桑青枯病病原G12-9内切葡聚糖酶基因的克隆和分类

桑青枯病是一种土传性细菌病害,从广东省桑园发生青枯病的桑树根部分离得到1株病原菌G12-9;经鉴定确定该菌为青枯菌(Ralstonia solanacearum),该病原菌在TZC固体培养基上呈圆形及不规则圆形,菌落中央呈现淡红色,革兰氏染色成阴性。对G12-9分离株内切葡聚糖酶基因的克隆、序列测定及聚类分析结果表明,桑青枯菌G12-9内切葡聚糖酶属于糖基水解酶家族12。青枯菌最重要的致病性分泌系统为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型分泌系统,内切葡聚糖酶属于细菌Ⅱ型分泌系统,内切葡聚糖酶对于青枯菌的定植及寄主植物的致病性有着非常重要的作用,明确该酶在糖基水解酶家族的分类地位对桑青枯病的防治具有重要意义。
     

β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

利用PCR方法从一株短小芽孢杆菌H9克隆了编码葡聚糖内切酶的基因（该序列已经被已收录于GeneBank,登录号为EF620915）,序列分析表明该基因读码框为1980bp,编码659个氨基酸。预测的酶由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,第二个结构域为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成。将基因构建在大肠杆菌表达载体pET20b中得到重组质粒pET20b-EglA,将重组载体转化至大肠菌株BL21(DE3)菌株,基因在大肠杆菌中得到了良好的分泌表达, SDS-电泳图谱表明酶的分子大小约为73KD。     

巨大芽孢杆菌AP25内切葡聚糖酶基因的克隆及序列测定

从土壤中分离到一株产纤维素酶的巨大芽孢杆菌AP25,经羧甲基纤维素平板检测,该菌可产生葡聚糖内切酶。根据GenBank登录的β-1,4内切葡聚糖酶基因（DQ782954．1,M28332．1,AY859492．1）的同源性序列,利用PCR方法克隆到该酶的基因,并对其进行测序。测序结果显示其全长为1500bp,推测其含499个氨基酸。与GenBank中的已知葡聚糖内切酶相比较,发现该酶的氨基酸序列与Bacillus subtilis的β-1,4内切葡聚糖酶基因同源性达到达94％。     

β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达

从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌菌株H9中,克隆到了编码葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,转化至大肠杆菌菌株BL21（DE3）中进行表达,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测.实验结果表明：该基因大小为1980bp,共编码659个氨基酸,在大肠杆菌中得到了良好的分泌表达;该酶的相对分子质量约为73000,由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,其二为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成,其在不同温度和pH值下的活力和稳定性与原始菌株的比较接近.     

抗番茄青枯病内生拮抗细菌的筛选及室内防效测定

从健康番茄体内分离到了93株内生细菌。采用含菌平板抑菌圈测定法，筛选出了3株对番茄青枯菌具有较强拮抗力的细菌菌株ZB—1、ZB-2和ZB-6。温室盆栽防病试验结果表明，内生细菌菌株ZB-6对植株进行预处理后，番茄青枯病防病效果可达63—65％，说明该菌株对番茄青枯病发生具有较好预防效果。     

纤维素酶制剂中葡聚糖纤锥二糖水解酶活力的测定

根据真菌纤维素酶系中β-葡聚糖纤维二糖水解酶,内切β-葡聚糖酶以及纤维二糖酶在棉纤维上吸附和脱吸附性质的不同,拟订了一种可选择性地测定β-葡聚糖纤维二糖水解酶活力的方法。β-葡聚糖纤维二糖水解酶强烈吸附于棉纤维上,而且不为1 mol/L,pH4.8的醋酸缓冲液所洗脱;只有部分内切β-葡聚糖酶为棉纤维所吸附,但在上述条件下可完全被洗脱。纤维二糖酶不被吸附。在此基础上,再借助β-葡聚糖纤维二糖酶与内切β-葡聚糖酶的协同作用,可在后者过量存在的条件下,定量测定β-葡聚糖纤维二糖水解酶活力。用两种商品纤维素酶制剂验证了本方法的可靠性。     

青海柯柯盐湖16株细菌的ARDRA筛选及系统发育初步分析

 从青海柯柯盐湖泥样中分离的16株细菌,用2种限制性内切酶酶切进行ARDRA分析,其中12株菌的酶切带谱有较大差异.根据这12株菌的16SrDNA序列进行系统发育分析结果表明,12株菌有11株分布于芽孢杆菌科中的Halobacillus,Gracibacillus,Amphibacillus,Virgibacillus,Bacillus,Salibacillus和1个潜在的新属中,另1株属于Proteobacteria的Gamma亚群Halomonadaceae科,Halomonas属.而且16SrDNA系统发育分析提示这些菌株中存在3个新种和1个新属的可能.本研究得出的结论为:应用ARDRA来初步筛选菌株是可行的;青海柯柯盐湖这一极端环境中存在较丰富的新的芽孢菌种类.     

