α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中的应用研究

论述了α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产发酵过程中的形成机理及应用。实验表明：采用在发酵过程中添加α-乙酰乳酸脱羧酶控制双乙酰含量能收到较为明显的效果。     

啤酒发酵过程理化指标变化规律研究

研究啤酒发酵过程中酵母数、双乙酰、pH、还原糖、α-氨基氮、酒精度和发酵度的变化规律。结果发现:酵母数量与双乙酰含量在发酵的前三天快速上升,进而急剧下降,后期下降趋缓;还原糖和α-氨基氮在发酵前期被快速消耗,中后期消耗缓慢;pH值发酵初期会有明显下降,随后趋于稳定;酒精度前期上升幅度较大,随后平稳。试验结果表明啤酒发酵过程中主要理化指标的变化是有一定规律的,对啤酒实际生产有指导意义。     

α—乙酰乳酸脱羧酶产生菌的筛选

为降低啤酒生产中双乙酰的含量,从不同土壤中分离出１２４株芽孢杆菌,经过用不同发酵培养基和啤酒中双乙酰降低试验,反复筛选,得到一株初产α－乙酰乳酸脱羟酶活性较高的地衣芽孢杆菌Ｈ６（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ Ｈ６）。认为该菌株所产酶对啤酒生产有应用价值。     

蔗汁生产啤酒发酵特性的研究

论述了在100L啤酒生产设备上,分别用大米与蔗汁为辅料生产啤酒的对照试验,通过考察两种辅料所得麦汁的主要成分,对两种麦汁的外观发酵度、可发酵浸出物、酵母利用还原糖和α-氨基氮的情况、酒精生成量及双乙酰等发酵参数进行研究.结果表明,酵母在添加蔗汁辅料的麦汁中能正常发酵,所得啤酒的各项理化指标均符合国家标准GB4927.     

优良的啤酒酿造酵母菌株JW1-3的选育及其中试

啤酒酵母菌种的优劣在啤酒酿造生产中起着至关重要的作用.为了获得优良的啤酒酿造酵母菌株,试验用半导体激光诱变处理啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株XB05,在含双乙酰的麦芽汁琼脂平板上分离抗双乙酰的突变株,然后用三角瓶在低温下发酵,以发酵液的发酵度、双乙酰、乙醛和总高级醇的含量为筛选指标,结果得到一株发酵特性优良的菌株JW1-3.菌株JW1-3以9°Bx麦芽汁为培养基,用500 L发酵罐在12℃下发酵13 d,发酵液的发酵度为67.8%,发酵液中的双乙酰、乙醛和总高级醇的含量分别为0.039 4、4.81和60.2 mg/L.菌株JW1-3的主要发酵特性优良且稳定,啤酒口感良好.该菌株在啤酒生产中具有很好的应用前景.     

低产双乙酰的啤酒酵母菌株ZT21-9-2的筛选及其ILV2基因的分析

为了获得低产双乙酰的菌株,从保藏的啤酒工业酵母菌种中分离甲磺隆(SM)抗性自发突变株,经低温发酵测定发酵液的发酵度和双乙酰等啤酒风味物质的含量,结果得到ZT21-9-2等5株优良的SM抗性株.其中SM抗性株ZT21-9-2用500 L发酵罐发酵8 d,发酵液的发酵度为68.4%,发酵液的双乙酰、总高级醇和乙酸的含量分别为0.036 3、79.53和74.90 mg/L,该菌株具有很好的应用前景.为了探讨致使乙酰乳酸合成酶(ALS)编码基因ILV2突变而使ALS结构改变的关键碱基,为构建低产双乙酰的啤酒酵母工程菌提供依据,作者比较了SM抗性株ZT21-9-2及其亲株EY2-1的ILV2基因的DNA序列,结果发现SM抗性株ZT21-9-2共有6个碱基发生了转换,1个碱基发生了颠换.     

天然抗氧剂植酸应用于啤酒酿造工艺的研究

植酸是一种天然抗氧剂和发酵促进剂.通过论述植酸应用与啤酒酿造工艺的作用原理,并对啤酒酿造工艺中的各种操作条件进行了选择.在发酵中添加5.0×10-5g/L的植酸,可缩短主发酵时间12h,缩短双乙酰还原时间达48h以上;在生产过程中添加植酸可促进酵母活化,提高发酵产率,并且有利于除去有害金属离子和高分子蛋白质,提高啤酒的透明度;在成品酒中添加3.5×10-5g/L的植酸可以延长啤酒的保鲜期至60d.     

