苯酚和邻甲酚的遗传毒理学研究

采用小鼠骨髓细胞微核试验及人外周血淋巴细胞、小鼠睾丸生殖细胞、鲫鱼红细胞慧星试验,研究了苯酚和邻甲酚的致突变效应及对生殖细胞的DNA损伤作用。实验结果表明,苯酚和邻甲酚能诱发小鼠骨髓细胞微核率的增加,并在一定剂量范围内呈剂量效应关系。苯酚和邻甲酚对人淋巴细胞、小鼠睾丸生殖细胞及鲫鱼红细胞的DNA均有不同程度的损伤作用。3种彗星试验的结果均表明,阴性对照组仅有2．5％－7．5％的细胞出现DNA迁移,且迁移距离很小,损伤程度为2．5－8．0（专用单位）,而阳性对照组表现出99．5％－100％的细胞拖尾率,并且细胞严重损伤,其损伤程度为248－361．8（专用单位）,这证明了实验系统的可靠性。试验结果还表明,苯酚和邻甲酚对3种细胞DNA损伤作用随剂量的增加而增加,并呈现剂量效应关系。小鼠睾丸细胞及鲫鱼红细胞与人外周血淋巴细胞相比,NDA损伤程度更为严重,揭示上述两种细胞对苯酚和邻甲酚的损害作用更为敏感。     

双酚A对小鼠睾丸细胞DNA损伤的研究

目的探讨双酚A的生殖遗传毒性.方法应用单细胞凝胶电泳试验(SCGE)研究了双酚A对离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤作用.结果除10-10mol/L组与对照组比较无显著性差别外,各染毒组拖尾率均明显高于对照组(P<0.05).随着双酚A染毒浓度的增加,小鼠睾丸细胞DNA损伤程度也逐渐增加(P<0.05),在10-5mol/L和10-6mol/L组均出现了Ⅳ级损伤.结论在一定浓度下,双酚A可引起离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤,可能对雄性小鼠具有一定的生殖毒性.     

间二硝基苯对小鼠睾丸生殖细胞DNA损伤作用的SCGE研究

采用小鼠睾丸支持细胞/ 生殖细胞共培养法以及单细胞凝胶电泳技术,研究了间二硝基苯对小鼠睾丸生殖细胞DNA的损伤作用.结果表明:间二硝基苯能够导致生殖细胞DNA链断裂,而且其受损率与剂量具有明显的剂量效应关系,与对照组相比均具有显著性差异(P＜0.01,P＜0.05);间二硝基苯可以引起离体小鼠睾丸生殖细胞DNA损伤,具有生殖毒性.     

小剂量60Coγ线照射诱导体外培养小鼠骨髓细胞凋亡研究

目的：研究小剂量^60Coγ线照射对体外培养小鼠骨髓细胞的影响。方法：以1ng/ml rh GM-CSF和5ng/ml rh IL-3作为造血生长因子，维持骨髓细胞存活，然后用小剂量^60Coγ线照射，动态观察骨髓细胞凋亡情况，同时设立未照射小鼠骨髓细胞作对照。结果：实验观察到照射后6h，透射电镜显示细胞皱缩，细胞膜空泡化，核固缩，呈典型的细胞凋亡特征；DNA裂解百分率照后6h各时点逐渐升高，第20h达高峰，之后逐渐下降，照后6－26h，实验组与对照组DNA裂解率有显著性差异（P＜0．01）；DNA琼脂糖疑胶电泳呈特征性梯状图谱，片段大小为180bp或其倍数。结论：小剂量^60Coγ射线可诱导体外培养骨髓细胞凋亡。     

邻苯二甲酸二乙基己酯对小鼠不同脏器DNA的损伤作用

应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究了邻苯二甲酸二异辛酯[Di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]对小鼠不同脏器(睾丸、胃、脑和肝)DNA的损伤作用.结果表明,DEHP可引起小鼠DNA的损伤,并且随着DEHP浓度的逐渐增高,DNA的损伤也随之加重,它们之间具有明确的剂量效应关系.在睾丸的细胞,胃内膜的细胞,脑的细胞中,当DEHP的浓度达到375 mg/kg时,则可造成DNA的极显著断裂(P＜0.01).而在肝的细胞中,当DEHP的浓度达到125 mg/kg时,就可造成DNA的极显著断裂(P＜0.01).当DEHP的浓度达到500 mg/kg时,除了脑的细胞外,DNA的断裂均不显著,可能已形成交联.     

