生淀粉糖化酶产生菌1—16的选育研究

对生淀粉糖化酶产生菌黑曲霉进行了初步诱变选育，得到一株具有较高生淀粉糖化酶生产能力的１－１６菌株，其生淀粉糖化酶平均发酵单位较原菌株提高了３９％。     

糖化酵母原生质体诱变育种的研究

采用单一因素多次诱变的方法,对糖化酵母原生质体进行诱变育种,结果表明该方法对提高糖化酶活力有一定效果。经测定,诱变株同化、发酵淀粉的能力均有改善。     

纤维素酶产生菌发酵条件研究

本试验以具有纤维素酶活力的黑曲霉诱变菌株为材料,研究了碳源、氮源、碳氮比、培养基起始pH值、接种量及发酵时间对该菌株产植酸酶活力的影响。结果表明,该菌株最适产酶pH为6.0;最佳接种量为10%（v/v）;最适碳源和氮源分别为麸皮和黄豆粉,且它们的最优比例为5∶1,最适发酵时间为60h。在最优的发酵条件下,筛选菌株产纤维素酶活可达168U/g。     

菊粉酶产生菌的选育及发酵条件

野生型黑曲霉ＡＪ１４０５经紫外线、硫酸二乙酯和亚硝基胍等多代诱变处理，获得一株产菊粉酶（ＩｎｕｌｉｎａｓｅＥ．Ｃ．３．２．１．７）能力较高的变异菌株ＡＪ１９５８．连续传代１０次，ＡＪ１９５８突变株无衰退，是稳定的变异菌株．其产生的菊粉酶只被菊粉（Ｉｎｕｌｉｎ），而不被蔗糖、淀粉、纤维素、葡萄糖或果糖诱导．在１０００ｍＬ０．０７ｇ／ｍＬ菊芋提取液中添加豆饼粉５ｇ，麸皮５ｇ，２５０ｍＬ三角瓶中装５０ｍＬ培养液，于３０℃，１２０ｒ／ｍｉｎ旋转式摇床振荡培养３ｄ，酶活力可达６４μｍｏｌ·ｍｉｎ（－１）．Ｋ＋，Ｆｅ（２＋），Ｍｇ（２＋）对酶形成有促进作用．     

黑曲霉发酵玉米淀粉生产柠檬酸

用紫外线和亚硝基胍诱变相结合的方法,从野生黑曲霉菌株出发,经多次诱变筛选,得到一株能够较好地利用玉米淀粉生产柠檬酸的黑曲霉菌株Ａ．ｎｉｇｅｒ９５。对Ａ．ｎｉｇｅｒ９５在摇瓶和发酵罐上用玉米淀粉发酵产生柠檬酸的适宜条件作了详细研究。经过比较,认为摇瓶产生柠檬酸的适宜培养基配方及发酵条件为：玉米淀粉２０％（均为质量分数,下同）、（ＮＨ４）ＳＯ４０．２％、ＫＨ２ＰＯ４０．２％、ＭｇＳＯ４７Ｈ２Ｏ０．０５％,甲醇３％,初始ｐＨ３．０。接种液体种子５％,３０℃２００ｒ／ｍｉｎ发酵７ｄ,柠檬酸产量１０．８％。在６．６Ｌ的Ｂｉｏｆｌｏ－Ⅱ型发酵罐上设定３０℃,５００～６００ｒ／ｍｉｎ,ｐＨ４．０,１．２～２．５Ｌ／ｍｉｎ的通气量,发酵１３２ｈ,柠檬酸产量为９．３％。可用价格低廉、来源丰富的玉米淀粉代替传统的薯干,作为发酵生产柠檬酸的原料,为实际生产奠定了基础。     

普鲁兰产生菌的紫外诱变及其发酵条件

采用紫外照射法对原始菌株进行诱变和筛选, 得到一株高产普鲁兰变异菌株T1, 使普鲁兰的转化率达30.14%, 是原始菌株的5.7倍. 通过正交设计实验对原始菌株与变异 株T1的最佳发酵条件进行了比较, 确定了变异株T1的最佳发酵条件为: 蛋白胨0.5g/L, 蔗糖 50 g/L, 起始pH 5.0. 普鲁兰的转化率主要与氮源浓度有关. 并对该变异株与原 始菌株的发酵特征进行了研究, 发现变异株的特征发生了根本性改变.     

环孢菌素A产生菌诱变育种及发酵条件研究

采用UV、NTG复合诱变的方法对产环孢菌素A的茄病镰刀菌(Fusarinm solani)进行诱变处理,在含制霉菌素的平板上筛选到产生环孢菌素A水平较高的突变菌株FS-un26,并对突变菌株的发酵条件进行了优化研究,使环孢菌素产量比出发菌株提高了20.6%.     