长春南湖水耐冷菌的筛选及其产酶特性

采用低温环境下的南湖湖水为样品,稀释后涂布平板进行富集培养,并进行细菌菌落形态及生理生化性质测定.实验共培养出耐冷菌35株,包括细菌14株,真菌21株.其中细菌分属于乳杆菌属、葡萄球菌属、糖球菌属、放线菌属;真菌分属于霉菌和酵母菌.分离的菌种能产生多种大分子物质水解酶类,包括氧化酶、接触酶、淀粉水解酶、明胶酶等,并且大...     

内切葡聚糖酶基因克隆和表达研究进展

纤维素酶包括外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。内切葡聚糖酶是纤维素酶的重要组分之一,它在能源、纺织、饲料、食品和造纸等行业具有重要的应用。对内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌、酵母和丝状真菌中的克隆和表达进行概述,为内切葡聚糖酶基因工程菌的构建和内切葡聚糖酶的应用提供理论依据。     

产酶苦豆子内生细菌筛选及其活性菌株鉴定

对苦豆子健康植株和种子内的内生细菌进行分离,共分离获得41株内生细菌.对41株菌株进行了分泌胞外淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶特性的研究.结果表明,有80.5%的菌株具有蛋白酶活性;有78.0%和61.0%的菌株具有淀粉酶和纤维素酶活性;具有几丁质酶和葡聚糖酶活性的菌株则较少.经16SrRNA基因序列分析鉴定,6株高活性产酶菌株与枯草芽孢杆菌属(Bacillus subtilis)、韩国丛毛假单胞菌(Pseudomonas koreensis)、固氮阴沟肠细菌(Enterobacter cloacae)、苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)和嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)亲缘关系较近,核苷酸序列一致性在98%以上.     

蜡状芽孢杆菌对番茄青枯雷尔氏菌致病性的影响

青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）从其致病性上可分为能使植株发病的强致病力菌株和不能使植株发病的弱致病力菌株．利用蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）与致病性稳定的青枯雷尔氏菌强致病力菌株进行共培养，处理后的青枯雷尔氏菌在TTC平板上表现为弱毒株的菌落特征，出现了致弱现象．经过16S rDNA基因序列测定，证明了用蜡状芽孢杆菌处理前后的菌株为青枯雷尔氏菌，并非是其它的污染菌株，通过回接番茄盆栽苗发现致弱前的青枯雷尔氏菌能有效引起番茄发生青枯病，而致弱后的菌株丧失致病力．不能引起番茄发病，     

植物青枯菌检测方法研究进展

细菌性青枯病是由青枯菌引起的一种植物毁灭性病害,在世界各地都有不同程度的分布.在介绍青枯菌种内分类状况的基础上,重点对青枯菌的检测方法包括传统分离培养法、免疫学技术和分子生物学方法等进行了概括,比较了这些方法在应用中的优缺点,并对青枯菌检测方法的选择进行了探讨.     

Genome sequence of the plant pathogen Ralstonia solanacearum

Ralstonia solanacearum is a devastating, soil-borne plant pathogen with a global distribution and an unusually wide host range. It is a model system for the dissection of molecular determinants governing pathogenicity. We present here the complete genome sequence and its analysis of strain GMI1000. The 5.8-megabase (Mb) genome is organized into two replicons: a 3.7-Mb chromosome and a 2.1-Mb megaplasmid. Both replicons have a mosaic structure providing evidence for the acquisition of genes through horizontal gene transfer. Regions containing genetically mobile elements associated with the percentage of G+C bias may have an important function in genome evolution. The genome encodes many proteins potentially associated with a role in pathogenicity. In particular, many putative attachment factors were identified. The complete repertoire of type III secreted effector proteins can be studied. Over 40 candidates were identified. Comparison with other genomes suggests that bacterial plant pathogens and animal pathogens harbour distinct arrays of specialized type III-dependent effectors.     

平菇黄腐病病原菌分离与鉴定

本实验主要是对平菇黄腐病病原菌进行研究。从感染黄腐病的平菇幼菇子实体中分离得到2种具平板生长优势的革兰氏阴性杆状细菌(编号为G1和G2),通过对平菇子实体回接感染实验,发现细菌G1感染的平菇子实体病灶与自然感染的黄腐病状况一致,因此认为该菌就是导致平菇黄腐病的主要病原菌。经采用传统的生理生化实验与16s rDNA序列分析以及Biolog微生物自动鉴定系统分析鉴定,确定该菌为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。     

植物内生菌Bacillus spp.与松材线虫病的关系研究

松材线虫病是重要的森林病害,其致病机理还没有完全研究清楚.从马尾松健康树和松材线虫病树中分离到属于芽孢杆菌Bacillus spp.的植物内生菌,此菌及其代谢产物对断根松苗和离体松枝均有致病作用,且致病症状与松材线虫病类似,但对正常生长的松苗没有作用.这说明这种植物内生菌与松材线虫病有关,是一种弱致病菌.用1 mmol/L的苯甲酸溶液处理接种了松材线虫的松枝,松枝内的线虫照常增殖,但松材线虫病得到抑制.这说明植物内生菌是导致松材线虫病的内因,松材线虫是激发因子之一.     

