美科学家用神经干细胞治愈脊髓损伤

美国科学家前些时候报告说，他们将人类神经干细胞植入脊髓受损伤的瘫痪实验鼠体内，结果成功修复了实验鼠的脊髓组织，并使它们改善了行动能力。     

失神经对大鼠胫骨骨折愈合影响作用的实验研究

目的通过观察失神经后大鼠胫骨骨折的愈合情况,探讨中枢神经系统影响失神经骨折愈合的作用机制。方法将64只SD成熟雌性大鼠随机分为失神经骨折组、单纯骨折组,每组各32只。分别于术后第7、14、21、28天进行BBB评分,观察骨折愈合情况,并行左下肢骨折部位X线检查、胫骨湿重称量、骨痂体积测量,进行相关统计学分析。结果 BBB行为学评分提示两组大鼠在术后各时间点具有统计学意义(P0.05)。通过比较失神经骨折组与单纯骨折组BBB评分结果,提示在术后各时间点,失神经骨折组大鼠运动功能恢复速度明显减慢。X线片提示失神经骨折组大鼠骨折处有大量骨痂生成,且愈合速度明显加快。在术后7天,两组大鼠胫骨湿重称量、骨痂体积测量则无统计学意义(P0.05),而在术后14至28天,失神经骨折组与单纯骨折组相比,胫骨湿重称量、骨痂体积测量分别具有统计学意义(P0.05),提示在失神经骨折中晚期会生成过量骨痂。结论中枢神经系统在骨折愈合中起重要的调节作用,完整的神经支配是骨折愈合的必要条件。     

成年大鼠脊髓损伤后内源性神经前体细胞的增殖与分化规律的研究

目的观察成年大鼠脊髓损伤后内源性神经前体细胞的增殖与分化,探讨内源性神经前体细胞的自然变化规律。方法制作脊髓压迫损伤模型,Brdu腹腔注射标记神经前体细胞,免疫荧光法(Immunofluoreseence)检测大鼠脊髓Brdu、GFAP、MBP阳性细胞数的变化。结果 1)正常组可观察到少量Brdu阳性细胞,脊髓损伤后Brdu阳性细胞显著增加(p0.05),并在第7天达到最大值,21天时仍高水平表达。2)正常组可见少量Brdu/GFAP和Brdu/MBP阳性细胞,脊髓损伤后Brdu/GFAP,Brdu/MBP双标阳性细胞数显著增加(p0.05)。结论脊髓损伤后神经前体细胞的数量在第7天达到最大值,我们认为,一周内可能是神经前体细胞增殖分化调控的关键时期。此外,新生星形胶质细胞和少突胶质细胞大量增殖,并与神经前体细胞的迁移、后肢功能恢复表现出一定的同步性,提示新生胶质细胞可能参与了脊髓损伤后神经功能的修复作用。     

肉毒毒素A对大鼠慢性神经源性疼痛镇痛作用的研究

目的观察肉毒毒素A(BoNT-A)对L5、L6脊神经结扎引起慢性神经源性疼痛模型大鼠行为学的影响。方法建立Wistar大鼠左侧L5、L6脊神经结扎模型(SNL模型)。SNL模型大鼠随机分为3组(n=8)。1)实验组:SNL术后第3天同侧足底皮下注射BoNT-A30U/kg;2)对照组:SNL术后同侧足底皮下注射相同容积生理盐水;3)假手术组:仅暴露而不结扎L5和L6脊神经。均分别测定术前、给药前、给药后1d、3d、5d、7d、14d、21d的机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)。结果实验组手术同侧足底皮下注射BoNT-A可以增加大鼠的MWT和TWL,实验组手术对侧、对照组、假手术组应用BoNT-A对MWT和TWL无影响。结论足底皮下注射BoNTA能够改善SNL模型大鼠手术同侧肢体的MWT和TWL,有镇痛作用。     

