lat基因的失活在提高棒状链霉菌棒酸产量中的应用

利用lat基因突变的重组质粒pKCLHS对紫外诱变的克拉维酸（Clavulanic acid）高产菌株Streptomyces clavuligerusB71—14的胁基因进行了插入失活，对获得的基因突变子进行了PCR验证、菌体生长测定、发酵特征测定，并对发酵液申的克拉维酸进行了初步提取和含量测定．结果表明，突变菌株的lat基因申插入了含有阿泊拉抗性的基因片段，突变菌株的生长速度与原始菌株无明显变化，甜突变菌株的克拉维酸产量最高能达到其原始菌株的1，11～1．29倍，产头霉素C的能力显著降低．     

应用原生质体融合技术选育克拉维酸高产菌株

采用棒状链霉菌种内原生质体融合技术,选育克拉维酸高产菌株.该实验选用舒巴坦钠耐受性高产菌株Streptomyces clavuligerus B71-3-10和甘油耐受性高产菌株Streptomyces clavuligerus B71-14为亲株,优化了原生质体制备条件和融合条件,最终得到遗传稳定性良好的融合子F14.该融合子的克拉维酸产量提高到650.35 mg/L,分别比亲株S.clavuligerus B71-3-10和S.clavuligerus B17-14的克拉维酸产量高36.77%和20.84%.将原生质体融合技术应用到棒状链霉菌克拉维酸高产菌株的选育中,证明了其可行性、高效性及成效显著性.     

铜绿假单胞菌中新型的β内酰胺酶介导的羧苄青霉素抗性

为了探究铜绿假单胞菌抗羧苄青霉素的机制,通过基因敲除以及克拉维酸钾和羧苄青霉素协同实验对羧苄青霉素抗性菌株进行研究。在对羧苄青霉素具有抗性的转座突变体基础上敲除amp C后,其对羧苄青霉素抗性没有变化;8株羧苄青霉素抗性转座突变体菌株克拉维酸钾协同实验呈阳性。基因组中预测为β内酰胺酶的PA5514基因的敲除突变菌株及过表达菌株对氨苄青霉素以及羧苄青霉素的敏感性也没有变化。结果说明amp C及PA5514表达升高并不是羧苄青霉素抗性转座突变体抗性产生的原因,基因组中存在新的受克拉维酸钾抑制的β内酰胺酶可能是铜绿假单胞菌抗羧苄青霉素的一种新机制。同时,克拉维酸钾与羧苄青霉素联合使用能够提高羧苄青霉素对铜绿假单胞菌抗性菌株的治疗效果。     

克拉维酸高产菌的选育

在克拉维酸高产菌的选育过程中,应用解除终产物结构类似物作为选择压力,能有效地除去低效价菌株,提高高产菌株的检出率,较传统筛选法优越.试验表明,以带棒链霉菌Strep tomycesclavuligerusCCRC11518(效价为382.4×10-6g/mL)为出发菌,经紫外线诱变,筛选到一株抗20×10-3g/mL的舒巴坦钠突变株my51,my51菌株产克拉维酸的效价达到834.7×10-6g/mL,比出发菌提高了1.18倍.该菌株连续传代7代,克拉维酸的效价保持稳定.     

甘草次酸的薄层扫描测定

用薄层色谱技术分离甘草提取液中成分后，再用扫描先密度法对甘草次酸进行定量测定。     

葡萄糖酸镁热分析研究

用热重法（ＴＧ）、差热分析法（ＤＴＡ）研究了固体葡萄糖酸镁的热降解反应，定量测定表明此葡萄糖酸镁含二分子结晶水，用Ｏｚａｗａ和Ｋｉｓｓｉｎｇｅｒ方程计算了脱此结晶水的动力学参数（活化能），未见其有熔点峰。     

高效液相色谱法测定阿莫西林克拉维酸钾咀嚼片中的有关物质

采用高效液相色谱法测定阿莫西林克拉维酸钾咀嚼片中的有关物质,参照阿莫西林克拉维酸钾片质量标准中的有关物质项的测定方法进行研究,色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相A为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液,流动相B为0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液,检测波长230 nm.先以流动相A—流动相B(98∶2)等度洗脱,待阿莫西林洗脱完毕后立即进行线性梯度洗脱.实验结果显示,本方法简便、快速、准确,可有效控制相关物质质量.     