微量热研究稀土离子对大肠杆菌的作用

用不同浓度的甲醛染毒人宫颈癌Hela细胞、离体小鼠睾丸细胞、昆虫小菜蛾细胞,应用单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA的损伤效应.结果表明:对于Hela细胞和小菜蛾细胞,甲醛在10 μmol/L时可以极显著地诱导DNA断裂(P<0.01);在30 μmol/L时既有断裂也有交联作用(P<0.01),而在50μmol/L时尾部DNA百分比和尾距与阴性对照组无显著差异(P>0.05).对于睾丸细胞,甲醛在10μmol/L、30 μmol/L和50μmol/L时均可导致DNA断裂(P<0.05,P<0.01).该结果提示:甲醛兼具有断裂和交联的作用,可引起多种细胞DNA的损伤.     

外源性DNA对小鼠自身DNA的保护作用

采用骨髓有核细胞微核率测定法，检测小鼠服用鲤鱼精巢ＤＮＡ后，６０Ｃｏ－γ射线对小鼠骨髓细胞染色体损伤的严重程度，结果表明，小鼠每天每千克体质量灌胃鲤鱼精巢ＤＮＡ１００ｍｇ，连续１５ｄ，可使总剂量６Ｇｙ的６０Ｃｏ－γ射线致小鼠骨髓有核细胞微核发生率减少４７．２％（Ｐ＜０．００１）；采用全血ＵＤＳ测定法，检测小鼠血细胞ＤＮＡ受紫外线损伤后的修复速度，结果表明，小鼠每天每千克体质量灌胃鲤鱼精巢ＤＮＡ３０ｍｇ，连续３个月，其全血ＵＤＳ增加４０．０２％（Ｐ＜０．００１）．     

松杉灵芝多糖的抗突变作用

通过小鼠骨髓细胞微核试验、 小鼠睾丸染色体畸变和Ames 试验观察了松杉灵芝多糖的抗突变作用. 结果表明, 松杉灵芝多糖对TA98, TA100两株试验菌株, 加与不加S-9均对阳性物致突变作用有抑制作用; 口服不同剂量的药液30 d, 能明显拮抗环磷酰胺所致小鼠骨髓细胞微核率, 但对于丝裂霉素C诱发小鼠睾丸染色体畸变无明显抑制作用.     

幼年小白鼠睾丸内精子出现的时间

用睾丸的分散细胞悬滴法制备玻片标本，观察幼年小白鼠睾丸内出现精子的确切时间．实验研究结果表明，小鼠出生后第３７ｄ于睾丸内见有精子出现，当小鼠出生后至第３８ｄ时，睾丸内的精子数量明显增多．     

醋酸铅对小鼠骨髓细胞染色体畸变的研究

为探讨醋酸铅染毒对细胞内染色体完整性和染色体分离的影响，本试验用0．5％，1％，2％的醋酸铅对小鼠经腹腔注射进行染毒，用生理盐水作对照，每天1次，每次0．1ml，连续7天，第8天处死染毒小鼠．取小鼠骨髓细胞制片，对骨髓细胞染色体畸变率进行分析．结果显示，骨髓细胞染色体畸变率随醋酸铅浓度增高而升高，最低致畸剂量为醋酸铅0．5％．该结果表明，醋酸铅对小鼠的骨髓细胞有很强的遗传毒性．     

