高迁移率族蛋白HMGB4的表达及多克隆抗体的制备

高迁移率族蛋白B4(high mobility group box,HMGB4)是HMGB家族的新成员,研究表明其可能在睾丸发育和精子发生等方面发挥重要作用.为进一步研究HMGB4的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行his-HMGB4融合蛋白表达载体的构建.序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),...     

猪视黄醇及视黄酸结合蛋白基因的几个内含子的克隆测序

视黄醇及其具生理活性的代谢产物在动物的视觉、生长、繁殖、细胞的分化及胚胎发育等方面起重要作用.本研究对猪细胞视黄醇结合蛋白基因2（CRBP2）的内含子3,猪细胞视黄醇结合蛋白基因7（CRBP7）的内含子2,猪血浆视黄醇结合蛋白基因4（RBP4）的内含子2、3,猪细胞视黄酸结合蛋白基因2（CRABP2）的内含子2进行了克隆测序,为这些基因的结构及其功能的深入研究奠定了一定的基础.     

斑马鱼HAS2基因的克隆、抗体制备及分析

HAS2是斑马鱼心脏发育的一个标志基因,为了利用斑马鱼动物模型进一步研究HAS2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼HAS2基因的片段.将所得的片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并将重组质粒(pGEX-4T-1-HAS2)转化大肠杆菌(E.coli)BL21,IPTG诱导表达GST-HAS2融合蛋白;通过尿素洗涤沉淀蛋白并切胶回收纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blot检测抗体活性.生物信息学分析结果表明:斑马鱼HAS2基因的开放阅读框含有1658 bp,编码552个氨基酸;SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约为4.5×104;Western blotting分析表明,制备的抗体具有良好的特异性.     

黄芪甲苷对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡相关蛋白表达的影响

观察不同剂量的黄芪甲苷(As-Ⅳ)在体外对非小细胞肺癌(A549)细胞的生长、凋亡等方面的影响,探讨黄芪甲苷抑制A549细胞增殖、促进凋亡的可能分子机制。实验结果表明,As-Ⅳ作用24 h后,肺癌细胞A549的增殖明显受到抑制,具有剂量依赖性。A549细胞中的E-cadherin蛋白表达呈药物浓度依赖性上调,Vimentin蛋白表达下调。经As-Ⅳ作用24 h后的A549细胞,其胞质蛋白Bax/Bcl2表达水平高于对照组,同时As-Ⅳ也促使Caspase-3裂解为cleaved Caspase-3。黄芪甲苷在体外能抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移并诱导其凋亡,其机制可能是通过抑制NEDD4/PTEN通路而激活并促进Bax表达的实现。该发现为临床上治疗非小细胞肺癌提供了有意义的实验依据。     

定向迁移细胞前沿Rac局部化激活的分子调控

提出构想:当α4胞内区域磷酸化而抑制其与paxillin结合时,paxillin、GIT1与PIX、PAK形成信号分子复合物.由于PIX为Rac的转换分子,PAK为Rac的效应分子,构成了paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路,从而促使Rac在细胞前沿持续地局部化激活,导致片状足的形成,产生细胞向前扩展推动力.研究结果表明,GIT1与paxillin、PIX在活细胞中均存在强烈的相互作用,且这种相互作用可发生在细胞前沿.由于Rac的转换因子PIX(PAK-interacting exchange factor)在活细胞中往往与PAK相伴而行,因而,在细胞前沿,必定存在paxillin-GIT1-PIX-PAK的信号转导通路.在纤粘蛋白(fibronectin)刺激下,整合素α4诱导Rac蛋白处于激活状态(GTP-bound).     

Talin:细胞黏附动力学过程的关键蛋白

持续、协调的细胞黏附的形成、解体过程,对细胞转移是必不可少的,Talin蛋白在其中起至关重要的作用.介绍了细胞黏附的类型、功能,重点阐述了Talin蛋白的结构、与其他黏附组成蛋白的相互作用,以及在黏附的形成、解体过程中的重要地位,从而明确了Talin蛋白为细胞黏附动力学过程的关键蛋白.     

溶胶—凝胶法制备石英玻璃

用溶胶-凝胶法将Si(OC_2H_5)_4在催化剂的作用下水解聚合成凝胶。测定了凝胶的粘度变化、热重分析、差热分析、松密度和红外吸收光谱。并对不同条件下溶液的胶凝时间做了测定,探讨了水解-聚合-干凝胶-石英玻璃的转变过程.     

