离体细胞的培养条件

细胞培养是细胞学研究的基本方法之一。离体细胞在体外培养时对外界条件要求很高，培养条件的微小改变会严重影响细胞的正常生长。在两种哺乳动物细胞培养的基础上，讨论了培养液中若干因素对细胞生长的影响。     

促生长激素样免疫活性细胞和生长抑素受体在文昌鱼(Branchiostoma belcheri)神经系统和哈氏窝的分布

用免疫组织化学与双标记染色技术对文昌鱼神经系统和哈氏窝进行生长激素(GH)和生长抑素受体(SSTR)免疫组织化学定位.研究结果显示,神经系统和哈氏窝均存在生长激素样免疫活性神经细胞和内分泌细胞及生长抑素3种亚型受体,且脑泡GH样免疫活性神经细胞和哈氏窝GH样细胞均与3种亚型生长抑素受体共存.这些结果证明了文昌鱼可能建立类似脊椎动物原始的抑制哈氏窝分泌生长激素的调控系统,为哈氏窝内分泌学及其进化提供了新的证据.     

紫外线辐射坛紫菜离体细胞的初步试验

报道紫外线辐射离体培养的坛紫菜叶状体细胞，对细胞存活率，分裂和发育再生情况进行观察的结果。试验显示，坛紫菜离体细胞对紫外线辐射比较敏感，试验中使用的各种紫外线辐射量对离体细胞都有伤害致死作用，随着辐射量加大，细胞存活率下降，紫外线辐射还具有抑制细胞分裂，诱发与增加再生苗形态变异的作用。根据试验结果，认为紫外线是一种有效的诱变因子，还讨论诱变处理方法及适宜的辐射量。     

肝细胞原代培养研究综述

对国内外肝细胞培养研究作出综述.首先介绍了分离肝细胞的各种方法及各自的优缺点, 重点对各种酶分离技术进行了比较.其次阐述了肝细胞的纯化方法和生物学性状检测,最后综述了 影响肝细胞体外培养的因素.     

文昌鱼体表粘液凝集素的初步研究

文昌鱼体表粘液经卵粘蛋白 -Sepharose 6B亲和层析法分离出一种凝集素 (AmphioxusMucusLectin ,简称AML) .该凝集素能凝集兔及人的红血细胞 ,无血型专一性 ;其凝血活性不依赖于Ca2 和Mg2 ,在 pH6-1 0范围较稳定 ,经 60℃保温 1 0min活性则完全消失 ;SDS PAGE测得其亚基分子量为93 0 0 0 ;含糖量为 2 6% .文昌鱼凝集素在文昌鱼的免疫防卫中可能起着重要作用 .     

辣椒离体细胞多倍体的诱导研究

以辣椒的下胚轴为外植体，在MS＋6－BA 2．0mg/L IAA 1.0mg/L培养基中诱导出愈伤组织。用加入秋水仙碱的培养基和液体浸泡两种方法处理愈伤组织，进行离体细胞多倍体诱导。结果表明：将加入秋水仙碱的培养基法优于液体浸泡法，秋水仙碱浓度为1000mg/L，处理时间为4d时，其加倍效果最好，加倍率达80％。染色体数目鉴定表明：四倍体染色体数目是2n=4x=48，而二倍体染色体数目是2n=2x=24。     

厚荚相思离体培养的初步研究

作者用厚荚相思（Acacia crassicapa)种子获得的无菌苗进行离体培养。结果表明：采用改良的MS 6-BA 0.5-2.0mg/L NAA 0.1-0.2mg/L培养基均能诱导芽的分化和增殖，其中以改良的MS＋6－BA1.5mg/L NAA0.1mg/L为最适宜的培养基。培养30d后，芽繁殖系数可达到4.0。以1／2MS IBA0.5-1.0mg/L培养基培养20d后，生根率可达83.0%以上。生根苗的移栽基质以蛭石较好。     

栉孔扇贝（chlamys farreri）外套膜组织原代培养的初步研究

以栉孔扇贝（ｃｈｌａｍｙｓ ｆａｒｒｅｒｉ）外套灰材料,要用几种除菌方法进行菌处理后应用自己设计的培养基对其进行了原代培养。实验结果表明,以青霉素、链霉素和复方洗必泰混合溶液除菌,对组织损伤小,除菌彻底。在此培养条件下,栉孔扇贝外套膜细胞能正常迂出和生长。     