Effective removal of microcystins using carbon nanotubes embedded with bacteria

Adsorption of microcystins (MCs) by carbon nanotubes (CNTs) and clay materials was studied. Compared with various clays tested, CNTs showed a much stronger ability to adsorb MC-RR and LR that were two typical types of microcystins found in China. At initial 21.0 mg/L of MC-RR and 9.5 mg/L of MC-LR in solution, the adsorptiona mounts of MC-RR and LR by CNTs were 14.8 and 6.7 mg/gthat were about five times higher than those by the clay materials of sepiolite, kaolinite and talc, et~ In the presence of CNTs and the bacterial Ralstonia solanacearum that was firstly isolated and used for the biodegradation of MCs by the authors, a remarkable removal of MCs from water were observed. The mechanism was that CNTs could absorb large amount of both MCs and the embedded R. solanacearum so that, even when diluted by a large amount of water, the concentrations of both organic pollutants and the added bacteria could be largely enhanced on the surface of CNTs where a concerted biodegradation reaction was effectively conducted. This finding could be important for the further development of practical techniques to eliminate MCs from polluted drinking waters.     

分光光度计法测定不同分离源青枯雷尔氏菌菌液浓度

[目的]准确测定青枯雷尔氏菌的菌液浓度。 [方法]选用胰蛋白胨大豆肉汤培养基和生理盐水为稀释液稀释青枯雷 尔氏菌 ＲｓＡ(烟草分离源)和 ＲｓＢ(番茄分离源)菌悬液,利用血球计数板计数法测定菌悬液浓度,并利用分光光度计法测定菌 悬液在 ６００ ｎｍ 处的吸光度值,建立青枯雷尔氏菌菌悬液浓度与吸光度值间的线性关系。 [结果]线性回归方程表明:胰蛋白 胨大豆肉汤培养基和生理盐水作为稀释液测定菌悬液浓度结果差异无统计学意义(Ｐ>０.０５),但 ＲｓＡ 和 ＲｓＢ 菌悬液的吸光度 值具有差异,回归方程分别为 ｙ ＝ ６.５７８ ４ｘ＋０.１５８ ２８(ｒ２ ＝ ０.９９８ ９９)和 ｙ ＝ ５.１６２ ７ｘ－０.１２５ ８２( ｒ２ ＝ ０.９９８ ９９),回归方程间斜率和 截距均差异有统计学意义(Ｐ<０.０１)。 [结论]建立的青枯雷尔氏菌的菌液浓度标准曲线可用于测定吸光度值后快速计算不同 分离源青枯雷尔氏菌菌悬液浓度,且无需将菌悬液培养基置换为生理盐水进行吸光度测定,具有一定的便捷性和实用性。     

湖北省桑萎缩病研究初报

通过对症状和病原的形态观察,证明了2003年湖北省远安县发生的桑萎缩病为黄化型,发病率多在10%～60%,个别田块高达90%以上;根据远安县桑种植和桑萎缩病发生的历史及其分布现状推断病源属本地原有病源,非1998年调运桑苗所致;桑萎缩病的发生与桑树品种、病源积累、媒介昆虫的密度、采伐有关;对桑萎缩病的桑叶进行超薄切片的电镜观察发现,细胞内有少量的MLO病原体,病原体为圆形,50～160nm.     

Transforming growth factor-beta induces development of the T(H)17 lineage

A new lineage of effector CD4+ T cells characterized by production of interleukin (IL)-17, the T-helper-17 (T(H)17) lineage, was recently described based on developmental and functional features distinct from those of classical T(H)1 and T(H)2 lineages. Like T(H)1 and T(H)2, T(H)17 cells almost certainly evolved to provide adaptive immunity tailored to specific classes of pathogens, such as extracellular bacteria. Aberrant T(H)17 responses have been implicated in a growing list of autoimmune disorders. T(H)17 development has been linked to IL-23, an IL-12 cytokine family member that shares with IL-12 a common subunit, IL-12p40 (ref. 8). The IL-23 and IL-12 receptors also share a subunit, IL-12Rbeta1, that pairs with unique, inducible components, IL-23R and IL-12Rbeta2, to confer receptor responsiveness. Here we identify transforming growth factor-beta (TGF-beta) as a cytokine critical for commitment to T(H)17 development. TGF-beta acts to upregulate IL-23R expression, thereby conferring responsiveness to IL-23. Although dispensable for the development of IL-17-producing T cells in vitro and in vivo, IL-23 is required for host protection against a bacterial pathogen, Citrobacter rodentium. The action of TGF-beta on naive T cells is antagonized by interferon-gamma and IL-4, thus providing a mechanism for divergence of the T(H)1, T(H)2 and T(H)17 lineages.