基于纳米探针和石墨烯电极技术的ATP生物发光检测系统

由细菌引起的食品安全问题越来越受到人们的重视,使得快速细菌检测技术成为一个重要课题.设计了一种基于纳米探针技术、石墨烯透明电极(GTE)技术和三磷酸腺苷(ATP)发光技术的生物检测系统,能够快速准确地检测食品中的细菌.实验结果表明该方法与传统检测方法具有很好的相关性,线性相关度可达0.972,检测时间控制在20min内.检测范围在102-106 CFU/mL.此外通过检测不同污染物测得该系统具有令人满意的性能.可以满足现场快速检测的要求.     

一种采用微波炉加热快速提取细菌DNA用于PCR扩增的方法

利用微波加热原理,探索一种快速、简单、高效提取细菌DNA用于常规PCR快速检测的方法.在微波炉额定功率800 W条件下分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌以及志贺氏菌6种常见食源性病原菌进行微波处理,离心取上清,获取细菌DNA,将样本DNA进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳进行验证.并进一步采用微波加热方法针对6种病原菌最低检出浓度和混合提取6种病原菌DNA的PCR检测进行分析.6种病原菌在微波炉中加热40-130 s的上清DNA样本均能用于常规PCR扩增.针对检出浓度的分析表明,副溶血弧菌的最低检出浓度为103cfu/ml,金黄色葡萄球菌为104cfu/ml,肠出血性大肠杆菌为105cfu/ml,肠炎沙门氏菌和福氏志贺氏菌的最低检出浓度为106cfu/ml,针对单核细胞增生李斯特氏杆菌的的最低检出浓度为107cfu/ml.进行6种混合菌微波共提取时,其中5种病原菌的特异性基因都能扩出,并且条带很亮.该微波提取方法具有快速,简单,高效的特点,能满足大部分食源性病原菌的常规PCR检测需求,大大节约了时间和成本,具有广泛的适用性,为细菌快速分子检测提供了简便手段.     

基于石墨烯场效应管的无标记大肠杆菌快速检测方法

食源性细菌检测方法是食品安全的的重要课题,该文提出了一种新的细菌检测方法——基于石墨烯场效应管电化学生物传感器的大肠杆菌快速检测方法.在该方法中,采用化学气相沉积的方法获得石墨烯,之后利用抗原抗体特异性结合原则捕获大肠杆菌,通过检测石墨烯在大肠杆菌掺杂后的电学特性变化来表征大肠杆菌浓度.该文设计的系统有较好的稳定性(CV=6.98%)和较低的信噪比(6.8%).经过实验测试,系统的检测范围为10-107 cfu/ml,最低检测限为10CFU/ml(R=0.94).检测过程控制在30min以内完成,可以实现现场实时检测.     

大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析快速检测法的建立

建立一种大肠杆菌O157∶H7的胶体金免疫层析快速筛查方法.利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157∶H7,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析.该法能在10 min内完成检测;该试纸条仅与O157∶H7阳性样品发生特异性反应;大肠杆菌O157∶H7的最低检出浓度为1×105 cfu/mL.新建立的大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查.     

一种利用微波炉加热快速提取细菌DNA用于PCR扩增的方法

利用微波加热原理,探索一种快速、简单、高效提取细菌DNA用于常规PCR快速检测的方法。在微波炉额定功率800 W条件下分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌以及志贺氏菌6种常见食源性病原菌进行微波处理,离心取上清,获取细菌DNA,将样本DNA进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳进行验证。并进一步采用微波加热方法针对6种病原菌最低检出浓度和混合提取6种病原菌DNA的PCR检测进行分析。6种病原菌在微波炉中加热40-130 s的上清DNA样本均能用于常规PCR扩增。针对检出浓度的分析表明,副溶血弧菌的最低检出浓度为103 cfu/ml,金黄色葡萄球菌为104 cfu/ml,肠出血性大肠杆菌为105 cfu/ml,肠炎沙门氏菌和福氏志贺氏菌的最低检出浓度为106 cfu/ml,针对单核细胞增生李斯特氏杆菌的的最低检出浓度为107 cfu/ml。进行6种混合菌微波共提取时,其中5种病原菌的特异性基因都能扩出,并且条带很亮。该微波提取方法具有快速,简单,高效的特点,能满足大部分食源性病原菌的常规PCR检测需求,大大节约了时间和成本,具有广泛的适用性,为细菌快速分子检测提供了简便手段。     

