一株耐盐性酵母的原生质体化及再生条件的优化研究

对一株耐盐性酵母Zygosaccharomyces rouxii的原生质体化及再生条件进行了实验研究.结果表明:用0.5 mg/mL(10 unit/mL)细胞壁溶解酶zymolyase20T在1.0~1.5 mol/L山梨糖醇渗透压调节剂的浓度范围内,原生质体化率可达99%以上,再生率在2%~11%之间,而且用磷酸钾缓冲液比用Tris-HCl缓冲液再生率高.在山梨糖醇浓度1.5 mol/L,zymolyase20T浓度0.5 mg/mL,磷酸钾缓冲液0.1 mol/L(pH6.0)时,30℃、60 min,再生率达30%以上.     

草菇凝集素提取研究

分别以生理盐水、醋酸溶液和磷酸缓冲液对草菇子实体中凝集素进行抽提,并辅以超声波处理提取草菇凝集素.结果显示:当不使用超声波处理时,以5%的醋酸溶液提取的效果最佳,其提取液的兔红细胞凝集效价为256;当辅以超声波处理(450 W)时,以磷酸缓冲液(0.02 mol/L,pH=7.2)为抽提剂,超声波处理时间30 min的效果最佳,其提取液的兔红细胞凝集效价为1 024.     

DEAE-Sepharose CL-6B离子交换色谱分离αs酪蛋白的研究

本文建立了酪蛋白中主要组分αs酪蛋白离子交换色谱分离的方法.结果表明,用Z系列φ1.0×40cm色谱柱,DEAE-Sepharose CL-6B为离子交换介质,以含3mol/L尿素,0.1%β-巯基乙醇,pH值为8.0的50mmol/L的tris-HCl缓冲液为平衡液,用含不同浓度NaCl的平衡液进行洗脱,流速为2mL/min,在280nm紫外检测波长下检测,当NaCl浓度为0.3mol/L时洗脱得到αs-酪蛋白,其纯度可达100%.此方法可高效快速的分离出αs酪蛋白,为酪蛋白组分进一步分离及αs酪蛋白相关的功能性食品的开发奠定了基础.     

青枯雷尔氏菌HPLC分析中色谱分离条件的研究

研究了在青枯雷尔氏菌的高效离子交换色谱(HPLC)分析中,不同色谱分离条件对分离效果的影响.建立了在室温下分离青枯雷尔氏菌的最佳色谱条件:采用Toyopearl SuperQ-650C强阴离子交换树脂、0.02mol/L哌嗪-HCl缓冲液(pH 8.0)、洗脱盐浓度为1 mol/L NaCl、洗脱梯度0~75%/30 min、流速1 mL/min.在该色谱条件下,可获得良好分离的3个青枯雷尔氏菌色谱峰.     

白鲫鱼C-反应蛋白提取条件的优化

探讨了白鲫(Carassius auratus cuvieri)C反应蛋白(CRP)亲和层析法提取过程中,不同的硫酸铵饱和浓度、缓冲液pH值、缓冲液离子强度和配基浓度下对白鲫CRP的提取效率的影响.结果发现,在硫酸铵饱和浓度80%,缓冲液pH值8.5,缓冲液离子强度为0.05 mol/LTris以及配基浓度为8 μmol/mL介质的条件下,白鲫CRP的提取效率最高.     

白鲫鱼C-反应蛋白提取条件的优化

探讨了白鲫（Carassius auratus cuvieri）C反应蛋白（CRP）亲和层析法提取过程中,不同的硫酸铵饱和浓度、缓冲液pH值、缓冲液离子强度和配基浓度下对白鲫CRP的提取效率的影响.结果发现,在硫酸铵饱和浓度80%,缓冲液pH值8.5,缓冲液离子强度为0.05 mol/LTris以及配基浓度为8μmol/mL介质的条件下,白鲫CRP的提取效率最高.     

CdTe量子点荧光猝灭法测定铜离子的研究

以巯基乙酸为稳定剂,在水溶液中一步合成了CdTe量子点.以该量子点为荧光探针,基于荧光猝灭法对Cu2+离子进行了定量检测.考察了缓冲体系、缓冲液浓度、缓冲液pH值、反应时间、量子点浓度等多种因素的影响,在0.033mol/L、pH值为5.91的磷酸二氢钾磷酸氢二钠缓冲液中,当量子点浓度为3.8×10-4mol/L、反应时间为30min时,该方法的线性区间为2～200μg/L,检测下限为0.29μg/L.具体解释了量子点荧光猝灭,是由于价带电子激发到导带以后被表面结合的Cu2+离子捕获而产生的结果,并利用光解实验进一步验证了这一机理.     