Fn和RGD对人支气管上皮细胞损伤修复的影响

为探讨纤维连接蛋白(Fn)、精-甘-天冬氨酸肽(RGD)对人支气管上皮细胞(BEC)损伤修复的影响,用永生化人BEC进行培养,将培养细胞分为7组:1.对照组;2.臭氧(O3)应激组;3.O3 EGF组;4.O3 Fn组;5.O3 RGD组;6.O3 Fn 钙调素抑制剂W7组;7.O3 Fn 蛋白酪氨酸激酶抑制剂Genestin组,分别测定各组的损伤修复指数(RI),利用计算机图像分析软件对数据进行处理和比较.结果发现O3应激组的损伤修复指数显著低于对照组(P<0.01),O3 EGF组、O3 Fn组和O3 RGD组损伤修复指数则显著高于O3应激组(P<0.01),Fn的促损伤修复效应可被W7和Genestin阻断(P<0.01).该实验表明EGF,Fn和RGD对BEC的损伤后修复有保护作用,Fn的作用机制可能与酪氨酸磷酸化途径和钙调素途径有关.     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3的研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(Cyclin dependent kinase inhibitor 3,CDKN3)属于激酶抑制因子CIP/KIP基因家族成员,是一种细胞周期调控因子.在各个组织中,CDKN3作用的蛋白不同,进而发挥不同的作用.一方面,CDKN3可通过抑制P21转录,促进DNA复制与细胞增殖;另一方面,CDKN3能够将CDC2 Thr~(161)去磷酸化,来抑制有丝分裂间期G1期向S期的转化,进而影响细胞周期的发展,同时CDKN3可与Mps1结合调节中心体数量.越来越多的研究发现,CDKN3的异常表达和调节细胞周期的机制对癌症的发生有重要作用.在肝癌、前列腺癌、乳腺癌等细胞中CDKN3表达量高于正常水平,但在脑胶质细胞瘤、慢性粒细胞白血病等细胞中CDKN3呈低表达.主要针对CDKN3基因的结构及其编码蛋白的功能展开综述.     

过渡金属香兰素配合物的固相合成

在室温下,由过渡金属醋酸盐与香兰素(HL,C8H8O3)直接进行一步固相反应合成了5种配合物[ML2(H2O)2](M=Mn,Co,Ni,Cu,Zn)1~5,用XRD、元素分析、摩尔电导、红外光谱、热分析方法进行表征.中心金属离子M(II)与2个香兰素基中的酚羟基氧和甲氧基氧的4个氧原子以及2个水分子中的2个氧原子发生配位,形成分子配合物,配位数为6.     

利用蛋白质组学技术研究拟南芥隐色素突变体cry 1的差异表达蛋白

隐色素是一类蓝光受体蛋白,在动植物中调节各种光反应.在拟南芥中隐色素是核蛋白,通过蓝光调节控制下胚轴的伸长,子叶的延展,光周期诱导开花以及生物钟.拟南芥隐色1(CRY1)是一种蓝光受体,主要调节下胚轴的伸长,但CRY1下游的光化学反应仍然不清楚.拟南芥隐色素突变体cry1-304和野生型col-4在蓝光条件下,经过7 d的生长,cry1-304的下胚轴的长度比野生型col-4的下胚轴长.为了弄清楚拟南芥蓝光受体隐色素在调节植物生长发育中的机制,采用双向电泳这种蛋白质组学的方法来分离对比cry1-304和野生型col-4在蛋白水平的表达变化.选取了15个差异蛋白质点,采用MALDI-TOF-TOF-MS进行肽质谱指纹图分析,其中10个蛋白质点得到鉴定和分析,它们包括一些普通酶、氧化还原酶、转录因子、结合蛋白、热休克蛋白等.     

滇产百日青的化学成分研究

滇产百日青(Podocarpus neriifolius D.Don)叶的甲醇提取物经硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析以及反相柱层析等分离方法反复分离纯化得到5个化合物.根据波谱数据分别鉴定它们的结构为异香草醛(isovanillin)(1)、对羟基苯甲酸(4-hydroxybenzoic acid)(2)、原儿茶酸(protocatechuic acid)(3)、松甾酮A(ponasterone A)(4)、stigmast-5-ene-3β,7α-diol(5).其中化合物(1)、(3)、(4)、(5)为首次从该植物中分离得到.     