液体电极沿面放电高效灭活大肠杆菌

利用液体电极沿面放电等离子体反应器,对大肠杆菌的灭活效果进行了研究.考察了曝气量、初始含菌量和初始pH值等因素对大肠杆菌的存活细菌群落总数(cfu)的影响.实验结果表明:大肠杆菌的存活细菌群落数随初始含菌量、处理时间的增加而减少.弱碱性条件有利于大肠杆菌的灭活.反应系统中,曝气量对大肠杆菌灭活效果影响很大.在曝气量为4.5 L/min,电源频率7 kHz,电压6 kV条件下,500 mL初始含菌量为107cfu/mL的大肠杆菌菌液,放电处理5 min,可将全部大肠杆菌杀灭.本研究为液体电极沿面放电反应器在细菌灭活方面的应用提供参考.     

快速测定特定水体中细菌总数的微波破壁水解-荧光衍生法

建立了一种快速测定特定水体中细菌总数的化学方法.利用微波辐射能,破坏细菌细胞壁并辅助水解蛋白质成为氨基酸,而后用荧光胺(FLA)衍生,测定衍生物的荧光强度,进而推算细菌总数.细菌微波破壁水解的最佳实验条件为:水解液中HCl浓度4 mol/L、微波功率400 W、辐射时间10 min.最佳衍生条件为:pH值2.0～2.2,3 mL试液中加入10-3 mol/L FLA溶液1.0 mL(FLA与氨基酸的分子比高于1301)、衍生温度4℃.方法的测定相对标准偏差为3.64%(n=6),对于大肠杆菌菌液样品,本文所建立的化学方法与标准方法的测定结果无显著性差异.本法可望开发成特定水体样品中细菌总数的快速测定法.     

快速测定特定水体中细菌总数的微波破壁水解-荧光衍生法

建立了一种快速测定特定水体中细菌总数的化学方法.利用微波辐射能,破坏细菌细胞壁并辅助水解蛋白质成为氨基酸,而后用荧光胺（FLA）衍生,测定衍生物的荧光强度,进而推算细菌总数.细菌微波破壁水解的最佳实验条件为：水解液中HCl浓度4 mol/L、微波功率400 W、辐射时间10 min.最佳衍生条件为：pH值2.0～2.2,3 mL试液中加入10-3mol/L FLA溶液1.0 mL（FLA与氨基酸的分子比高于130：1）、衍生温度4℃.方法的测定相对标准偏差为3.64%（n=6）,对于大肠杆菌菌液样品,本文所建立的化学方法与标准方法的测定结果无显著性差异.本法可望开发成特定水体样品中细菌总数的快速测定法.     

连续式处理室中橙汁的PEF非热处理

以橙汁为对象,采用自行研制的方波脉冲电源与连续式处理室进行PEF杀菌研究.通过对连续式处理室结构的优化,缓解处理过程中气泡引发的放电现象,减少处理过程中因放电引发的不良影响,为实验室设备连续工作提供必要的保证.试验结果表明,经过PEF处理(12.5 kV/cm, 340 μs)后的橙汁中的细菌菌落数由2 200 cfu /mL下降到20 cfu/mL,酵母与霉菌的菌落数由1 500 cfu/mL下降到10 cfu/mL.处理后的橙汁在0 ℃低温贮藏20 d后,仍未发现微生物的明显增长,而且发现PEF处理的橙汁色泽、香气和口感均明显优于传统的瞬态热处理方法(90 ℃,15 s).     

絮凝-ClO2消毒氧化法处理洗浴废水

利用絮凝-ClO2消毒氧化法对洗浴废水进行了以回用为目的的实验研究.结果表明,对于浊度为20 度、CODCr 320 mg/L、细菌总数3 600个/mL、大肠杆菌350个/mL的每吨废水,当絮凝剂(本文所用为一复合絮凝剂)用量为250 g、ClO2用量20 g,在适当的反应条件下,可使处理后水的浊度达到1.7 度、CODCr 17.5 mg/L、细菌总数<100个/mL、大肠杆菌<3个/L,能够达到回用的要求.同时对此工艺进行了经济效益分析.     