RP-HPLC法分离测定发酵液中的交沙霉素

采用RP-HPLC法测定发酵液中交沙霉素的含量.以C18为固定相;以甲醇-0.02 mol/L KH2PO4溶液(80∶20)为流动相,用1 mol/L的磷酸调节pH值为3,检测波长232 nm,在进样10μL、交沙霉素含量为31.25~800μg/mL范围内,交沙霉素峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9966),测试样品(n=6)RSD为0.45%,平均回收率为99.18%(n=6),RSD=0.49%.在该色谱条件下,采用RP-HPLC法能将交沙霉素与发酵液中的杂质组分实现良好分离.     

CdTe量子点荧光猝灭法测定尼群地平的研究

以L-半胱氨酸为稳定剂,在水溶液中合成了CdTe量子点.以该量子点为荧光探针,基于荧光猝灭法对尼群地平进行了定量检测.考察了缓冲体系、缓冲液浓度、缓冲液pH值、反应时间、量子点浓度等多种因素的影响,并对反应机理进行了初步的探讨.在0.03 mol/L、pH值为5.78的Tris-HCl缓冲液中,当量子点浓度为5.72×10-4mol/L、反应时间为10 min时,该方法的线性范围为0.38~77μg/mL,检出限为0.28μg/mL.该方法已成功用于药片中尼群地平的测定,与中国药典中的标准方法比较,结果满意.     

利用离子交换法分离草酸青霉发酵液中的三峡肽素

三峡肽素是草酸青霉(Penicillum oxalicum)发酵液中的一种线性五肽,对柑橘类水果的采后致腐菌有强烈的抑制作用,是一种潜在的水果保鲜剂.实验室主要通过发酵液醇沉淀、旋蒸浓缩、液相制备等方法进行小规模分离.为了提高三峡肽素的大规模分离能力,利用732强酸性苯乙烯阳离子交换树脂和D201大孔强碱性阴离子交换树脂对其进行了分离,探索了分离条件,优化了工艺参数,并分析了分离收率.结果表明：离子交换法可有效分离三峡肽素,阳离子交换树脂的最佳上样pH值为3.2,洗脱pH值为9,洗脱盐氯化钠的浓度为0.5 mol/L,收率可达88.42%,且色素和残糖含量较低.阴离子型树脂的收率略高,可达92.92%,其最佳分离条件为上样pH值为10,洗脱pH值为4,洗脱盐浓度为0.1 mol/L,但是去色素和残糖的能力及脱盐效率要弱于阳离子型树脂.     

液相色谱法测定大鼠血清中IgG的研究

目的建立一种用于测定大鼠血清中IgG的液相色谱法。方法根据被分析物质的性质,以HI-Trap Protein G柱为分离柱,以磷酸盐缓冲液和甘氨酸盐酸缓冲液为流动相,采用梯度洗脱方式,选择0.8mL/min流速,检测波长为280nm。结果浓度在0.5～1.5mg/mL浓度范围内IgG与峰面积呈良好的线性关系,以信噪比为10计算最低检测浓度为0.31mg/mL,平均回收率为90.5%。结论试验结果表明该方法可行,快速简便,准确可靠。     

葡聚糖凝胶过滤层析分离低聚半乳糖

采用葡聚糖凝胶Sephadex G-25柱对低聚半乳糖混合物进行了分离提纯,确定了适宜的洗脱流速和温度。结果表明,操作温度70℃,洗脱流速20mL/h,凝胶柱90cm×1cm,当进料量由1mL增至10mL,低聚半乳糖（GOS,三糖及三糖以上的低聚糖组分）的产量提高了4.62倍,整个洗脱过程只需4.1h,可以有效地去除葡萄糖,得到纯度为85.03%的含少量乳糖的GOS混合物。此混合物经过二次上柱后,分离效果明显优于一次上柱,得到的GOS质量分数达89.39%。     

含硫树脂的制备及在谷胱甘肽分离中的应用

利用大孔苯乙烯树脂改性合成含硫树脂,考察了修饰条件对谷胱甘肽吸附的影响。并对其在谷胱甘肽分离中的应用进行了研究。结果表明采用pH3.0的缓冲液进行吸附,自制的含硫树脂最大吸附容量可达22mg/g湿树脂,选择质量浓度为0.5%的NaOH溶液洗脱GSH,解吸率可达70%以上。采用真实发酵液进行分离纯化,收率为35%,纯度可达90%以上。     

阴离子交换树脂分离卡那霉素A、B组分的研究

根据吸附色层分离原理 ,利用阴离子交换树脂分离卡那霉素A、B组分 ,研究了不同树脂类型、不同树脂粒径及不同洗脱条件 (洗脱液NH4 OH浓度、洗脱流速、上柱量 )对分离效果的影响 .以含卡那霉素B 2 0 %的结晶母液为原料 ,通过试验确定了分离提取高纯度的卡那霉素B组分的最佳工艺条件为 :洗脱剂NH4 OH体积分数为 0 .6 % ,洗脱流速 0 .5mL/min ,树脂粒径为 0 .2 0mm ,上柱量为 1.0 5 μg/mL(树脂 ) .     

