四种伏牛山原生药用植物的抗癌活性

基于伏牛山原生药用植物白花蛇舌草、淫羊藿、鱼腥草和冬凌草在肿瘤治疗中的临床应用,研究了该四种药物对食管癌和肝癌细胞中的抑制活性。通过萃取获得药物不同浓度的乙醇提取物后,使用噻唑蓝(MTT)法测定了EC109食管癌和HepG2肝癌细胞接受不同浓度不同时间药物刺激后的生长状况。其中,淫羊藿和鱼腥草的最低IC50仅为0.18 mg/mL和0.16 mg/mL,而白花蛇舌草和冬凌草的最低IC50分别达到0.52 mg/mL和0.66 mg/mL。此研究结果首次证明:白花蛇舌草、淫羊藿、鱼腥草和冬凌草对于食管癌EC109和肝癌HepG2细胞有浓度依赖和时间相关的体外生长抑制作用,为其临床应用和进一步研究奠定基础。     

白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌HT-29细胞增殖及Hedgehog信号传导通路表达的影响

目的:观察白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌HT-29细胞增殖及Hedgehog信号传导通路表达的影响.方法:采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定空白组和不同浓度(1、3、5mg/mL)白花蛇舌草乙醇提取物组,干预24h,倒置显微镜观察细胞形态变化；MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响；RT-PCR检测药物作用后HT-29细胞Shh、Ptch、Smo和Gli-1mRNA的表达.结果:白花蛇舌草乙醇提取物干预后,能抑制HT-29细胞增殖,并呈现出量效作用；Shh、Ptch、Smo和Gli-1 mRNA 表达随药物浓度的增加而减少.结论:白花蛇舌草乙醇提取物能抑制HT-29细胞与其可抑制Shh、Ptch、Smo和Gli-1的表达有关.     

白花蛇舌草体外对人肝癌多药耐药细胞Bel-7402抗肿瘤活性的研究

目的探讨白花蛇舌草在体外对肝癌多药耐药细胞Bell-7402生长活性的抑制作用.方法 MTT法检测白花蛇舌草提取物对Bel-7402生长的抑制作用,有无逆转Bel-7402的多药耐药性;用淋巴细胞转化实验检测白花蛇舌草提取物能刺激T淋巴细胞增殖,并筛选出药物的安全剂量范围;集落形成实验观察体外抗癌药物的敏感性.结果白花蛇舌草提取物对肝癌多药耐药细胞Bel-7402的生长具有明显的抑制作用,且这种作用是剂量依赖关系.结论白花蛇舌草提取物在体外对人肝癌多药耐药细胞Be1-7402有抑制作用.     

淫羊藿生物碱对大肠杆菌的抑菌作用

以模式菌大肠杆菌为供试菌,研究淫羊藿生物碱的抑菌作用。采用二倍稀释法测定淫羊藿生物碱对大肠杆菌的最小抑菌浓度,采用牛津杯法测量抑菌圈直径。通过分析淫羊藿生物碱对大肠杆菌生长曲线、胞外和胞内可溶性蛋白量、胞外核酸量、金属离子量、菌体培养液电导率以及菌体超微结构的影响,探讨淫羊藿生物碱的抑菌机理。结果表明,淫羊藿生物碱对大肠杆菌具有较强的抑制作用,主要抑制大肠杆菌对数期的生长,最小抑菌浓度为60 mg/mL。淫羊藿生物碱处理后,大肠杆菌的胞外、胞内可溶性蛋白量显著增加,胞外K~+、Mg~(2+)离子和核酸相对量也显著升高,菌体培养液的电导率显著改变。扫描电子显微镜观察发现,淫羊藿生物碱能使大肠杆菌菌体之间相互粘连、聚团,菌体表面出现孔洞和凹陷,细胞表面严重破损。淫羊藿生物碱对大肠杆菌的抑制作用很可能与其对细胞结构的破坏有关。     