补骨脂离体培养研究

本文利用补骨脂的嫩茎、叶柄和叶片为外植体进行离体培养,均获得成功。其中以嫩茎培养的效果最好。培养基中附加成分对芽和根分化的影响较大,Ms基本培养基附加IBA 0.5、6—BA1(单位均为mg/l)时,芽的分化率最高;1/2Ms基本培养基附加IBA0.5时,根的诱导效果较好。大部分试管苗可移栽成活。     

鹿茸组织和细胞原代培养和继代培养研究

本文对鹿茸皮肤及肉质部分组织块的培养及继代培养方法、从鹿茸各组织中分离细胞的方法及分离细胞的原代培养和继代培养进行了研究。由鹿茸皮肤细胞建立的细胞系已在体外培养了近四个月,传至第三十代,由鹿茸的肉质部分建立的细胞系已在体外传了二十几代。传代工作仍在继续。     

成年小鼠成纤维细胞体外培养

成年小鼠皮肤成纤维细胞可从尾部取材用组织块培养法进行原代培养,添加血清的M 199(E arle′s)和低糖的DM EM均能较好的满足原代细胞的生长.两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异.用0.25%胰蛋白酶消化小鼠尾尖原代培养物,上皮细胞与成纤维细胞有明显的敏感度差别.经控温控时消化传代,可将上皮细胞与成纤维细胞分离纯化.     

低浓度镉、锌暴露对白氏文昌鱼的毒性累积及其几种重要酶活性的影响

采用亚慢性毒性实验研究了镉、锌对白氏文昌鱼(Branch iostoma belcheri)(简称文昌鱼)的毒性累积效应及体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性、磷酸酶活性及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的影响,探讨了亚致死浓度镉、锌胁迫下文昌鱼的生理生化响应.研究结果表明,镉和锌对文昌鱼的96 h半致死浓度(LG0)分别为4,60和2.26 mg/L,相比之下锌对文昌鱼的毒性更大.实验采用理论上的镊、锌安全浓度(1/10 96 h LC50)对文昌鱼进行7d的亚慢性暴露,随着暴露时间的推移,镉在文昌鱼体内呈线性增加,而锌的含量则与对照组无显著性差异,表明文昌鱼对锌的调节能力大于镉.7d亚慢性毒性实验表明文昌鱼体内的AChE活性随着金属暴露时间的延长持续下降,至第7天时镉和锌对AChE活性的抑制率分别达65％和79％;脂质过氧化产物MDA水平在金属暴露初期即达到极显著水平,随后稍有下降且镉对文昌鱼体内活性氧的诱导作用大于锌;SOD活性在暴露中期受到显著抑制,可能是由于体内过氧化程度过高抑制其活性,之后逐渐恢复.文昌鱼体内的碱性磷酸酶(AKP)活性在镉或锌暴露的第1天被显著诱导,之后恢复至对照水平;酸性磷酸酶(ACP)活性随镉暴露时间延长,呈现先升高再下降的趋势,而锌对ACP活性无显著影响.实验结果表明即使是很低浓度的镉、锌都会对文昌鱼的神经系统及抗氧化等防御系统造成一定的损伤.     

胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养

目的:探讨胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养条件.方法:采用胶原酶消化19d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化肺成纤维细胞后采用加胎牛血清的DMEM培养液,进行细胞培养.用波形蛋白免疫细胞化学染色对所分离的细胞进行鉴定.结果:细胞培养24h后有一定量细胞贴壁,48h后贴壁细胞开始生长.结论:该实验方法可以成功地培养大鼠胚胎肺成纤维细胞.     

Localization and expression of LHβmRNA in the brain and Hatschek's pit of amphioxus, Branchiostoma belcheri

To determine whether gonadotropin-like substance in the brain and Hatschek' s pit of amphioxus issynthesized by the tissue in situ or transported from other tissue, a histochemical study was carried out by in situ hy- bridization using digoxigenin (DIG)-labelled LHβRNAprobes. The results showed that LHβmRNA expressed in the nerve cells of brain and the epithelial cells of Hatschek' s pit, thus providing new evidence for the homology of pituitary of ver- tebrates with Hatschek' s pit and the functional evolution of gonadotropin.     