外源性干细胞因子对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦Cajal细胞的影响

目的探讨外源性干细胞因子（SCF）能否改善糖尿病胃轻瘫（DGP）大鼠胃窦Cajal细胞（ICC）的异常病变。方法sD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组腹腔注射链脲佐菌素（STZ）50mg／kg并高糖高脂饲料不规律喂养构建DGP模型,对照组腹腔注射等量生理盐水并普通饲料规律喂养。成模后随机分为糖尿病组（DM组）、糖尿病＋外源性干细胞因子治疗组（DM＋SCF组）;DM＋SCF纽腹腔注射SCF0．4ug／（kg·d）,共15天,对照组和DM纽每天腹腔注射等量的磷酸盐缓冲液（pH=7．4）。RT-PCR、Wester Dblot检测胃窦组织中SCF及c—kit的mRNA及蛋白表达;免疫组化、透射电镜观察胃窦组织中Cajal细胞的变化。结果DM组大鼠胃窦组织SCF及c—kit的mRNA及蛋白表达下降,Cajal细胞数量减少,细胞内线粒体肿胀、内质网扩张;予外源性SCF干预后,胃窦组织中SCF及C—kjf的mRNA及蛋白表达上调,caial细胞数量增多、超微结构明显改善。结论外源性SCF能在一定程度上改善或逆转糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦Cajal细胞的异常病变：     

Excitability changes during paradoxical sleep in the rat

Résumé Le passage de la phase de sommeil avec ondes lentes à la phase ?paradoxale? et souvent aussi du sommeil paradoxal à l'éveil, sont accompagnés chez le rat d'un commencement ou d'une accentuation de l'activité dite ?spindling? dans l'écorce. Des changements phasiques de la fréquence des ondes ϑ dans l'hippocampe se produisirent pendant les périodes paradoxales. Nous n'avons pas remarqué de corrélations entre ces phénomènes.

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This work was supported in part by the US Public Health Service (grant NB-01883) and in part by the US Air Force Office of Scientific Research (grant AF-AFOSR 246-63).     

大鼠骨髓内皮祖细胞分离与体外培养条件研究

目的 探讨大鼠骨髓单个核细胞的最佳分离方法,观察不同培养条件对内皮祖细胞的生长情况、抗原表达的影响.方法 健康SD大鼠水合氯醛麻醉后断尾放血,从其骨髓中分离单个核细胞,重悬于添加不同条件培养基中,分别在预涂或未涂FN的培养瓶中进行培养,记录细胞贴壁情况、集落生成时间和数量及细胞特异性抗原的表达.结果VEGF诱导是内皮祖细胞生长分化的必需条件,在2～10 ng/mL之间,浓度越高,其对骨髓单个核细胞诱导分化的能力越强;bFGF能够协同VEGF诱导分化的作用;纤连蛋白能够明显促进骨髓单个核细胞贴壁.贴壁细胞均表迭内皮祖细胞和内皮细胞的特异性标志,各组之间没有明显差异.结论 大鼠骨髓中单个核细胞可以诱导分化为内皮祖细胞,VEGF(10 ng/mL)、bFGF(4 ng/mL)和纤连蛋白组合更有利于内皮祖细胞的增殖分化.     

外源性干细胞因子对糖尿病胃轻瘫大鼠胃动力的影响

目的 探讨外源性干细胞子(Stem cell factor,SCF)对糖尿病胃轻瘫大鼠(diabetic gastroparesis,DGP)胃电及胃阻抗的影响.方法 30只SD雄性大鼠随机分为实验组和对照组,实验组采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ) 50 mg/kg并高糖高脂饲料喂食建立DGP模型;成模后随机分为糖尿病组(DM组,n=8)、糖尿病+外源性干细胞因子治疗组(DM+ SCF组,n=8);DM+ SCF组腹腔注射SCF 0.4 ug/(kg·d),共15天,对照组和DM组每天腹腔注射等量的磷酸盐缓冲液(pH=7.4).阻抗式胃动力系统检测大鼠胃动力和同步胃电,透射电镜观察胃窦平滑肌细胞超微结构的变化.结果 DM组大鼠胃电节律紊乱,胃电主功率百分比较对照组显著降低(P＜0.01);DM组大鼠阻抗主功率百分比明显降低(P＜0.01),阻抗胃动过缓功率百分比明显升高(P＜0.01);DM大鼠予SCF干预后,胃电、胃阻抗主功率百分比均有所改善(p ＜0.01;P＜0.05);DM组大鼠胃窦平滑肌细胞胞核肿胀、肌浆网、内质网扩张,部分细胞胞质内细胞器溶解、消失;DM组大鼠予SCF干预后胃窦平滑肌细胞超微结构改善,电镜下仅见平滑肌细胞胞核轻度肿胀,密斑、密体、肌丝稍减少,余细胞器未见明显异常改变.结论 外源性SCF能显著改善DGP大鼠的胃电,并能部分改善其胃蠕动,其机制与胃窦平滑肌结构的改善有关.     