原代小鼠卵巢上皮细胞TP53基因敲除及其生物学特征变化

目的 利用CRISPR/Cas9慢病毒载体系统建立小鼠原代卵巢上皮细胞TP53基因稳定敲除细胞系,分析细胞增殖、细胞周期、克隆形成以及细胞转移侵袭能力的变化。方法 构建LentiCRISPRv2-sgRNA TP53基因敲除质粒,用293FT细胞进行慢病毒包装,转导小鼠原代卵巢上皮细胞,嘌呤霉素筛选出稳定敲除细胞系,进行PCR、蛋白免疫印迹以及免疫荧光鉴定。细胞增殖、细胞周期变化、克隆形成、细胞迁移侵袭能力分别用MTT、流式细胞分析、单层培养以及Transwell小室进行测定。结果 TP53基因敲除小鼠原代卵巢上皮细胞中P53表达缺失;TP53敲除引起细胞迅速增殖,DNA合成加速,克隆形成以及迁移侵袭能力增强。结论 获得了原代小鼠卵巢上皮细胞TP53基因稳定敲除细胞系,细胞生物学特征明显改变。     

LncRNA SIL沉默促进A549细胞增殖和迁移

研究了lncRNA SIL与肺纤维化中肺泡上皮细胞的增殖和迁移之间的关系.设计小干扰RNA沉默内源性lncRNA SIL的表达,通过RT-PCR、MTT、Western blot、细胞损伤修复实验及Transwell实验研究沉默后细胞的增殖和迁移变化.MTT结果显示:沉默lncRNA SIL后细胞的增殖能力与对照组相比...     

过表达BMP7对HL-7702细胞功能的影响

目的建立HL-7702细胞BMP7基因转染细胞系,并检测其增殖和迁移能力的变化。方法脂质体介导方法转染细胞,采用RT-PCR、western-blot方法检测其mRNA及蛋白表达以评价其转染效果;用MTT、划痕实验检测转染后增殖及迁移能力的变化。结果成功建立转染细胞系,转染BMP7基因后HL-7702细胞增殖和迁移能力有所增强。结论 BMP7基因高表达可能是肝细胞癌变的原因之一。     

木犀草素对脉络膜恶性黑色素瘤细胞的影响

为探讨木犀草素调节Wnt/β-catenin信号通路对人脉络膜恶性黑色素瘤细胞(MuM-2C)凋亡、迁移和侵袭的影响,采用CCK-8法测定0,5,10,15,20,25μmol/L浓度木犀草素处理24 h后的MuM-2C活力,以筛选合适的药物作用浓度.将体外培养的MuM-2C随机分为3组：对照组、木犀草素组及木犀草素+氯化锂组,木犀草素组以15μmol/L木犀草素处理,木犀草素+氯化锂组以15μmol/L木犀草素和10μmol/L的氯化锂联合处理.采用流式细胞技术和Hoechst 33258染色检测MuM-2C的凋亡情况,采用划痕实验和Transwell实验检测各组MuM-2C的迁移、侵袭情况,采用免疫荧光检测各组MuM-2C中凋亡蛋白BAX与BCL-2表达,采用免疫印记检测各组MuM-2C中EMT标志蛋白(E-cadherin, N-cadherin, Vimentin)和Wnt/β-catenin信号相关蛋白(Wnt1,β-catenin)表达,结果表明：不同剂量木犀草素均可抑制MuM-2C生长,并在一定范围内随剂量升高而作用增强;与对照组比较,木犀草素组细胞核形态固缩而大小不一,...     

