤＥＡＥ－纤维素柱层析等方法进行纯化,并对纯化酶的性质进行了研究．结果表明,酶反应的最适ｐＨ值为１１．０;在ｐＨ８．０～１１．０之间稳定;最适反应温度为４０℃;热稳定性较好,４５℃下处理３０ｍｉｎ酶活性不变,６０℃下处理３０ｍｉｎ活力保留６５％．对甲基苯磺酰氟（ＰＭＳＦ）能完全抑制该酶活性,洗涤剂中的三聚磷酸钠对酶有较大钝化作用．     

移植瘤株冷冻保护的实验研究

本文介绍了人肝癌细胞析细胞及其移植瘤组织经冻存，复苏后检测琥珀酸脱氢酶（ＳＤＥ）活性，成瘤率和电镜检查，选择１０％ＤＭＳＯ或１０％甘油作为冷冻保护剂来冻存细胞，它们先在冰箱里缓慢降温冷却（－０．８℃／ｍｉｎ），后在液氮罐口的液氮气中冷冻（－１０℃／ｍｉｎ）１天，最后置入液氮内，冷并保护后的冻存或组织复苏后显示高的ＳＤＥ活性，１０％ＤＭＳＯ冻存的细胞ＳＤＥ活性比１０％甘油者高，两者相比有显著差别（Ｐ     

大蒜鳞茎SOD的分离纯化

利用（ＮＨ４）２ＳＯ４分级沉淀，透析后经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析和ＤＥＡＥ－３２柱层析从大蒜鳞茎中分离并纯了ＳＯＤ，最大比活为９６ｕ／ｍｇ蛋白，最高纯化倍数为４８。     

气相色谱法测定鱼油中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸含量

本文研究了甲酯化的鱼油中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸组分的气相色谱分析方法。在载气Ｎ＿２：１０ｍｌ／ｍｉｎ，柱温：１９４℃，１０％ＤＥＧＳ／ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｂＷＡＷＤＭＣＳ（８０～１００目）柱上，对二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸组分进行了实验检查。二十碳五烯酸检出限为１×１０￣（－８）ｇ；二十二碳六烯酸为１×１０￣（－７）ｇ。灵敏度、重现性较好，此方法可用于定量。并用该方法测定了鱼油中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸组分的含量。     

水牛梭形住肉孢子虫缓殖子抗原的纯化及SDS—PAGE分析

应用葡聚糖凝胶柱层纯化了水牛梭形住内孢子虫缓殖子抗原，并应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了缓殖子可溶性粗抗原及纯化抗原的蛋白组分，结果表明：缓殖子可溶性粗抗原含有１４种蛋白成分，分子量范围为４５．９－７１．２ＫＤ，经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析纯化扣的抗原在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上显示５条蛋白带，分子量分别为５８ＫＤ，６１ＫＤ，６４ＫＤ，６６ＫＤ，７０ＫＤ。     

花椰菜凝集素的纯化及部分性质的研究

花椰菜凝集素由花蕊组织经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ凝胶层析纯化获得．ＰＡＧＥ鉴定和高碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂反应均显单一条带，说明该凝集素为纯化的糖蛋白．经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱过滤分析，其相对分子质量约为９４０００．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明该凝集素含有４个亚基，其相对分子质量分别约为２８０００、２５０００、２２０００和２００００．花椰菜凝集素经５０℃处理５分钟仍保持高的凝集活性，该凝集素对酸处理较碱处理稳定．     

碱性蛋白酶Alcalase水解WGP制备ISWGPH的研究

本文采用ｐＨ－ｓｔａｔ法测定ＷＧＰ的水解度。正交实验确定了Ａｌｃａｌａｓｅ水解ＷＧＰ的最佳工艺条件为：Ｔ＝５０℃；ｐＨ－８．５；「Ｓ」＝１０％；「Ｅ／Ｓ」＝２４ＡＵ／ｋｇ蛋白质；ｔ＝３００ｍｉｎ。将ＷＧＰ水解物的Ｐ 到４．０，离 离后上清液，经活性碳处理处理和干燥后得到了等电点可溶性ＷＧＰ水解－ＩＳＧＰＨ。     

南欧紫荆（Cercis Siliquastrum L）种子中甘露聚糖酶的分离,纯化及…

南欧紫荆萌发种子的提取液，经硫酸铵分级沉淀，ＤＥＡＥ－纤维素柱层析，Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－６０和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析，得到了酶活为９８．６μ／ｍｇ的甘露聚糖酶。柱层析和聚丙烯酰胺凝胶电泳均表明其为均一性物质。南欧紫荆甘露聚糖酶由两个分子量为２万的相同亚基组成，可将以甘露聚糖为主链的多种半纤维素水解为含４￣６个单糖残基的寡糖片断。它的最适ｐＨ为５，最适温度为３７℃。Ｚｎ＾２＋对该酶活性有     

猪心肌细胞质苹果酸脱氢酶的制备

用匀浆提取，９０％硫酸铵沉淀和ＣＭ－纤维素、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｂｅｘＡ－５０、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析的方法从猪心肌中分离纯化了细胞质苹果酸脱氨酶。酶制品达到了ＩＦＣＣ规定的标准。     

短裙竹荪（Dictyophor a duplicata）多糖的研究（I）：Dd多糖的分离…

竹荪子实体经热水提取，乙醇沉淀，蛋白酶法和Ｓｅｖａｇ法相结合去蛋白，再通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００柱层析纯化，得到竹荪多糖（简称Ｄｄ）纯品，经凝胶过滤法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定表明，Ｄｄ多糖为均一的物质，Ｄｄ经紫外扫描，无核酸和蛋白质的特征吸收峰，ＩＲ－４００扫描表明典型多糖吸收峰，Ｄｄ的相对分子质量约为１９６０００。     

短裙竹荪（Dictyophora duplicata）多糖的研究（Ⅰ）──Dd多糖的分离、纯化及其部分理化性质

竹荪子实体经热水提取，乙醇沉淀，蛋白酶法和Ｓｅｖａｇ法相结合去蛋白，再通过ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析纯化，得到竹荪多糖（简称Ｄｄ）纯品。经凝胶过滤法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定表明，Ｄｄ多糖为均一的物质。Ｄｄ经紫外扫描，无核酸和蛋白质的特征吸收峰，ＩＲ－４００扫描表明有典型多糖吸收峰，Ｄｄ的相对分子质量约为１９６０００。     

中国鲎血蓝蛋白研究

应用超离心和柱层析结合聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）及电镜技术，研究中国鲎血蓝蛋白的结构特点．结果表明，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００纯化的血蓝蛋白在ＰＡＧＥ电泳中出现４条带．纯化的血蓝蛋白再经ＤＥＡＥ－３２纤维素柱层析得到５个洗脱峰，每个峰在ＰＡＧＥ电泳下可分辨出４条带．在电镜下，血蓝蛋白分子出现环形、五角形、十字形和蝴蝶结形等构型并与其他解离的中间的构型同时存在．     

牛乳脂球膜蛋白的研究

中国黑白花奶牛鲜乳及麦洼牦牛干乳期乳腺分泌物，高速离心后得到乳脂．以０．９％ＮａＣｌ振荡洗涤３次后，分别用３ｍｏｌ／ＬＫＣｌ、０．２％ＳＤＳ和５ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｔｏｎＸ－１００增溶乳脂球膜蛋白，以ＰＥＧ６０００浓缩，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离膜蛋白，结合银染色方法，获得了分子在１２～９２ｋｄ的几种膜蛋白组分。