白花蛇舌草提取物体外抗肿瘤作用及机制研究

目的　研究中药白花蛇舌草提取物对Bel 7402细胞抗肿瘤作用及其作用机制.方法　采用MTT法和集落形成实验检测白花蛇舌草提取物对Bel 7402细胞生长的抑制作用;采用淋巴细胞转化实验检测白花蛇舌草提取物对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖的刺激作用,并筛选出药物的安全剂量范围;采用透射电镜初步观察药物作用后Bel 7402细胞的形态变化.结果　1)MTT比色实验、集落形成实验的结果表明,白花蛇舌草提取物对Bel 7402细胞的生长具有明显的抑制作用,且这种作用是剂量依赖关系,IC50为1.6g/L;2)透射电镜观察表明,药物作用后的Bel 7402肿瘤细胞的体积变小,核分裂像显著减少,没有明显的凋亡现象;细胞核固缩,异染色质块状聚集浓染,线粒体变大变圆,基质变淡,线粒体嵴变短变少甚至消失,在极度肿胀时,线粒体转化为小空泡状结构,并有细胞膜破损现象.结论　1)白花蛇舌草提取物可能通过直接影响肿瘤细胞能量代谢,对Bel 7402细胞生长具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖关系;2)白花蛇舌草提取物具有促进小鼠脾淋巴细胞增殖的作用.     

白花蛇舌草中多糖抑制骨肉瘤的作用机制

为探讨白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)活性成分对骨肉瘤的作用及其机制,对白花蛇舌草中分别提取的黄酮类、三萜酸类、香豆素类和多糖类化合物,用噻唑蓝(MTT)法检测不同提取物对MG-63细胞活性的影响;同时建立裸鼠骨肉瘤移植瘤模型,观察不同提取物对移植瘤生长的抑制作用;并通过流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,蛋白质免疫印记(Western blot)检测Bax及Bcl-2蛋白表达水平.结果显示:4种提取物都对MG-63细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈现明显的剂量依赖性,最优药物质量浓度为80μg/mL;在此质量浓度下4种提取物对裸鼠移植骨肉瘤均具有抑制作用,其中多糖类对MG-63细胞活性和移植瘤生长的抑制作用最强,明显促进MG-63细胞凋亡,阻滞细胞周期;Bax表达量在48h内随着白花蛇舌草多糖类提取物作用时间延长而增加,而Bcl-2表达量则降低.由上述结果可知,白花蛇舌草活性成分中多糖类的抗肿瘤活性最强,其作用机制可能是通过抑制骨肉瘤细胞增殖、促进细胞凋亡和阻滞细胞周期来达到抑瘤效果.     

扶骨黄酮分散片中葛根素、大豆苷和淫羊藿苷的含量测定

建立了扶骨黄酮分散片中的葛根素、大豆苷和淫羊藿苷含量测定的高效液相色谱法。采用Eclipse XDB-C₁₈（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈：0.3%乙酸水溶液梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,柱温为25 ℃,葛根素、大豆苷检测波长为250 nm,淫羊藿苷检测波长为270 nm。结果表明,葛根素检测浓度在0.002 08 mg/mL～0.104 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好,加样回收率为100.29%,相对标准偏差为0.89%;大豆苷检测浓度在0.000 98 mg/mL～0.039 2 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好,加样回收率为98.29%,相对标准偏差为1.29%;淫羊藿苷检测浓度在0.001 04 mg/mL～0.041 6 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好,加样回收率为99.07%,相对标准偏差为1.08%。该方法简便、准确,重现性和稳定性好,可作为扶骨黄酮分散片的质量控制标准     

三种抗癌中草药单一提剂及其组合剂抑瘤率比较研究

探讨并比较了苦参、半枝莲、白花蛇舌草的单一提剂水/醇提物及其组合剂对人结肠癌细胞株SW620生长的抑制作用.通过体外培养SW620细胞,加入终浓度分别为1、3、5mg.mL-1的单一提剂及其组合剂,采用MTT法测定药物对SW620的增殖抑制率(IR).结果表明单一提剂对SW620体外增殖均有抑制作用,且呈浓度剂量依赖性;中草药醇提剂抑瘤作用均强于水提剂.组合剂中,除半枝莲与白花蛇舌草水提组合剂比单一提剂作用弱外,其余组合剂均强于单一提剂的抑瘤率,且呈浓度剂量依赖性;中草药醇提液组合剂抑瘤作用均强于水提液.说明苦参、半枝莲、白花蛇舌草水/醇提取物对SW620细胞的生长均有抑制作用,醇提剂抗肿瘤有效成分多于水提剂;三种中草药组合剂抗肿瘤效果优于单一提剂(除半枝莲与白花蛇舌草水提组合剂外).     