用FISH技术对土壤中大肠杆菌的快速特异性检出

通过10种大肠杆菌探针灵敏度检测和采用9种大肠杆菌及其近缘菌菌株对探针的特异性检测结果表明,ES445作为大肠杆菌的探针灵敏度高,特异性好.进一步在土壤中加入大肠杆菌进行实验室验证,证明应用FISH技术能够快速、准确地检测出土壤中的大肠杆菌.利用这个方法,可以期待迅速有效地检出土壤环境中的各种病原微生物.     

天津海河流域水体及自来水细菌检测及分析

利用平板菌落计数法和多管发酵法检测天津海河流域水体和自来水中的细菌总数、总大肠杆菌群及粪大肠菌数,以期对天津海河流域水体微生物污染状况进行分析。结果表明,在1mL的天津自来水水样中总菌数小于1,没有检测出大肠杆菌和粪大肠菌,符合《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2005)的规定。对海河水的检测结果为大肠杆菌平均70 000个/L,超出III类水标准,粪大肠菌平均700个/L,属于II类水标准。粪大肠菌群的存在可认为河水直接或间接的受到了比较近期的人或动物粪便污染,应引起人们的重视。     

红檵木幼叶的水和醇水提取物抑菌活性分析

用蒸馏水和20%乙醇经微波辅助处理提取红檵木幼叶成分,对该水和醇水的提取物进行浓缩或萃取精制,采用牛津杯法测定水和醇水提取物样液对3种细菌的抑制效果,并用平板稀释法测定其最小抑菌浓度.幼叶水提取液对3种细菌都有明显的抑制作用,抑菌圈较大,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌的最小抑菌生药质量浓度分别为 0.014,0.010,0.010 g/mL;幼叶的醇提取液对大肠杆菌的抑制效果不明显,对金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌有较强抑制作用,其最小抑菌生药质量浓度分别为0.011,0.014 g/mL.     

固相微萃取技术检测环境水体中酞酸酯

提出了固相微萃取-气相色谱质谱(solid phase microextraction-gas chromatography mass spectrometry, SPME-GC/MS)检测水体中 6 种酞酸酯(phthalate esters, PAEs)的分析方法, 对影响固相微萃取的萃取因素如萃取纤维、 萃取时间、 萃取温度、 pH 值进行了探讨和优化. 结果显示, 该方法检测限为 3.7∼8.5 ng/L, 在 20∼500 ng/L 范围内线性相关系数 r²> 0.991, 加标回收率为 83%∼112%, 相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为 1.1%∼12.3%. 该方法简单、 快速, 定性、 定量准确可靠且灵敏度高, 适用于环境水体中酞酸酯的检测.     

艾叶中异泽兰黄素的含量测定

建立一种检测艾叶中异泽兰黄素的方法.方法:采用乙腈-磷酸缓冲盐(40∶60)为流动相,检测波长350nm,流速1.0 mL/min,柱温25℃.以甲醇为异泽兰黄素的提取溶剂.结果异泽兰黄素线性范围为0.5～3.0μg/mL,添加回收率97.57%～100.21%,RSD为1.01%.结论:该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好,能准确检测艾叶中异泽兰黄素.     

胭脂红酸ELISA检测试剂盒的制备及应用

为了快速高效检测肉类食品中胭脂红酸含量,制备了胭脂红酸ELISA检测试剂盒,检测了市售肉类样品中胭脂红酸含量,并通过高效液相色谱法进行了验证。结果显示试剂盒的检测限为1 ng/mL,线性范围7. 8～1 150 ng/mL,灵敏度IC50值为95. 2 ng/mL;该试剂盒中的检测抗体对胭脂红的交叉反应率为108. 7%,但与其他4种色素添加剂均未见交叉反应。检测市售肉类样品的批内回收率在79. 1%～103. 1%之间,批间回收率在81. 6%～98. 8%之间;批内、批间试验的相对标准偏差基本小于10%,且与HPLC方法具有良好的一致性(R2=0. 927),说明该试剂盒具有灵敏、准确、简便、快速的特点,为胭脂红酸免疫学快速检测方法的建立提供了技术基础。     