钢中酸溶铝和全铝的光谱测定

研究了利用原子发射光谱仪定量测定中低合金钢中的酸溶铝和全铝的方法，对测定铝的条件，分析样品制备，校准曲线拟合等问题进行了讨论。本方法全铝的分析范围0．001％－1．00％。     

无机盐MgCl2和微量金属离子Zn2+对克拉维酸产量的影响

对本实验室UV诱变获得的棒状链霉菌Streptomyces clavuligerus B71-14在优化培养基配方的基础上,考察不同微量金属离子对克拉维酸发酵产量的影响,确定Zn2 对其发酵产量有比较明显的促进作用.进一步考察不同添加浓度MgCl2和Zn2 对克拉维酸合成趋势的影响,确定在本实验发酵培养基中MgCl2和Zn2 的最佳添加量分别为1.5 g/L和0.05 g/L最佳添加浓度,并在最适添加浓度下考察其对发酵代谢过程参数的影响,其最高产量与不添加相比分别提高了45.76%和63.10%.     

铜绿假单胞菌耐药性探讨

目的探讨临床铜绿假单胞菌耐药情况.方法对160株临床分离的铜绿假单胞菌进行15种药物敏感试验,用MH平板采用WHO推荐的K-B法.结果氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸耐药率在95%以上;头孢三嗪、头孢噻肟、替卡西林/克拉维酸、庆大霉素、哌拉西林、氧氟沙星等耐药率在40%～60%;哌拉西林/三唑巴坦、氨曲南、环丙沙星等耐药率在30%左右,阿米卡星、亚胺培南、头孢他啶等耐药率在20%以下.结论铜绿假单胞菌对氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸完全耐药,对碳氢酶烯类药物亚胺培南(11.9%)、头孢他啶(13.8%)耐药率最低;氨基甙类中的阿米卡星(20.1%)和环丙沙星(30%)耐药率相对较低.临床上宜选择耐药率＜20的药物;对耐药率在40%～60%的药物慎用;耐药率＞70%的药物最好不用.     

铜绿假单胞菌耐药性探讨

目的探讨临床铜绿假单胞菌耐药情况.方法对160株临床分离的铜绿假单胞菌进行15种药物敏感试验,用MH平板采用WHO推荐的K-B法.结果氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸耐药率在95%以上;头孢三嗪、头孢噻肟、替卡西林/克拉维酸、庆大霉素、哌拉西林、氧氟沙星等耐药率在40%～60%;哌拉西林/三唑巴坦、氨曲南、环丙沙星等耐药率在30%左右,阿米卡星、亚胺培南、头孢他啶等耐药率在20%以下.结论铜绿假单胞菌对氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸完全耐药,对碳氢酶烯类药物亚胺培南(11.9%)、头孢他啶(13.8%)耐药率最低;氨基甙类中的阿米卡星(20.1%)和环丙沙星(30%)耐药率相对较低.临床上宜选择耐药率＜20的药物;对耐药率在40%～60%的药物慎用;耐药率＞70%的药物最好不用.     

溶液中固体催化剂表面酸量的紫外光谱分析

采用了一种新的定量测定固体酸催化剂表面酸量的方法。以不已烷为溶剂,吡啶和2,6－二甲基吡啶为吸附质,用紫外光谱法定量分析脱铝超稳Y沸石（DUSY,硅铝比为13．58）的吸附量,由此得出B酸量和L酸量。结果表明,该方法快速、准确。     

克拉维酸钾菌渣中温单级厌氧消化实验研究

在水力停留时间固定为15天、接种比40％的条件下进行了克拉维酸钾菌渣中温(35℃)单级厌氧消化实验,结果表明:①在稳定运行阶段可直接进原浓度菌渣(COD约40000mg·L-1,COD容积负荷2.67kg·m 3·d-1),出水COD稳定在1500mg· L-1左右,COD去除率在96％左右,理论单位容积/(L-1·d-1)甲烷产量达0.9L.②系统启动和驯化快;负荷提高时运行平稳;VFA浓度较低,未出现酸化现象;氨氮浓度较高(1800～2000mg·L-1),可能对厌氧消化有抑制作用.③厌氧消化技术用于处理克拉维酸钾菌渣是可行的.     