冷冻干燥法保存人骨髓间充质干细胞的实验初探

尝试用冷冻干燥法来保存骨髓间充质干细胞.通过差示扫描量热仪(DSC)测量样品玻璃化转变温度,从而科学确定冻干工艺温度,合理设计冷冻干燥工艺,实验实现了以30％ PVP、20％海藻糖为保护液的骨髓间充质干细胞的冻干保存,其复水率达(55.2±7.66)％.该研究对解决现有的hBM-MSCs的保存瓶颈具有一定的参考价值.     

MSCs定向诱导移植修复关节软骨的实验研究

目的 用组织工程方法修复软骨损伤.方法 兔骨髓间充质干细胞体外扩增诱导分化后,移植于兔关节损伤区,术后进行大体及x线观察.结果 实验组移植8周后,软骨损伤区由透明软骨样组织填充,软骨修复良好.结论 自体间充质干细胞移植可修复关节软骨损伤.     

无血清分离人结直肠癌细胞的体外培养形态及标志物表达特征

目的探讨人结直肠肿瘤干细胞在体外分化过程中细胞形态和干细胞相关标志物CD133的表达变化,为进一步研究结直肠肿瘤干细胞分化走向提供实验依据。方法取来源于人结直肠癌的细胞系HCT116,无血清培养分离出CD133+细胞,加血清诱导分化,相差显微镜下观察其形态变化;在未分化状态下无血清培养第7天和14天与血清诱导分化后收集细胞,利用流式细胞仪检测干细胞标志物CD133的表达量,采用激光共聚焦检测CD133表面标记分子的表达。结果 1)细胞形态:无血清培养分离的CD133+细胞,在生长过程中聚集成规则的细胞球,血清诱导后即贴壁生长,贴壁形态与同来源细胞形态一致,且再次无血清悬浮培养后聚集成球稳定生长。2)标志物变化:结直肠肿瘤干细胞未分化时CD133表面标记分子高表达,流式细胞仪检测未分化细胞CD133第7天表达率为(20.4±0.52)%,第14天表达率为(78.5±2.80)%,分化后表达率为(0.50±0.17)%。结论细胞形态和标志物表达改变均表明高表达CD133+的HCT116结直肠癌肿瘤干细胞可定向分化为同源的结直肠癌细胞,CD133+细胞经血清诱导后表达下调而使细胞失去干细胞特性。     

脊髓损伤患者骨髓间质干细胞形态学观察

目的骨髓间充质干细胞具有自我复制能力,可以经过不可逆的终末分化过程产生子代细胞,其潜在的多向分化潜力以及可作为细胞治疗这一特点,极有可能成为组织工程较为理想的种子细胞.本实验是对脊髓损伤患者骨髓间充质干细胞形态学观察.方法抽取脊髓损伤患者的骨髓,经密度梯度离心分离、纯化和培养,观察原代和传代细胞的细胞形态.结果原代培养的BM-MSCs最佳的贴壁时间为3 d,生长性状不一,呈散在圆形细胞群、克隆圆形细胞群、散在梭形细胞群、花带状细胞群、旋涡状细胞群,而传代培养的细胞,增殖速度较快,性状一致,排列规则,呈饱满的梭行.结论体外非诱导培养的BM-MSCs方法可能为临床治疗脊髓损伤患者提供种子细胞.     

人结肠癌CW-2干细胞获取方法研究

目的运用3种不同的方法分离纯化人结肠癌CW-2干细胞,并对其分离纯化效率进行比较,探讨获得癌干细胞的有效方法。方法采用单纯无血清悬浮培养、无血清悬浮培养联合化疗药物、流式细胞分选技术分别富集人结肠癌细胞株CW-2干细胞;然后运用流式细胞术、NOD—SCID小鼠致瘤实验和Transwell侵袭实验分析比较3种方法的富集效率。结果无血清悬浮培养细胞．无血清悬浮培养联合化疗药物处理细胞和流式细胞仪分选技术分选后细胞中具有结肠癌干细胞特性的CD44＋EPCAM_细胞分别为（59．39±4．55）％、（74.36±6．78）％、（86．43±8．43）％;3群细胞的成瘤能力和侵袭能力都存在显著统计学差异（P值〈0．05）：流式细胞分选技术分选后细胞〉无血清悬浮培养联合化疗药物处理细胞〉单纯无血清悬浮培养细胞。结论流式细胞分选技术富集癌干细胞的能力强于单纯无血清悬浮培养和无血清悬浮培养联合化疗药物,无血清悬浮培养联合化疗药物又强于单纯无血清悬浮培养。