中华猕猴桃蛋白酶羧基的化学修饰

有关中华猕猴桃蛋白酶(Actinidin,E C 3、4.22.14)催化功能基团的研究表明:CYSH—25、His—161为酶活性部位必需基团,而Lys和Trp残基为酶活力表现所必需。本文中报道应用水溶性碳二亚胺(EDC)修饰动力学方法,进一步探讨羧基     

中华猕猴桃蛋白酶热失活动力学

改进了酶的提纯方法获得聚焦电泳为单一区带酶制剂。酶热失活以 HbCO 为底物时为一级反应,动力学方法表明 HbCO 对酶的热失活有保护作用,68.90℃时k_(+0)/k′_(+3)比值24,“HbCO”络合物活化能 535kJ/mol,焓 531 kJ/mol,自由能 116kJ/mol,熵1 212kJ/mol,生成自由能和生成热分别为20和209kJ/mol,这些参数说明 HbCO对酶热失活保护作用以及对酶构象影响可能与二者的多键结合和HbCO 水化作用有关。本文中还得到CBZ-Lys-ONp 为底物的热力学参数,观察到 DTT 对酶热失活保护是很小的。     

中华猕猴桃蛋白酶催化功能基团的研究

从野生中华猕猴桃分离提纯得SDS电泳单一纯酶制剂,酶蛋白的总巯基数为7,其中游离巯基数为1.3×10~(-5)MpCMB使酶活力丧失100％,酶修饰失活呈一级反应,表明酶分子的唯一游离巯基为该酶催化活性的必需功能基团.酶在2×10~(-4)M PMSF,活力仍不受影响,提示Ser残基与酶的催化功能无关.以Na_2S_4O_6保护游离巯基,用NBS修饰Trp残基,并辅以紫外光谱和萤光光谱分析.结果表明Trp残基为酶催化功能所必需.初步的CDC化学修饰结果亦表明,羧基似与酶催化活性有关.     

中华猕猴桃蛋白酶在乙醇溶液中的分子折叠

研究了中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）乙醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱、圆二色光谱（ＣＤ谱）及傅立叶变换红外光谱的变化，并测定了相应的活力变化，当乙醇浓度低于３０％时，酶的荧光强度无明显变化，而乙醇浓度大于３０％时，则酶荧光强度增大，且峰位略红移。在乙醇溶液中，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ内出现正峰，峰强度随乙醇浓度的增高基本表现为逐渐增大，峰位也逐渐蓝移。ＣＤ谱及红外光谱的测定结果表明低浓度乙醇中酶分子有序二级结构的减少及高浓度乙醇中β－折叠含量的增加．随乙醇浓度的增加．酶的活力表现为逐渐降低，且乙醇对酶的失活作用类似于竞争性抑制。     

中华猕猴桃蛋白酶分离提纯及性质研究

以中华猕猴桃鲜果为材料,经调节pH,硫酸铵盐析,除果胶以及DEAE—纤维素(E22)柱层折纯化,获得电泳单一区带酶制剂。以牛碳氧血红蛋白为底物,酶的最适温度为45—50℃,最适pH为3.7—4.0,K_m值为2.78×10~(-5)M,K_(cat)为2.01×10~2/min,pH影响V_(max)而不影响K_m值,表现为非竞争性抑制作用。该酶的活活化能为6.84kcal/mol,ΔH为6.24—6.20kcal/mol(30—50℃),同时还进行了酶的热稳定性研究。     

十二烷基硫酸钠对猕猴桃蛋白酶的变性作用

应用光谱法观测酶的结构变化,紫外差光谱显示在233nm有一较明显的差吸收负峰,在286nm、300nm左右有不大的负峰和在265nm的正峰;荧光谱显示327nm的相对荧光强度随SDS浓度的增高而递减;发射峰位置红移,酶受SDS>4.1mmol/1作用1h,可引起310nm新荧光发射肩。动力学资料表明,SDS对酶的变性过程为一级反应;酶的失活分快慢相,呈现二个一级反应,同时测定在SDS作用下actinidin的变性与失活速度,表明酶的失活速度大于变性速度,似可认为低浓度SDS能使结构域相错开,从而敏感地改变活性部位的微区结构,导致酶快速失活,提高SDS浓度则使酶的结构域发生构象变化,引起光谱法所显示的特征。     

中华猕猴桃蛋白酶经有机溶剂处理后的激活动力学行为

中华猕猴桃蛋白酶经有机溶剂处理后的激活动力学行为颜青，林青松，颜思旭（抗癌研究中心）（生物学系）由于酶在有机溶剂中的催化反应的研究日益得到国际上的广泛重视，本实验室近年来逐渐开展了中华猕猴桃蛋白酶在半极性介质中的分子折叠与活力关系的研究工作［１，２］...     