文昌鱼碱性磷酸酶赖氨酸基团的研究

关于文昌鱼碱性磷酸酶(AKP)的基本性质及功能基团等,本实验室作了系统的研究,判定1个色氨酸残基为酶活性中心所必需,赖氨酸残基(Lys)是AKP活性必需基团之一,而每分子AKP上含有36个Lys。在此基础上,采用化学修饰剂对Lys基团进行定量研究,并探讨其它功能基团的性质,为酶的结构与功能关系提供进一步的信息。     

树鼩角膜内皮细胞体外原代培养方法的建立

摘要: 目的 建立树鼩角膜内皮细胞( corneal endothelial cells,CECs) 体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料。方法 通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代 CECs 取材方法的优劣性。分别使用 DMEM /F12,M199,Ham’s F12 /M199 三种培养液以确定树鼩 CECs 原代细胞最适培养液。使用 TGF-β 抑制剂、低血清培养法及梯度消化法来探讨树鼩 CECs 纯化的可行性。苏木精-伊红染色观察细胞形态,根据树鼩神经元烯醇化酶( NES) 设计并筛选特异性引物,使用 PCＲ 方法检测细胞 NES 表达情况并用 NES 抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定。结果 揭膜法可以快速、有效得到高纯度的树鼩 CECs 细胞。Ham’s F12 /M199 培养液是树鼩 CECs 的最适培养液。使用 TGF-β 抑制剂可以达到 CECs 的纯化目的。结论 优化的树鼩 CECs 细胞培养纯化方法对树鼩 CECs 的体外培养更适宜,优化条件下分离培养的细胞符合 CECs 的一般特征。     

Immunolocalization of aromatase, estrogen and estrogen receptor α and β in the epithelium of digestive tract and enteric neurons of amphioxus (Branchiostoma belcheri )

Immunohistochemical localization of aromatase, estrogen and estrogen receptor in the digestive tract and enteric neurons of amphioxus is investigated. It was found that immunoreactive proteins of aromatase, estrogen and ER-α and β are expressed in hepatic diverticulum, epithelial cells of anterior and posterior region of midgut, as well as in enteric neurons, while hindgut showed immunonegative. The results suggest that digestive tract of amphioxus may be able to synthesize estrogen and possess endocrine function, like rat gastric epithelium and enteric neurons in mammals. The present study provides authentic morphological evidence for explaining the action mechanism of estrogen in regulating the digestive function of gut and the functional evolution of estrogen, which has important theoretical significance in amphioxus.     

Distribution of growth hormone-like immunoreactive cells and somatostatin receptors in the nervous system and Hatschek''''s pit of amphioxus, Branchiostoma belcheri

Using immunohistochemical method and double staining technique, the localization of growth hormone (GH) and somatostatin receptors in the nervous system and Hatschek's pit of amphioxus has been investigated. The results showed that the growth hormone-like nerve cells and endocrine cells as well as three subtypes of somatostatin receptors exist in the nervous system and Hatschek s pit, and GH-like nerve cells and endocrine cells co-exist with three subtypes of somatostatin receptors in the brain vesicle and Hatschek s pit. It is suggested that a primitive control system of inhibitory growth hormone secretion in Hatschek s pit could have been developed in amphioxus, as in vertebrates. The present study provides new evidence for the endocrinology and the evolution of Hatschek's pit.     

小鼠精原干细胞的体外培养与鉴定

建立一种简单、有效体外分离和培养精原干细胞（Spermatogonia stem cell,SSCs）的方法。采用酶消化6—8d新生小鼠睾丸制备睾丸细胞悬液后进行培养,碱性磷酸酶（AKP）染色和间接免疫荧光对培养的细胞进行鉴定;结果显示：SSCs培养3～5天可观察到细胞克隆的产生,AKP染色强阳性;间接免疫荧光显示GCNF阴性,oct-4、c—kit均呈阳性反应。由此可知以DMEM＋15％胎牛血清＋白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）＋L-谷氨酰胺等为培养基,成功建立了精原干细胞的体外培养体系。