鸟苷产生菌解淀粉芽孢杆菌的选育

出发菌GR001通过形态观察、生理生化实验、16S rDNA同源性序列分析及部分特异性基因序列分析鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以GR001为出发菌,通过化学诱变选育出一株遗传标记为腺嘌呤营养缺陷、6–巯基嘌呤抗性以及蛋氨酸亚砜抗性(Ade-+MSOr+6-MPr)的突变株GR600.以GR600为受体菌,采用原生质体转化法获得转化子GR607(Ade-+MSOr+6-MPr+kmr),鸟苷产量高达20.82,g/L.     

井冈霉素产生菌的诱变选育及发酵条件优化

本研究以一株能产生井冈霉素的吸水链霉菌井冈变种(Strepto myces hyroscupicusvar.Jingganggensis yen)J1为研究对象,通过紫外线(Uv)及硫酸二乙酯(DES)两次诱变,经平皿初筛,摇瓶复筛,获得茵株j1-U-D,效价达25874×10-6g/mL,比出发菌株提高29%.菌株经过5次传代,代间效价差异不明显,遗传性能较稳定.通过单因素实验和正交实验分析研究了摇瓶产井冈霉素的最适发酵培养基,该茵的最适发酵培养基为(%):淀粉12%、酵母粉4%、KH2Po4o.05%、NaCl 0.15%.最适发酵条件为:发酵起始pH值7.2,接种量8%,发酵温度37℃,发酵时间96 h.茵株最终效价达30610×10-6/mL,比出发茵株提高53%.     

一株产木聚糖酶菌固体发酵条件的优化

采用单因素试验设计对黑曲霉发酵产木聚糖酶的条件进行了研究,并探讨了黑曲霉发酵的产酶模式.以麸皮和玉米芯质量比7:3混合后作为碳源,含0.15%的硫酸铵为无机氮源,物料与水分的比为1:1.5,培养温度28～30℃,培养基起始pH值为4.8,接种量为4%(107个/mL),外加吐温-20±0.05%,发酵时间为72h,用10倍培养基的自来水,40℃摇床浸提1h,木聚糖酶活可达650.45U,为木聚糖酶固体发酵的工业化生产和应用提供参考.     

生淀粉结合域SBD及糖化酶基因在毕赤酵母中的融合表达

【目的】研究生淀粉结合域SBD及糖化酶基因在毕赤酵母中的融合表达,提高酶的表达量和水解生淀粉的能力。【方法】利用In-fusionTM PCR克隆技术将淀粉结合域SBD无缝隙插入到黑曲霉糖化酶基因glu的5′端构建融合表达质粒pPIC9K-psg,实现融合酶基因psg在毕赤酵母GS115中的高效表达,并进行酶学性质研究。【结果】融合酶的最适作用条件及热稳定性均与原始酶无明显差别,但反应温度及pH值的范围更为宽泛,在反应温度60~70℃,pH值为4.0~7.0时均较稳定;融合酶PSG降解生淀粉的能力较原始酶PG提高29.6%,比原始菌株提高86.5%。【结论】淀粉结合域SBD的融合提高了糖化酶水解生淀粉的能力。     

激光复合诱变黑曲霉原生质体选育热稳定菊粉酶高产菌

以菊粉酶产生菌黑曲霉ＡＳ－４原生质体为对象,经激光和亚硝基胍复合诱变,从大量突变株中最终选育出高产热稳定的菊粉酶产生菌ＡＬ－１５４．在以菊芋提取液为碳源、玉米浆加０．３％酵母膏为氮源的基本培养基中,菊粉酶活力达１４６．３ｕ／ｍＬ,比出发株提高近３倍．其产酶最适营养条件为：起始ｐＨ４．５～５．０,２８～３０℃,３６ｈ时产酶量达最高．酶作用最适条件为ｐＨ５．０,６０℃;该酶遗传性能稳定,热稳定性强,６０℃保温处理２ｈ,其酶活性不变,６５℃保温３０ｍｉｎ,仍保留９８％的初始酶活     

高产淀粉酶黑曲霉菌种诱变选育及固态发酵条件研究

真菌产生的淀粉酶具有水解条件温和耐酸的特性,具有广泛的应用价值。为了筛选高产淀粉酶黑曲霉菌种,通过采用微波诱变和硫酸二乙酯处理等方法联合诱变黑曲霉出发菌株,并对筛选出的黑曲霉菌株固态发酵产α-淀粉酶最佳条件进行了优化。结果显示,经过微波诱变16 s和硫酸二乙酯处理20 min筛选出了一株高产α-淀粉酶菌株黑曲霉MD-17,其最佳产酶固态发酵条件为：麸皮与玉米粉干重比为7：3,硫酸铵0.6%,初始pH=5,料水比1：1.5,α-淀粉酶的酶活力最高达到6011 U/g湿曲。     

透明质酸产生菌的诱变育种及发酵条件

本文研究了透明质酸（ＨＡ）产生菌的诱变育种及摇瓶发酵条件。以兽疫链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｚｏｅｐｉｄｅｍｉｃｃｕｓ）ＮＣＴ６１８０为出发菌种，在普通加血培养基上研究了ＨＡ的产生能力，用正交法研究了野生菌的最佳培养条件，通过单菌落分离得到野生高产菌株。再通过紫外和ＮＴＧ诱变得到溶血性较弱的菌株，部分菌株比出发菌株产量提高一倍以上。在摇瓶条件下，ＰＨ值的控制及葡萄糖的加入均有利于ＨＡ的产生。     