中华猕猴桃蛋白酶在甲醇溶液中的构象与活力变化研究

研究中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）甲醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱及ＣＤ光谱的变化，并测定相应的活力变化；酶的内源荧光强度随甲醇浓度的增加而增高，且发射峰略有红移．在甲醇存在下，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ范围内出现正峰，随甲醇浓度增高，峰强度增大，且峰位蓝移．ＣＤ谱变化表明，在不同浓度甲醇存在下，酶的ａ──螺旋度有不同程度的减少．在１０％～５０％甲醇存在下，酶有不同程度的激活现象，当甲醇浓度为３０％和４０％时，激活程度最大，约为天然酶活力的１５０％．     

中华猕猴桃蛋白酶在半极性介质中的构象变化和动力学研究

三种有机溶剂,二氧六环、二甲基甲酰胺和乙二醇,都不同程度地抑制中华猕猴桃蛋白酶催化水解赖氨酸对硝基本酯(CBZ-LYS-pNP)能力,其动力学行为符合Michaelis-Menten方程式,二氧六环的抑制作用类似于竞争性抑制类型,二甲基甲酰胺和乙二醇为非竞争性抑制,其抑制常数,分别为k_1=5.6×10~(-2)、0.58和1.60mol/L,光谱分析表明,酶在有机溶剂中,空间构象也发生了变化,随着二氧六环和二甲基甲酰胺浓度的增大,酶分子的α-螺旋度下降,无规卷曲度上升,荧光发射强度比天然酶略有增高或降低,变化的规律性不够,紫外差光谱显示,酶在6％二甲基甲酰胺中有一个243nm的负峰,此负峰随浓度的增大而增大,并略向红移,在24％二甲基甲酰胺中,负峰红移至248nm处。     

猕猴桃蛋白酶在胍中“慢构象快活力变化”现象

比较了猕猴桃蛋白酶(Actinidin)在盐酸胍中变性时的荧光变化与活力变化的关系。当胍浓度为0.1 mol/l时,酶的最大荧光发射波长λ_(max)不变,荧光强度上升。此时酶被激活,活力提高25％,激活速度比变性速度快5.0倍。胍浓度逐渐增大,酶λ_(max)略红移,4.0 mol/l时达336 nm。但荧光强度降低,酶表现为快相和慢相失活的二个一级反应,失活速度常数比变性速度常数快 1～3个数量级。Actinidin 的激活与失活现象显示这可能与活性部位相关的 Trp 微环境的构象变化有关。胍变性结果指出 Actinidin 构象变化速度小于活力变化速度,这代表酶变性反应时慢构象变化快活力变化的一种模式。     

残数在定积分中的应用

残数理论是复积分和复级数理论相结合的产物,除供计算积分的新方法外,本身也是复变函数论的重要理论,尤其是它在实际问题中的应用,更是不可忽视。本文着重介绍某些类型的实积分的应用,从解法入手,并分别给出实例。     

发酵豆渣食品的研究进展

豆渣富含膳食纤维、蛋白质、钙等营养元素,是一种新型保健食品资源。本文主要介绍了豆渣食品的营养保健价值、相关利用和微生物豆渣发酵食品方面的应用前景。     

对数留数定理的推广及应用

对传统的对数留数定理进行了推广,给出了一个一般性的结论,解决了一类被积函数为φ(z)f′(z)f(z)形式积分的计算问题,并给出了应用实例.     

赖氨酸发酵的培养基成分改进

盐酸豆饼水解液是造成赖氨酸发酵重现性不好的主要原因之一。试图用相对廉价稳定的蛋白胨作为氮源,替换盐酸豆饼水解液。通过对蛋白胨用量的考察,确定了去掉盐酸豆饼水解液后,种子培养基中加入1%的蛋白胨,发酵培养基中加入0.7%的蛋白胨,赖氨酸发酵单位比对照增加7%以上,从而保证学生实验结果的重现和稳定。