上海四膜虫酚溶性染色质非组蛋白的研究

收集对数生长期的上海四膜虫，分离细胞核，制备染色质并以酚抽提制得酚溶性染以质非组蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得四膜虫酚溶性染色非组蛋白有六条明显的蛋白带，其表观量为８８ＫＤ，７９ＫＤ，７０ＫＤ，５２ＫＤ，３８ＫＤ，２４ＫＤ，与鼠肝酚溶性染色质非组蛋白具有明显的５条的分子量有显著的差异。     

羟基磷灰石层析法分离染色质中组蛋白的改进方法

报道了利用氯化钠梯度洗脱，通过羟基磷灰石桩层析，从染色质中分离组蛋白Ｈ１，组蛋白Ｈ２Ａ＋Ｈ２Ｂ和Ｈ３＋Ｈ４的一种改进方法，这一过程简单，采用温和的条件，能够提供较高纯度的各种组蛋白组分。     

组蛋白甲基化酶Set2片段调控SET结构域催化活性的探讨

以酿酒酵母为研究材料,通过体外甲基化、体内免疫共沉淀等一系列实验,研究了酵母组蛋白甲基转移酶Set2片段调控SET结构域催化活性的机制。发现将SRI 结构域敲除后（1─618片段）,仅催化产生H3K36的单甲基化,将其WW结构域、CC结构域敲除后（1─475片段）,H3K36无法被甲基化。将Set2截取到仅剩SET催化结构域（1─261片段）,H3K36又可被一甲基化和部分的二甲基化修饰。研究结果表明SET结构域的催化活性并非由Set2蛋白自身折叠调控。     

Ser28磷酸化组蛋白H3在哺乳动物有丝分裂细胞中的动态分布

利用特异性抗Ser28磷酸化组蛋白H3抗体,应用间接免疫荧光标记技术,标记人乳腺癌细胞 (MCF-7)和小鼠成纤维细胞(NIH 3T3),用激光共聚焦显微术研究这两种哺乳动物细胞中Ser28磷酸化组蛋白 H3在有丝分裂过程中的动态分布,以研究Ser28磷酸化组蛋白在细胞有丝分裂过程中的作用.结果表明,Ser28 的磷酸化作用是这两种细胞有丝分裂期的特有事件.组蛋白H3的Ser28磷酸化信号首先出现在早期的核外周, Ser28磷酸化在中期达到高峰,并扩展到染色体的所有部分,后期和末期逐渐减退,随着胞质分裂的完成而消失. 实验结果表明,组蛋白H3 Ser28的磷酸化与有丝分裂染色体的凝集和解凝集过程有着时间和空间上的相关性. Ser28磷酸化使得组蛋白H3氨基末端的正电荷数降低,这可能是导致染色质变构凝集的原因之一.有丝分裂期 间组蛋白H3在Ser28位置磷酸化过程与Ser10相比有明显的差异,因此在动物细胞中,组蛋白H3氨基末端这 两个不同丝氨酸残基的磷酸化可能有不同的生物学功能.     

虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)组蛋白H3启动子的分子克隆及在稀有

使用高保真PCR方法从虹鳟鱼基因组中克隆得到虹鳟鱼组蛋白H3启动子.将虹鳟鱼组蛋白H3启动子插入启动子缺失的增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pEGFP-1中,构建成重组载体pRH3EGFP-1.通过显微注射法得到转pRH3EGFP-1稀有鮈鲫.在荧光解剖镜下,可以清楚地观察到EGFP在发育到原肠胚的转pRH3EGFP-1稀有鮈鲫中表达.在稀有鮈鲫幼体鱼苗中也可以清楚地观察到EGFP在多个组织中的泛组织表达.比较CMV启动子、鲤鱼β-actin启动子、虹鳟鱼组蛋白H3启动子的EGFP表达载体pCMVEGFP,pCAEGFP,pRH3EGFP-1在稀有鮈鲫胚胎中的表达特性,结果表明pCMVEGFP最早表达,其后为pRH3EGFP-1和pCAEGFP,表达的强度依次为pCMVEGFP＞pCAEGFP＞pRH3EGFP-1.这说明虹鳟鱼组蛋白H3启动子可以作为一种有效的启动子,应用于鲤科鱼类(如稀有鮈鲫)的转基因研究.     

绿草履虫Parameciumbursaria大核染色质组份和组蛋白的研究

绿草履虫P.bursaria是在接有产气杆菌Aerobacter aerogenes的无菌稻草提取液中进行克隆培养后取得的.在非离子去污剂NP-40(含有二价阳离子Ca~(2+),Mg~(2+))的溶液中裂解细胞,经蔗糖梯度离心分离、提纯细胞大核,并制备染色质,测定其中组蛋白、非组蛋白、DNA和RNA的相对含量.用稀酸抽提绿草履虫大核和大核染色质,得到的酸溶性蛋白(即组蛋白),经PAGE、SDS-PAGE、PAGIF和氨基酸分析等方法测定.得到的结果是:绿草履虫大核染色质中DNA:RNA∶组蛋白∶非组蛋白=1∶0.02∶1.30∶0.59;组蛋白占染色质蛋白质的68.8%;大核和大核染色质的酸溶性蛋白是相同的,都具有相当于高等动物的全组蛋白的五条组蛋白带,只在其相对含量及电泳迁移率上,与高等动物的全组蛋白略有差别;由16种氨基酸组成,20%是酸性氨基酸,不存在色氨酸和半胱氨酸;五条蛋白带的分子量为11000～21000道尔顿,也类似于哺乳动物细胞组蛋白;这是一类碱性很弱的蛋白质,等电点为pH 8.02～9.4;碱性氨基酸和酸性氨基酸的比为1.03∶1,这一点却更接近酵母全组蛋白.     