上面发酵和下面发酵小麦啤酒发酵过程的差别研究

为了比较上面发酵型和下面发酵型小麦啤酒发酵过程的变化差别,在100L啤酒设备上对两种啤酒发酵过程中影响啤酒品质的各个理化指标进行了跟踪比较研究.结果表明:在整个发酵过程中,上面发酵法的总酸含量和双乙酰峰值高于下面发酵法;α-氨基氮含量和pH值总体低于下面发酵法;两种发酵工艺的酒精度以及糖度值的差别较小,所有指标的测定值都在正常范围之内.     

Y－3~＃啤酒菌株快速发酵工业性试验结果

经诱变、筛选而得的Ｙ－３＃啤酒菌株，其小试、中试结果良好。为验证此菌株是否适应大生产，笔者进行了大生产试验，结果表明Ｙ－３＃啤酒菌株对扩大生产适应性强，具有发酵温度高、降糖快、还原双乙酰能力强，酵母凝集性好，发酵周期短，生产的啤酒品质优越等特点，有着良好的推广前景。     

Y—3^#啤酒菌株快速发酵工业性试验结果

经诱变、筛选而得的Ｙ－３＾＃啤酒菌株，其小试，中试结果良好，为验证此菌株是否适应大生产。笔者进行了大生产试验，结果表明Ｙ－３＾＃啤酒菌株对扩大生产适应性强，具有发酵温度高，降糖快、还原双乙酰能力强，酵母凝集性好，发酵周期短，生产的啤酒品质优越等优点，有着良好的推广前景。     

ALDC产生菌BD-5菌株的发酵条件初探

本文主要以2#培养基为基础，对BD－5菌株的产酶发酵条件做了初步探讨。通过对其葡萄糖、酵母膏、pH值及金属离子等不同用量的研究使α-乙酰乳酸脱羧酶的酶活力提高4～5倍。     

高密度培养基因工程大肠杆菌生产α-乙酰乳酸脱羧酶

在 30 0 0 L 发酵罐中 ,利用分批补料培养技术高密度培养含分泌型重组质粒 p ETGAU- 10的大肠杆菌TG1,生产α-乙酰乳酸脱羧酶。通过控制发酵条件 ,发酵液的细胞密度 (OD60 0 )可达 30 .5 ,且胞外α-乙酰乳酸脱羧酶活力最高达 890 U .ml- 1 ,达到较为理想的工业化生产的要求。     

α-乙酰乳酸脱羧酶的提取条件与应用研究

从ＢＤ－５菌株中提取α－乙酰乳酸脱羧酶，为提高酶的得率，探讨了破壁方法、除杂蛋白、硫酸铵沉淀提取粗酶等的条件，以及提取过程中酶的损失情况和菌体存放时间对酶活力的影响等。结果表明：该菌株的菌体用超声波破壁、５０％饱和度硫酸铵除杂蛋白，８０％饱和度硫酸铵提取粗酶效果较好，菌体存放时间过长，酶活力明显降低。将用该菌株提取的酶应用于啤酒发酵中，证明有明显的降低双乙酰的效果。     

地衣芽孢杆菌高α-乙酰乳酸脱羧酶活力菌株的筛选

以从土壤中分离出的9株地衣芽孢杆菌为源菌株,通过α-乙酰乳酸脱羧酶活力实验发现BL-4的产酶活性最好,通过UV和NTG对BL4进行复合诱变,获得了一株产酶活性比出发菌株BL-4高1.22倍的α-乙酰乳酸脱羧酶高产菌株,并研究了该菌株的最佳发酵产酶条件是培养温度30℃、发酵时间36 h、发酵液起始pH 6.5。     

地衣芽孢相菌高α—乙酰乳酸脱羧酶活力菌株的筛选

以从土壤中分离出的9株地衣芽孢杆菌为源菌株，通过α-乙酰乳酸脱羧酶活力实验发现BL-4的产酶活性最好，通过UV和NTG对BL-4进行复合诱变，获得了一株产酶活性比出发菌株BL-4高1.22倍的α- 乙酰乳酸脱羧酶高产菌株，并研究了该菌株的最佳发酵产酶条件是培养温度30℃，发酵时间36h，发酵液起始pH6.5。     