淫羊藿甙对高浓度葡萄糖抑制MC3T3-E1细胞成骨分化的保护作用*

为了探讨淫羊藿甙对高浓度葡萄糖抑制MC3T3-E1细胞成骨分化是否具有保护左右,采用含10 mmol/Lβ-磷酸甘油、50 mg/L维生素C以及10~(-8)mol/L地塞米松的α-MEM培养基诱导MC3T3-E1细胞成骨分化。根据培养基葡糖糖含量不同分别设置对照组(5. 5 mol/L葡萄糖)、高糖组(22 mol/L葡萄糖)和药物干预组(22 mol/L葡萄糖)。药物干预组各组细胞换液时分别加入0. 1μmol/L、1. 0μmol/L和10μmol/L的淫羊藿甙。通过茜素红染色、钙含量检测方法检测诱导培养25 d后细胞外钙含量,使用Real time PCR检测诱导培养7 d后成骨标志分子表达,观察各组MC3T3-E1细胞的成骨分化情况。使用活性氧检测试剂盒检测诱导培养7 d后的各组MC3T3-E1细胞内自由氧(reactive oxygen species,ROS)生成水平。结果表明:22mmol/L葡萄糖组细胞钙含量最低,成骨标志分子ALP、Osteorix及Runx2表达降低,细胞内自由氧生成水平升高,MC3T3-E1细胞成骨分化受到抑制。使用不同浓度淫羊藿甙干预后,细胞钙含量升高,成骨标志分子ALP、Osteorix及Runx2表达升高,细胞内自由氧生成水平降低,MC3T3-E1细胞成骨分化抑制作用呈现浓度依赖性的减弱。可见淫羊藿甙能够通过降低细胞内自由氧水平,减弱高浓度葡萄糖对成骨细胞分化的抑制作用。     

新型植物来源生物碱——唐松草阿原碱对人体肿瘤细胞株的细胞毒性研究

研究从毛莨科唐松草属植物尖叶唐松草根部提取的新型醚键双生物碱－唐松草阿原碱对几种人体肿瘤细胞株的毒性作用。唐松草阿原碱以质量浓度从2．5μg/mL到100μg/mL作用于6种体外培养的肿瘤细胞株及2种正常细胞株,对其中4个肿瘤细胞株种表现了强烈的杀伤作用。IC50分别为：宫颈癌Hela37 μg/mL,肝癌LCC60μg/ml,胃癌MGC65μg/mL,非小细胞肺癌PLA－80182μg/mL,对2个正常细胞株的毒性分别为：肝细胞L－0265μg/mL,小鼠成纤维细胞NIH3T378μg/mL,而对另一株肝癌HepG2及乳腺癌细胞MCF－7无明显作用（IC50＞100μg/mL）。     

淫羊藿总黄酮对血管生成抑制作用的初步研究

采用醇提法提取淫羊藿总黄酮,以鸡胚绒毛尿囊膜（CAM ）为模型检测其对血管生成的抑制作用．结果表明：淫羊藿总黄酮提取得率为1．65％;0．2、0．1、0．05 mg/mL淫羊藿总黄酮处理组对CAM血管生成的抑制率分别为81．8％、54．5％和27．3％．因此,淫羊藿总黄酮对血管生成具有一定的抑制作用．     

淫羊藿保健露酒的研制及其功能评价

用热水浸提法制备淫羊藿提取液,以发酵的葡萄酒为酒基,辅以适量白砂糖和柠檬酸,研制出一种淫羊藿保健露酒.结果表明:当固液比为1∶30,浸泡1.5h,于80℃水浴4h时,淫羊藿总黄酮提取率最高;在葡萄酒中添加25.0%淫羊藿提取液、20.0%白砂糖和0.1%柠檬酸时,淫羊藿保健露酒的感官品质最好;淫羊藿保健露酒中总黄酮、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C质量浓度分别为297.08、16.64、18.57、25.23、7.89mg/L;与普通葡萄酒相比,淫羊藿保健露酒的抗氧化活性更强.该生产工艺所得淫羊藿保健露酒兼具优良的感官品质及较好的保健功能.     