贝类生态综合养殖系统中细菌丰度的变化

2011年4—10月在福建云霄,对以贝类为主的生态综合养殖系统内的藻类池（A池）和贝类池（B池）逐月采样检测,并分析两池水体及B池沉积物中细菌丰度的时空变化规律.结果发现:水体中细菌丰度,B池为1.01×106～4.35×106 cell/mL;A池为1.09×106～6.61×106 cell/mL.A池和B池水体中细菌丰度没有明显的月变化规律,但昼夜变化明显.B池水体中细菌丰度与叶绿素a、总氮、总磷、温度和盐度的关系4—7月呈明显的正相关(r=0.984,n=4);8月细菌丰度急剧下降,因采样期间有连续降雨,细菌丰度变化和降雨可能有一定的关系.A池水体中细菌丰度与叶绿素a呈显著负相关（r=-0.821,n=7）,与温度呈显著负相关（r=-0.830,n=7）,温度不是影响A池细菌增殖的主要因子.B池底泥样品中细菌丰度比水体中的低,主要可能是水交换和养殖贝类活动共同作用的结果.采样期间发现,在阴雨天气时池塘水面会有泡沫漂浮,细菌丰度高于其所在水体达2.25×107 cell/mL,其作用机制有待于进一步研究     

博物馆恒温恒湿展厅空气细菌检测及人员暴露量分析

目的检测博物馆展厅内的细菌浓度,确定影响细菌滋生的主要因素并预测参观人员的暴露量.避免博物馆参观人员受空气中细菌污染.方法通过采集、培养和计数对两间恒温恒湿博物馆展厅内的空气进行细菌检测,运用Crystal Ball软件对两个展厅中参观人员暴露于细菌中的暴露量进行蒙特卡罗模拟预测.结果展厅A、展厅B空气中细菌的平均浓度分别为558.52 cfu/m~3和567.7 cfu/m~3;蒙特卡洛模拟得出在相同的参观时间内,青、中年男性平均暴露量为345.22 cfu,青、中年女性平均暴露量为260.44 cfu,未成年人平均暴露量为225.24 cfu,呈现依次递减状态.两间恒温恒湿博物馆展厅空气中细菌菌落数符合《室内空气质量标准》(GB/T18883—2002)要求.结论适宜的温度和湿度有助于细菌的滋生繁殖,湿度对细菌的浓度影响更大;人员暴露量与呼吸速率强度之间呈现典型的正相关性,通过计算人员暴露量可以有效评估博物馆室内空气品质.     

分离测定化妆品中维生素C、维生素C葡萄糖苷和曲酸的流动注射——毛细管电泳方法

采用流动注射与毛细管电泳联用体系,建立了一种简单、快速、准确的测定化妆品中维生素C、维生索C葡萄糖苷及曲酸的新方法.实验所用的毛细管长度为30 cm(有效长度26.5 cm),检测波长为265 nm,运行缓冲溶液为20 mmol/L NaH2PO4(pH 7.10),运行电压10.0 kV.在此最佳条件卞,3种物质可在5 min内实现基线分离,样品的进样频率可达到30 h-1,3种物质的线性方程相关系数均大于0.9991.检测限(信噪比为3)分别为:维生素C 3.14ug/mL,维生素C葡萄糖苷2.67ug/mL,曲酸1.15ug/mL.方法的日内与日间的相对标准偏差均小于5.0%.该方法已用于市售化妆品中3种组分的含量测定,回收率在93.7%-104.1%之间,结果令人满意.     

北豆根生物碱抑菌作用的微量量热法研究

从中药北豆根中提取北豆根生物碱.应用微量量热仪分别测定了不同浓度的北豆根生物碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌代谢作用的热功率—时间曲线,运用Logistic方程计算出细菌的生长速率常数,建立了生长速率常数与药物浓度间的关系,进而确定了最佳抑菌浓度.北豆根生物碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌的最佳抑菌浓度分别为0.7977mg/mL、0.2089mg/mL、0.1129mg/mL.通过对三个最佳抑菌浓度数据的比较,可知北豆根生物碱对三种细菌抑制效果为:枯草杆菌金黄色葡萄球菌大肠杆菌.