溶胶凝胶-水热法制备柱状纳米羟基磷灰石

以P2O5,Ca（NO3）2·4H2O为原料,无水乙醇为溶剂,通过调节pH值控制凝胶的形成,利用溶胶-凝胶/水热法制备纳米羟基磷灰石（HAP）.通过XRD、FTIR、SEM等检测手段,对凝胶燃烧产物和经水热处理后的粉体相组成、形貌进行分析,并在此基础上分析HAP晶体形成的原因.结果表明：利用溶胶-凝胶经低温燃烧/水热后形成主晶相为纳米级的柱状HAP晶体（100×1800 nm）.     

Aberrant expression of nuclear matrix proteins during HMBA-induced differentiation of gastric cancer cells

AIM: To investigate the aberrant expression of nuclear matrix proteins in human gastric cancer cells before and after hexamethylene bisacetamide (HMBA) treatment.METHODS: Proteomics analysis of differential nuclear matrix proteins was performed by two dimensional electrophoresis polyacrylamide gel electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry.The expression levels of three nuclear matrix proteins were further confirmed by Western blotting and their location...     

海南青梅中白藜芦醇类化合物及其抗肿瘤活性研究

在活性追踪指导下,综合运用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等分离技术,从海南青梅茎乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到4个白藜芦醇类化合物.根据ESIMS、NMR波谱数据结合理化性质,并通过与文献对照,鉴定化合物的结构分别为：diptoindonesin G（1）,（＋）-ε-viniferin（2）,hopeahainol（3）和hopeahainol C（4）,化合物1为首次从该属植物中分离得到.抗肿瘤活性表明,化合物1对小鼠黑色素瘤细胞（B16F10）和人肺腺癌细胞（A549）均具有微弱的增殖抑制活性,IC50值分别为36.1,20.4μM.     

一株红树尖瓣海莲内生真菌Penicillium sp.次级代谢产物及其生物活性研究

采用活性追踪分离的方法,综合运用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析等,从红树尖瓣海莲（Bruguiera sexangula var.rhynchopetala）来源的一株青霉属真菌Penicillium sp.（3126）的发酵产物中分离鉴定了5个化合物.根据理化性质和NMR波谱方法等,并通过与文献对照,鉴定出化合物的结构分别为：麦角甾-22-烯-3β-醇（ergosta-22-triene-3β-ol）（1）,麦角甾-5,7,22--烯-3β-醇（ergosta-5,7,22-triene-3β-ol） （2）,过氧化麦角甾醇（ergosterol peroxide）（3）,对羟基苯甲酸（4-hydroxybenzoic acid）（4）和对羟基苯甲醛（4-hydroxybenzaldehyde） （5）.以上化合物均为首次从尖瓣海莲内生真菌中分离得到.活性测试表明,甾体类化合物1、苯衍生物4和5都具有较强的卤虫致死活性.     

配合物[Cu(phen)(BIP)](ClO_4)_2与CT-DNA的相互作用

用紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、粘度法和循环伏安法等方法研究了铜(Ⅱ)配合物[Cu(phen)(BIP)](ClO_4)_2(phen = 1,10-邻菲咯啉;BIP = 2-(3′,4′-亚甲二氧基苯基咪唑并[4,5-f]-1,10-邻菲咯啉)]与小牛胸腺DNA (CT-DNA) 的相互作用.结果表明:配合物与DNA的作用模式为插入方式,与DNA的键合常数为1.06×10~5 L·mol~(-1).     

阿霉素对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

观察阿霉素对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用.采用台盼蓝拒染法测定细胞生长抑制率,计算半数抑制质量浓度值;采用DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测细胞凋亡,倒置显微镜观察细胞形态结构的变化;采用流式细胞仪检测阿霉素对细胞周期的影响,探讨阿霉素对SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响.结果表明,阿霉素对SGC-7901细胞具有抑制作用,IC50为5.7μg.mL-1;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯形条带,倒置显微镜观察显示,阿霉素能抑制细胞增殖,可致细胞形态学改变,出现明显的凋亡形态学特征,流式细胞仪检测出现凋亡峰.说明阿霉素能明显抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖,并能诱导其凋亡.     

扁枝石松生物碱成分的研究

云南西双版纳产扁枝石松(Diphasiastrum complanatum L.)干燥全草用甲醇提取,利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析和反相柱层析进行化学成分分离纯化,从中分离得到6个Lycopodine型生物碱化合物,根据现代波谱技术和理化性质对化合物结构进行鉴定,鉴定结构为:6β-hydroxylycopodine(1),lycopodine(2),6α-hydroxylycopodine(3),4α-hydroxylycopodine(4),lycoclavine(5),15α-methyl-lcopodane-5β,6α-diol(6).以上化合物均为首次从西双版纳产扁枝石松中分离得到.