人角质细胞生长因子的植物表达载体构建

人角质细胞生长因子(KGF)有3个外显子,2个内含子.以人DNA为模板,PCR扩增获得角质细胞生长因子外显子2和外显子3;合成单链的寡核苷酸,经链延伸和PCR扩增从而获得外显子1.应用延伸PCR将3个外显子连接得KGF编码序列,并连接CaMV35S启动子和NOS终止子后克隆至植物表达质粒pBI 1301.     

人角质细胞生长因子基因转化水稻的初探

角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor, KGF)在组织的损伤修复中起着重要的作用.在植物里面表达高活性的KGF具有成本低、易开发的优点.本实验将人角质细胞生长因子基因经农杆菌介导转入水稻中,获得110株再生植株.对再生植株进行GUS检测发现有44.7%植株呈阳性,PCR检测的结果也显示有52.6%的植株为阳性植株.     

重组人角质细胞生长因子(KGF-2)在毕赤酵母中的克隆与表达

利用RT－PCR技术，从体外培养的人胚胎成纤维细胞中扩增出人角质细胞生长因子（KGF－2）的cDNA及基因序列，并将其基因序列克隆入质粒pGEM-T Easy中，经测序与文献报道序列一致，将KGF－2基因切出后定向插入酵母分泌性表达质粒pPICZαA中，转化毕赤酵母菌株GS115，获得的重组体经甲醇诱导可表达出人角质细胞生长因子KGF－2，表达的KGF－2经Ni^2 柱亲和层析纯化后，有很好的生物学活性。     

人角质细胞生长因子-1在水稻中的表达

人角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)在组织的损伤修复中起着重要的作用.植物细胞生物反应器是一种成本低、安全性好的蛋白生产系统.本研究将人KGF-1经农杆菌介导法转入水稻中,共获得38株抗性再生植株.Southern杂交和RT-PCR结果表明KGF-1基因整合入水稻基因组中且部分转化株中KGF-1基因得到转录.Western blotting检测结果显示有两株转化水稻中能够表达KGF-1.     

高密度培养大肠杆菌表达人角质细胞生长因子

角质细胞生长因子(KGF)是成纤维生长因子家族(FGF)成员,与上皮细胞增殖、组织胚胎发育、创伤修复等过程密切相关.在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆KGF基因,并进行诱导表达条件的优化.使用合成培养基,应用底物反馈流加策略将糖浓度控制在较低水平,在发酵罐中高密度培养,细胞干质量浓度可以达到46 g/L.发酵罐培养的大肠杆菌在对数生长期经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在可溶性和不溶性产物中都得到了具有免疫学活性的GST-KGF融合蛋白,经过ELISA检测,发酵液中可溶性表达的KGF产率达到108μg/L.该研究为利用原核表达系统生产活性KGF建立了优化工艺,有利于将大规模生产用于创伤修复的KGF.     

角化细胞生长因子的获得及植物表达载体的构建

从鼠肺中提取RNA,设计相应的引物,经RT PCR扩增出角化细胞生长因子cDNA序列;插入pMD18 T载体,经DNA测序证实为KGF基因.将KGF基因经酶切后连接于植物CaMV35S启动子和NOS终止子之间,单酶切插入pBI1301植物双元表达载体,转化大肠杆菌,阳性克隆提取质粒后转化农杆菌EHA105,实现KGF植物表达载体的构建,为KGF的进一步研究奠定基础.     

人角质细胞生长因子基因转化水稻的初探

角质细胞生长因子（Keratinocyte growth factor，KGF）在组织的损伤修复中起着重要的作用．在植物里面表达高活性的KGF具有成本低、易开发的优点．本实验将人角质细胞生长因子基因经农杆菌介导转入水稻中，获得110株再生植株．对再生植株进行GUS检测发现有44．7％植株呈阳性，PCR检测的结果也显示有52．6％的植株为阳性植株．     

番茄SlWRKY1转录因子在植物生物和非生物胁迫中的调控

克隆番茄SlWRKY1基因,构建植物过量表达载体pBI121-35S∷SlWRKY1并通过农杆菌介导的遗传转化法转化番茄,成功获得3株过量表达的转基因植株.研究发现:转基因植株对丁香假单胞菌番茄变种(Pst DC3000)的感染表现出敏感性,表明SlWRKY1基因可以减弱由Pst DC3000引起的植物防御反应,在相关信号通路中起到负调控作用.同时SlWRKY1转基因植株对盐胁迫表现出抗逆性,在胁迫条件下转基因植物中积累了大量的脯氨酸.推测SlWRKY1基因可能参与番茄脯氨酸代谢调控.     

海洛因对母鼠体重、行为及肺中相关活性物质表达的影响

为探讨海洛因对母鼠体重、行为及肺中Bax蛋白、c-Fos蛋白和KGF表达的影响,对48例受孕小鼠(第8天开始)每天早晚分别注射0.2mL浓度为1.0、1.5和2.0g.L-1的海洛因溶液和等量生理盐水直到小鼠分娩,观察测量其体重和行为变化,采用免疫组织化学染色和体视学半定量方法检测胚胎15d、分娩1d、7d、15d的母鼠肺中Bax蛋白、c-Fos蛋白和KGF的表达情况.结果表明:注射海洛因后母鼠出现竖尾兴奋跑圈、四肢离地蹿起、腹泻等依赖症状;分娩后母鼠出现明显的烦躁不安、高度激怒、肌颤、扭体、饮食次数减少等症状,海洛因对母鼠行为的影响在一定范围内存在剂量效应和长时程效应.实验组各期母鼠的体重明显低于对照组,母鼠肺中Bax蛋白、c-Fos蛋白和KGF的表达强度与对照组相比显著增强(P0.01或P0.05),且随海洛因浓度的增大表达增强,但随着发育的进行,海洛因组母鼠肺中Bax蛋白、c-Fos蛋白和KGF的阳性表达逐渐减弱.海洛因影响母鼠的体重和行为及肺中Bax蛋白、c-Fos蛋白及KGF的表达.     

过表达B基因的转基因微型番茄的获得

以微型番茄M icro-T om核基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增编码有色体特异性的番茄红素β-环化酶的B基因编码区,并将B基因与在高等植物中组成型表达的C aM V 35S启动子融合,构建成双元载体pL e-BZN,导入农杆菌,利用农杆菌介导的遗传转化方法转化到微型番茄M icro-T om中,通过抗性筛选和PCR鉴定,成功获得了多株转基因微型番茄,为获得富含β胡萝卜素的转基因微型番茄奠定了基础.