啤酒酵母原生质体融合株HN31-6的啤酒酿造中试研究

为了考察啤酒酵母融合株HN31-6的啤酒酿造生产性能,以12.5°Bx麦芽汁为培养基,用500 L发酵罐在12℃下发酵,发酵期间每天取样测定发酵液的发酵度和酒精度以及发酵液的双乙酰、乙醛、高级醇和酯类等挥发性物质的含量.结果表明:在上述条件下,发酵14 d,发酵液的发酵度和酒精度分别为69.9%和4.46%;双乙酰和乙醛的含量分别为0.036 4 mg/L和4.53 mg/L;异戊醇、异丁醇和正丙醇的含量分别为46.47、8.34和9.82 mg/L,总高级醇的含量为64.6mg/L;甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯和己酸乙酯的含量分别为0.132、21.92、0.037、2.22和0.293 mg/L,总酯为24.6 mg/L;该菌株的发酵度以及发酵液的酒精、双乙酰、乙醛、总高级醇和一些酯类等的含量均达到国家优质啤酒的标准,啤酒口感良好.该融合株在啤酒酿造生产中具有很好的应用前景.     

论啤酒发酵过程中导致酵母死亡及自溶的环境因素

在啤酒酿造过程中,酵母是魔术师,它把麦芽和大米中的糖分发酵成啤酒,产生酒精、二氧化碳和其他微量发酵产物。但是在酵母发酵过程中异存在着导致酵母死亡与自溶的环境因素,在发酵过程中需特别注意对环境因素的控制。     

葡萄酒苹果酸-乳酸发酵层析分析方法的研究

苹果酸是葡萄浆果的主要酸类之一,它在苹果酸 乳酸发酵(MLF)过程中逐渐消失,大部分红葡萄酒和少数白葡萄酒工艺中的苹果酸 乳酸发酵是一种严格的生物脱酸方法。若MLF能顺利完成则可显著改善葡萄酒的质量,使之更为柔和,同时可获得葡萄酒的生物稳定性。层析分析可以监测到MLF是否触发,还可直接观测到苹果酸 乳酵的变化,确知苹果酸是否消失。葡萄酒在经过苹果酸 乳酸发酵后有如下变化:1)酒的总酸下降;2)葡萄酒中细菌的稳定性增强;3)主要副产物双乙酰等给予葡萄酒以良好的风味。在层析分析过程中,纸张的厚薄经常影响点样次数和观察效果,…     

激光诱变株啤酒酿造酵母JY2-2的选育及其中试

用He-Ne激光辐照诱变啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)XB05,分离抗双乙酰的菌株,通过三角瓶发酵筛选,得到几株优良的菌株,其中菌株JY2-2用500 mL三角瓶装300 mL 12.5°Bx麦芽汁在12℃下发酵8 d,发酵液的发酵度为66%,双乙酰、乙醛和总高级醇的含量分别为0.079 0、7.43和87.22 mg/L.以12°Bx麦芽汁为培养基用500 L发酵罐发酵,发酵7 d发酵液的发酵度为68.8%,双乙酰、乙醛和总高级醇的含量分别为0.034 4、5.12和70.6 mg/L.啤酒口感纯正清爽,突变株JY2-2的主要发酵特性稳定,具有很好的应用前景.     

地衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheni formis）AS10106α－乙酰乳酸脱酸酶经硫酸沉淀，聚乙二醇沉淀，DEAE－Sepharose Fast Flow离子交换，Gigapite K-100S柱层及SephadexG－100分子凝胶过滤柱等分离纯化步骤，得到SDS－PAGE电泳纯，α－乙酰乳酸脱羧酶的比活提高了53．5倍。对该酶性质的研究表明，酶单亚基分子量为32Kda，等电点为4．5；该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH为6．0，对热（40℃以上）敏感。在pH5．0－6．5之间稳定。酶活不需要金属阳离子，Cu^2 、Co^2 强烈抑制酶的活性。摇瓶实验表明，纯化的地衣芽孢杆菌α－乙酰乳酸脱羧酶能明显降低双乙酰的形成并缩短其还原时间。