基质固相分散-毛细管电泳法测定柚果皮中柚皮苷的质量浓度

以硅藻土为分散剂, 甲醇为洗脱剂, 采用基质固相分散-毛细管电泳法测定柚果皮中的柚皮苷, 并考察分散剂种类和用量、 洗脱剂种类和用量及柚果皮样品和硅藻土的质量比对测定结果的影响. 结果表明: 柚皮苷的加标回收率为79.2%; 检测限为1.5 μg/mL.     

聚己内酰胺分离纯化缩宫素粗品研究

通过考察在不同乙腈浓度等度洗脱条件下,缩宫素在聚酰胺色谱柱上的保留,研究了聚酰胺对缩宫素的分离机理,建立并优化了聚酰胺对缩宫素粗品的粗分离方法,并与反相C18分离效果进行对比.缩宫素在聚酰胺色谱柱上的保留呈现典型的氢键吸附和疏水作用吸附共同作用的混合吸附模式;在优化的纯水等度洗脱分离缩宫素粗品的条件下,样品栽量可达9.38 mg/mL介质,纯度可达65.8%,回收率72.1%.研究结果表明,聚酰胺纯水等度洗脱分离缩宫素粗品有着与传统反相C18分离基本相当的效果,与反相C18相比还有着样品栽量高、经济、安全和环保等优点.     

急性脑梗死患者血清LPO、SOD和GSH-Px含量的改变和临床意义

探讨脑梗死患者体内自由基含量的改变及其与脑缺血损伤的关系,为临床治疗提供一定的理论依据。我们对２７例急性脑梗死患者血清ＬＰＯ、ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ进行测定,并与对照组进行比较,结果显示病人组ＬＰＯ含量和ＬＰＯ／ＳＯＤ比值明显高于对照组,ＳＯＤ含量明显低于对照组,ＧＳＨ－Ｐｘ含量和ＬＰＯ／ＧＳＨ比值与对照组无显著差异,提示自由基反应参与脑缺血损伤过程。     

反相高效液相色谱法分离三联吡啶衍生物

采用反相高效液相色谱法对五种三联吡啶衍生物的混合物进行了分离。采用Symmetry C18分析柱(3.9mm i.d.×150mm,5μm),甲醇-水作为流动相,利用紫外检测器在280 nm处对各物质进行分离检测。当流动相组成为甲醇-水(8∶2),流速为0.8 mL/min时,各物质在15 min内均可以得到基线分离。五种三联吡啶衍生物在浓度为0.1～400μg/mL时线性关系良好,回归系数均大于0.9993,各组分相对标准偏差小于2.2%。     

未澄清酵母均化液中 L-天门冬氨酸酶的分离——疏水膨胀床直接吸附法(英文)

研究了用疏水膨胀床直接从未澄清酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）均化液中分离Ｌ－天门冬氨酸酶的过程．吸附和冲洗采用膨胀床模式,而酶的洗提采用沉降床模式．在适当的疏水条件下,膨胀床中的疏水吸附剂（ＴｓｋｇｅｌＰｈｅｎｙｌ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｃ）可从未澄清均化液中直接捕集分离Ｌ－天门冬氨酸酶．通过梯度洗提,一次膨胀床吸附过程中,酶活的洗脱率为９５％,均化液中酶的总回收率为６５％,洗脱液纯度为１３倍．本方法将膨胀床和疏水性吸附的特长有机地结合起来,是生物活性蛋白酶分离纯化的一个重要手段．     

从苦豆子中分离纯化苦参碱和槐定碱的工艺研究

运用稀酸水法从苦豆子种子中提取生物碱,最佳提取条件为料液比1∶30,pH 1.5,提取时间5h。使用大孔树脂吸附法对提取的生物碱进行纯化,考察了SP850、SP825、SP700、SP207、AB-8等5种树脂的吸附效果,其中SP850型树脂吸附量和解析量均最大,分别为27.4mg/mL和20.4mg/mL。测定了体积分数为50%、60%、70%的乙醇洗脱效果,确定了60%乙醇为最佳洗脱浓度,洗脱体积为6倍柱体积。经氯仿萃取和旋转蒸发,得到纯度达83.5%的生物碱粗产品。运用硅胶柱层析技术从生物碱粗品中分离生物碱单体,考察了氯仿-甲醇-氨水系统,正己烷-乙醇-氨水系统,丙酮-甲醇-氨水系统在硅胶薄层色谱上对生物碱的分离效果,确定以V_正己烷∶V_乙醇∶V_氨水=8∶2∶0.1作为流动相。收集洗脱液,经过结晶和重结晶,得到苦参碱和槐定碱晶体。经检测,苦参碱纯度为98.3%,槐定碱纯度达96.8%。