透明质酸产生菌的化学诱变及发酵条件探索

以兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus）C55151为原始菌种, 经N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（NTG）诱变处理, 获得一株高产透明质酸（Hyaluroni c acid, HA）的变异株J18, 其HA产量较原始株提高一倍. 利用正交设计试验探索出该变异株的最佳发酵培养基配比为葡萄糖50 g/L, 酵母膏30 g/L, 硫酸镁0.5 g/L.　发现添加十二烷基硫酸钠（SDS）能够大幅度提高HA产量． 同时对原始株、 变异株的发酵过程进行了研究, 发现变异株J18在发酵的任何时间, 其HA产量都高于原始菌种, 且菌体浓度与发酵液中的葡萄糖浓度及pH值呈负相关性.     

L-谷氨酰胺生产菌的定向选育及其发酵条件的初步研究

以TG - 86 6 (BrevibacteriumTianjin)为出发菌株 ,利用硫酸二乙酯 (DES)诱变 ,定向选育出一株谷氨酰胺生产菌GMS - 44(MSOr、(NH4 ) 2 SO4 r、SGr) ,在适宜的条件下平均积累谷氨酰胺 2 7 0 g/L。并对种子培养基及发酵培养基配方作了优化设计。     

木聚糖酶产生菌黑曲霉SP-1液体发酵条件的研究

研究了碳源、氮源以及其他因子对产木聚糖酶高产菌株黑曲霉(Aspergillus niger)SP-1产酶的影响,结果表明:当碳源为70 g/L玉米芯,氮源3 g/L NaNO3和3 g/L(NH4)2SO4,pH值在5.4～6.0时,黑曲霉SP-1的酶活超过300 IU/mL.采用玉米芯代替半纤维素作为碳源可以大大的降低成本,减少环境污染,有利于木聚糖酶的工业化生产.     

黑曲霉的紫外诱变及其液体发酵产木聚糖酶

黑曲霉A,为出发菌株,经紫外线诱变处理,采用平板培养筛选,获得一产木聚糖酶活力高的茵株.实验通过氮源含量,碳源含量,培养基含量和发酵时间对液体发酵产木聚糖酶的影响分析,得出产木聚糖酶的最优条件,即培养时间60 h,接种量5 mL细胞浓度为5×10°个/mL孢子悬液,温度为28℃,氮源质量浓度4 g/L,底物量为0.55 g,培养液70 mL,此条件下生产的木聚糖酶活力可达到58.305 u/mL.     

重组草酸青霉生淀粉糖化酶的酶学特性鉴定

【目的】了解在毕赤酵母中表达的来源于草酸青霉(Penicillium oxalicum)GXU20的重组生淀粉糖化酶的酶学特性。【方法】用3,5-二硝基水杨酸法测定pH值、温度、金属离子和化学试剂对纯化的重组生淀粉糖化酶的活力的影响,同时测定酶的底物特异性、酶对生淀粉的吸附能力以及酶对不同生淀粉的水解效率等,用高效液相色谱法对该酶水解生木薯淀粉的产物进行分析鉴定,用扫描电子显微镜观察重组酶对不同生淀粉颗粒的水解方式。【结果】重组生淀粉糖化酶rPoGA15A的最适pH值为4.5,最适温度为65℃,在pH值为2.0~10.0时,重组酶具有较好的pH耐受性,温度小于50℃时,酶的稳定性好。除Ag~+、Cu~(2+)和SDS之外,其他大部分金属离子和化学试剂对重组酶的酶活力影响不大。重组生淀粉糖化酶对大米和玉米生淀粉的活性较高,对木薯和马铃薯生淀粉的活性次之,重组生淀粉糖化酶rPoGA15A对不同生淀粉的吸附能力与其对相应不同生淀粉的水解活性大小呈正相关。扫描电子显微镜观察表明重组生淀粉糖化酶对不同生淀粉颗粒的降解作用明显,水解方式各有特点。高效液相色谱分析表明该重组生淀粉糖化酶水解生木薯淀粉的产物仅有葡萄糖。重组生淀粉糖化酶rPoGA15A在40℃下对大米和玉米生淀粉水解72h后水解率分别达到86.5%和71.9%。【结论】重组生淀粉糖化酶具有广泛的pH耐受性,对生淀粉具有高水解活性,在生淀粉的水解和生料同步糖化发酵生产酒精中有一定的应用潜力。     

曲酸生产菌的紫外线诱变及发酵条件研究

通过对米曲霉菌株进行紫外线诱变处理,采用快速显色的平板初筛方法,得到三株曲酸产量较高和产酸性能比较稳定的米曲霉突变菌株,并从中筛选出产酸能力最高的米曲霉菌株10V-2。经对该菌株发酵条件进行初步研究,找出了该菌株的最适发酵产酸培养条件,使其摇瓶发酵曲酸产量达到30.51 m g/L。