藻蓝色素蛋白通过调控miR-642a-5p抑制LTEP-a2细胞的增殖和迁移

研究藻蓝色素蛋白抑制非小细胞肺癌LTEP-a2体外增殖迁移的机制.以LTEP-a2细胞为模型,采用高通量miRNA转录组学对藻蓝蛋白处理后细胞中差异表达的miRNA进行了筛选;对筛选出的差异miRNA,利用体外转染mimics的方法对细胞的增殖、迁移能力进行验证.研究结果显示,藻蓝蛋白处理LTEP-a2细胞后能够显著增加细胞内miR-642a-5p的表达水平;过表达miR-642a-5p能够显著抑制细胞的体外增殖、迁移能力;此外,藻蓝蛋白可以通过上调miR-642a-5p表达抑制核受体NF-κB信号通路,降低蛋白磷酸化水平,进而抑制LTEP-a2细胞的增殖迁移能力.研究能够为藻蓝色素蛋白的应用以及非小细胞肺癌的治疗提供一定的理论基础.      

应用彗星试验研究两种农药对小鼠DNA的损伤

探讨采用当前国际上较先进的DNA损伤检测技术-单细胞凝胶电泳技术(SCGE,又名彗星试验),来检测农药对小鼠DNA的损伤,尝试建立小鼠的单细胞凝胶电泳技术来评价农药对生态环境和人体健康的影响.结果表明两种新型杀虫剂吡虫啉和抑食肼在一定的剂量范围内对小鼠的DNA均有一定程度的损伤作用,各浓度组与阴性对照组相比具有显著性差异(P<0.01),且具有明显的剂量效应关系.认为小鼠单细胞凝胶电泳技术能敏感地检测农药对细胞DNA的损伤,并认为细胞的DNA损伤可作为农药等化学品致突变性检测的生物标志物.     

电刺激对内皮细胞及血管组织的作用

电学环境是生物体所处的重要微环境之一,外加电刺激对内皮细胞和血管有重要作用.电刺激对细胞活性的影响已越来越引起人们的兴趣和重视,同时在生物科学中已得到了广泛的应用.文中就电刺激对内皮细胞粘附、增殖、迁移和分泌物产生的影响以及对血管收缩和舒张的影响及其机理作些介绍和分析.     

New Membranes Based on Polybenzimidazole for Polymer Fuel Cells

1 Results Acid-doped polybenzimidazoles[1] are particularly appealing because of high proton conductivity with no or low humidification and promising fuel cells performances. PBI, in fact, contains basic functional groups which can easily interact with strong oxo-acids, such as H3PO4 and H2SO4. The acid partially protonates the polymer and partially is freely dispersed in the polymer backbone, so allowing proton migration via Grotthuss mechanism along the anionic chains[2]. Anyway, a technological limit...     

基因芯片研究小檗碱对胰岛素抵抗卵巢颗粒细胞基因表达的影响

应用基因芯片技术研究小檗碱对胰岛素抵抗卵巢颗粒细胞基因表达谱的影响。方法采用胰岛素信号转导通路调节糖代谢的关键分子——PI-3K的特异性阻断剂沃漫青霉素作用于猪卵巢颗粒细胞,人工诱导胰岛素抵抗(IR)的细胞模型;同时应用小檗碱作用在细胞模型上,作用48h后提取细胞总RNA,应用猪全基因组单通道芯片对样本基因进行筛查,得出差异表达基因数据并进行分析。结果显示,中药小檗碱作用模型细胞后差异表达基因42个。差异表达基因主要涉及的功能有:物质代谢、炎症与免疫反应、信号转导等。由此可得出结论:小檗碱可通过多种途径在基因水平上对胰岛素抵抗卵巢颗粒细胞起作用。     

诱导肿瘤细胞HeLa为多能性干细胞的研究

将携带4种转录因子的逆转录病毒共同感染HeLa细胞,感染后的细胞铺到滋养层细胞MEF上培养,细胞长出类似胚胎干细胞的克隆团,这种克隆团可以扩增,并进一步诱导分化为神经元,同时免疫荧光检测细胞分化不同天数后Pax6,Sox1和βⅢ-tubulin的表达.结果表明,肿瘤细胞HeLa在Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4等4种转录因子的作用下成功重编程为多能干细胞,同时可进一步分化为神经元.