淫羊藿对大鼠内脏器官PDC钙通道及其心肌缺血性损伤的影响

目的：研究淫羊藿不同提取方法对大鼠主要内脏器官^45Ca内流、外溢的作用规律及对大鼠心肌缺血性损伤的影响．方法：用^45Ca跨膜测量技术研究淫羊藿不同提取物对大鼠心脏、动脉平滑肌、肝、肾脏等4种器官电压依赖钙通道(PDC)的作用特性；用大孔树脂分离、鉴定淫羊藿的有效成分．结果：1．淫羊藿对心脏、动脉平滑肌、肾脏等3种器官^45Ca跨膜流动的影响作用极显著，既能阻滞^45Ca大量内流，又能促进已流入细胞中的^45Ca外溢；2．淫羊藿的碱提组对内脏器官钙通道的调控作用优于醇提组和水提组．3．淫羊藿提取物对药物和结扎冠状动脉所致大鼠心肌缺血性损伤均有保护作用．结论：淫羊藿对多种内脏器官钙通道有较强的调控能力，对维持细胞内Ca^2 浓度的稳定和细胞的正常生理功能具有重要意义；淫羊藿对大鼠心肌缺血性桶伤具有明显的保护作用。     

Silibinin induces apoptosis in human hepatoma HepG2 cells and enhances its chemo-sensitivity

目的:探讨水飞蓟宾诱导人肝癌HepG2细胞凋亡并提高5-FU、顺铂的敏感性.方法:采用MTT法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的水飞蓟宾对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258染色法检测水飞蓟宾作用于人肝癌HepG2细胞后其细胞核形态的改变;Western blotting检测凋亡相关蛋白(Caspase-3,Caspase-9)的表达;采用水飞蓟宾联合5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP),观察对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用.结果:MTT法检测显示,水飞蓟宾对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制作用,并随着水飞蓟宾浓度的增大而增强,作用于肝癌HepG2细胞48h的IC50为195.38 μmol/L;克隆形成抑制实验表明随着水飞蓟宾药物浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与对照组相比有显著差异;其细胞核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化;存在Caspase-3和Caspase-9蛋白的活化和降解;150 μmol/L的水飞蓟宾与不同质量浓度的化疗药物(5-FU,DDP)联合作用于HepG2细胞48h,可提高HepG2细胞对这些化疗药物的敏感性,增敏倍数分别为39.63和21.54倍.结论:水飞蓟宾通过诱导人肝癌HepG2细胞凋亡抑制细胞增殖,并提高HepG2细胞对5-FU,DDP的敏感性.     

白凤菜总黄酮对肝癌HepG2细胞生长、增殖和凋亡的影响

研究了白凤菜(Gynura formosana Kitam.)总黄酮(TFG)对肝癌HepG2细胞的生长、增殖和凋亡的影响.噻唑兰(MTT)实验结果表明TFG对HepG2细胞体外增殖的抑制作用有浓度和时间依赖效应:处理24h后130和260μg/mL TFG实验组的HepG2细胞凋亡率均显著升高,分别达到(47.00±1.31)%和(76.39±1.39)%(p0.05);24h的半抑制质量浓度(IC50)为190.80μg/mL.实验组HepG2细胞周期阻滞在S期,细胞迁移率随TFG质量浓度的升高而下降,细胞内活性氧(ROS)水平最终显著下降至对照组的6.9%(p0.05),细胞中Bax表达量略微上调而Bcl-2表达量明显下调.综上,TFG抑制肝癌HepG2细胞增殖和诱导HepG2细胞凋亡的机制可能与下调细胞ROS水平、重构细胞内还原体系、上调促凋亡蛋白Bax以及下调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达相关.     

一株具抗肿瘤活性的红树林细菌筛选及成分分离

为从红树林微生物中分离抗肿瘤活性物质,从泉州湾红树土壤中分离、纯化和筛选能产生抗肿瘤活性物质的细菌,并利用16S rDNA序列比对方法进行分子鉴定.采用追踪分离的方式,以稻瘟霉分生孢子抑制强度和肿瘤细胞体外抑制活性为指标,对细菌发酵液抗肿瘤活性成分进行初步分离.实验结果显示,从泉州湾红树林土壤中分离出1株具有较强抗肿瘤活性的细菌,经鉴定为Vibrio fluvialis. Vibrio fluvialis发酵液能抑制稻瘟霉分生孢子萌发时菌丝形变,并抑制EC9706食管癌细胞和H22肝癌细胞生长.从Vibrio fluvialis发酵液分离出具有较强抗肿瘤活性的化学组分Ⅰ和组分Ⅱ.组分Ⅰ对EC9706食管癌细胞和H22肝癌细胞ρIC50分别为0. 18 mg·m L~(-1)和0. 26 mg·m L~(-1),组分Ⅱ对EC9706食管癌细胞和H22肝癌细胞ρIC50分别为0. 17 mg·m L~(-1)和0. 22 mg·m L~(-1).表明Vibrio fluvialis能产生抗肿瘤活性物质,具有重要抗肿瘤研发价值.     