α-癸基甜菜碱两性表面活性剂的两相滴定分析法

利用α-癸基甜菜碱(α-CB)在酸性条件下呈现阳离子表面活性的特征，建立了用混合指示剂反滴定法定量测定α-CB的方法．平均回收率为101．4％，相对标准偏差小于0．3％；粗产品中残存的三甲胺和长链羧酸对测定结果无明显干扰．同时建立了用溴甲酚绿两相滴定法定量测定产品中未反应原料十二酸的方法，平均回收率为98．7％，相对标准偏差小于0．5％；由于α-CB在碱性条件下不显示阴离子表面活性，故对测定结果无明显影响．将上述两个测定过程相结合，可用于α-CB活性成分的定量检测．     

菌悬液浓度对体外药敏实验结果的影响

为探讨受试菌菌悬液浓度对体外药敏实验结果的影响,该文采用微量稀释法测定阿莫西林/克拉维酸（4：1）、庆大霉素、多西环素和恩诺沙星等4种药物对鸡大肠杆菌和鸡金黄色葡萄球菌在不同菌悬液浓度（10^3CFU/mL、10^4CFU/mL、10^5CFU/mL、10^6CFU/mL、10^7CFU/mL）的最小抑菌浓度（MIC）值。结果表明：恩诺沙星对两类细菌的MIC值不受接种的菌悬液浓度影响;多西环素对大肠杆菌的MIC值受菌悬液浓度影响较小,但其对金黄色葡萄球菌的MIC值随菌悬液浓度升高而升高;阿莫西林/克拉维酸（2：1）和阿米卡星对两类菌株的MIC值均随菌悬液浓度增大而增大,增大的幅度因药物和受试菌不同而异。     

钢中酸溶铝和全铝的光谱测定

研究了利用原子发射光谱仪定量测定中低合金钢中的酸溶铝和全铝的方法,对测定铝的条件,分析样品制备,校准曲线拟合等问题进行了讨论.本方法全铝的分析范围0.001%～1.00%.     

克拉维酸发酵液中碳源--甘油含量的比色法测定

研究了克拉维酸发酵液中甘油含量的测定方法,在412 nm得到了甘油测定的线性回归方程y=0.0236x-0.0036,R2=0.9997,在0～40mg·L-1范围内,线性关系良好.通过回收率实验,证明发酵液中其他成分对测定结果干扰较小.该方法重现性好,方法简单,比较适合发酵液中甘油含量的测定.     

浅探研究所与企业合作的途径

国家医药管理局福建省微生物研究所是福建省科委的直属研究所,主要从事微生物药物的研究和开发,承担与国计民生休戚相关的高科技生物技术项目。近几年,研究所相继研究开发成功了抗细菌抗生素西梭霉素、β—内酰胺酶抑制剂克拉维酸、用于器官移植的免疫抑制剂环孢素、抗癌免疫增强剂胞必佳、以及菇类增产剂福菇肽等一批新品种,填补了国内空白,取     

反相高效液相色谱法检测手性药物前体扁桃酸

采用反相高效液相色谱法分离测定手性药物前体扁桃酸及其底物苯乙酮酸.反相色谱柱为VarianC18柱,以甲醇-磷酸盐缓冲液(体积分数=1∶9)作为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长为297nm,柱温25℃.该法测定的灵敏度高,可用于发酵液中苯乙酮酸和扁桃酸的定量测定.扁桃酸及苯乙酮酸浓度在5～20mmol·L-1范围内呈现良好的浓度-峰面积线性关系.     

稀土镧,铈,钕分析方法研究

针对冕宁稀土矿组成的特点，对稀土元素镧，铈，钕的分析方法进行了研究，确定了在普通实验室内定性和半定量测定镧，铈，钕的方法和定量测定稀土元素总量的方法，为冕宁稀土矿的深加工分析提供了一套完整的快速，简便方法。