利用斑马鱼模型评价氨基葡萄糖盐酸盐及淫羊藿的促进骨骼矿化作用

探讨基于斑马鱼模型的不同浓度的氨基葡萄糖盐酸盐及淫羊藿提取物的促进骨骼矿化活性。选用发育正常的72 hpf斑马鱼胚胎,以培养水为溶剂对照,各受试组分别加入不同浓度（1、10和100 μg/mL）的氨基葡萄糖盐酸盐溶液或淫羊藿提取物溶液,连续培养4 d后,用体积分数为0.2 %钙黄绿素染色1 h,在体式荧光显微镜下观察斑马鱼骨骼发育情况,拍照并用图像分析软件计算骨骼染色面积。与对照组相比,各受试组对斑马鱼骨骼矿化均呈现一定程度的促进作用,且呈现明显的剂量依赖性。氨基葡萄糖盐酸及淫羊藿提取物均具有较好的促进斑马鱼骨骼矿化的活性。相同浓度条件下,氨基葡萄糖盐酸盐较淫羊藿提取物具有更好的促进骨骼矿化活性。     

肿瘤细胞ECA109和PC12对二甲基亚枫耐受剂量的分析

通过观察不同剂量二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)作用下ECA109和PC12细胞形态和生长状态的变化,确定该溶剂对上述两种肿瘤细胞的相对安全剂量。按照一定浓度梯度(V/V)将DMSO加入培养液,干预后的24 h、48 h和72 h于倒置相差显微镜下观察AO/EB染色前后细胞的形态特征;同时用四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法检测细胞的生存率并计算半数抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)。结果:ECA109细胞和PC12细胞对DMSO的耐受性明显不同,DMSO的浓度为8 mL/L时,24 h内ECA109细胞生长正常,形态完整,活力与对照组无差别,浓度为10 mL/L时,细胞生存率可下降10%。对PC12而言,DMSO浓度不高于14 mL/L时,对细胞的形态和生长几乎没有影响;浓度提高到20 mL/L时,24 h时细胞生存率可下降27%。结论:PC12细胞对DMSO的耐受性高于ECA109;ECA109细胞24 h内的应用终浓度不应超过10 mL/L,PC12细胞DMSO的应用浓度可提高到14 mL/L;干预时间如需延长,DMSO的加入剂量应相应降低。     

佛甲草中细胞毒活性成分的研究

采用中压柱色谱和制备高效液相色谱法对中国传统民族药佛甲草(Sedum lineare Thunb)的甲醇提取物化学成分进行分离,从中分离得到6个化合物.首次对化合物山奈酚7-O-6″-O-丙二酸单酰-D-吡喃葡萄糖苷(1)的波谱数据进行了归属,用MTT法测试6个单体成分对人肝癌细胞株HepG2和Hep3B的抑制作用.结果显示6个化合物均对HepG2和Hep3B细胞表现出抗肿瘤活性,并且IC50值在22.6～91.5 μg/mL之间,在浓度大于100 μg/mL时也没有表现出对人正常肝细胞L－02的抑制作用.相比于黄酮类化合物1、2,苯丙酸类化合物3～6(IC50＝22.6～44.3 μg/mL)对HepG2和Hep3B细胞表现出更强的抑制作用.其中,顺式苯丙酸类化合物5对HepG2和Hep3B细胞的抑制作用最明显.其IC50值范围在22.6～28.2 μg/mL,能明显抑制人肝癌细胞的增殖,诱导其凋亡.     

HPLC法测定脑灵片中淫羊藿苷的含量

采用高效液相色谱法测定脑灵片中主要成分淫羊藿苷的含量,色谱条件如下：Shim-pack VP-ODS（150 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,乙腈-0.4%磷酸（28∶72）;流速：1.0 mL/min;检测波长：270 nm;外标法计算含量.试验结果表明：淫羊藿苷在0.0054～0.027mg/mL的浓度范围内呈良好的线性关系,回归方程为y=1136.757x-2003.3（r=0.9999）;平均回收率为96.95%（RSD=1.09%）,系统精密度RSD为0.061%（n=5）.方法简便可靠、快速,经10批样品检测,重现性好,适合于脑灵片中淫羊藿苷含量的测定.