酿酒酵母组蛋白H3K14乙酰化对H3K4三甲基化的影响

首先构建酿酒酵母BY4741组蛋白H3第14位赖氨酸突变菌株,该位点突变后则不能被乙酰化.然后通过Western blot检测突变菌株和未突变菌株(对照菌株)的H3K4三甲基化.结果表明,H3K14突变菌株中未检测到H3K4三甲基化,而作为对照的未突变菌株能够检验到H3K4三甲基化修饰.该结果显示酿酒酵母组蛋白H3K14乙酰化能够对H3K4三甲基化产生影响.     

绿草履虫Paramecium bursaria大核染色质组份和组蛋白的研究

绿草履虫P.bursaria是在接有产气杆菌Aerobacter aerogems的无菌稻草提取液中进行克隆培养后取得的。在非离子去污剂NP-40(含有二价阳离子Ca~(2 ),Mg~(2 ))的溶液中裂解细胞,经蔗糖梯度离心分离、提纯细胞大核,并制备染色质,测定其中组蛋白、非组蛋白、DNA和RNA的相对含量。用稀酸抽提绿草履虫大核和大核染色质,得到的酸溶性蛋白(即组蛋白),经PAGE、SDS-PAGE、PAGIF和氨基酸分析等方法测定。得到的结果是:绿草履虫大核染色质中DNA:RNA:组蛋白:非组蛋白=1:0.02:1.30:0.59;组蛋白占染色质蛋白质的68.8％;大核和大核染色质的酸溶性蛋白是相同的,都具有相当于高等动物的全组蛋白的五条组蛋白带,只在其相对含量及电泳迁移率上,与高等动物的全组蛋白略有差别;由16种氨基酸组成,20％是酸性氨基酸,不存在色氨酸和半胱氨酸;五条蛋白带的分子量为1.1000～21000道尔顿,也类似于哺乳动物细胞组蛋白;这是一类碱性很弱的蛋白质,等电点为pH8.02～9.4;碱性氨基酸和酸性氨基酸的比为1.03:1,这一点却更接近酵母全组蛋白。     

抗纤维结合素单克隆抗体与自身抗原组蛋白免疫交叉反应的…

应用免疫扩散和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ分析证实了抗纤维结合素（ＦＮ）单克隆抗体与自身抗原组蛋白发生免疫学交叉反应。通过计算机技术进一步分析了交叉反应的分子基础。在组蛋白和ＦＮ之间有５个氨基酸序列同源性区域被发现。同源性区域与Ｐｏｌｌａｒｄ所预测的组蛋白抗原决定族相一致。根据抗原抗体反应的物理学，化学和免疫学特性，讨论了单克隆抗体与不相关抗原发生交叉反应的可能原因。包括：１．分子模拟－氨基酸序列同源     

组蛋白修饰与癫痫的发生发展研究进展

癫痫是由脑部神经元异常同步或过度放电导致的一种慢性脑部疾病。在神经系统疾病中,癫痫已成为仅次于脑血管病的第二大严重威胁人类健康的疾病,且其发病机制至今未明。表观遗传机制是调节基因表达的一种方式,其中组蛋白修饰是主要的表观遗传修饰之一。组蛋白修饰的异常与癫痫的发生发展密切相关,本文对组蛋白修饰与癫痫的关系进行综述,以期从组蛋白修饰的角度阐明两者之间的关系,为癫痫的防治提供新思路。     

大鲵鸣叫语图的初步分析

对我国特有两栖动物大鲵的自然鸣叫和电刺激中脑诱发鸣叫进行录音，然后回放至语图仪进行窄带语图分析。结果显示不同状态下的鸣叫在频率、能量和谐波方面均存在差异。     

Ser10磷酸化的组蛋白H3和微管蛋白在小麦根尖细胞有丝分裂过程中的动态分布

利用间接免疫萎光标记技术研究Ser10磷酸化的组蛋白H3和微管蛋白在小麦根尖细胞中有丝分裂过程中的动态分布情况.结果显示在小麦根尖细胞有丝分裂过程中Ser10磷酸化的组蛋白H3的出现和消失与染色体的凝集和解凝集的过程存在时空上的相关性,在有丝分裂的过程中这种蛋白在着经线粒上的定位有有助于染色体向两极移动.研究结果还表明,在有丝分裂过程中,微管蛋白发生了重组,成束的垂直排列在赤道板的两侧,协助细胞有丝分裂过程的顺利完成.     

苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的合成及其抗肿瘤活性研究

以MS-275为先导化合物,设计并合成8个苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化酶抑制剂,其结构经MS与1H-NMR确证。以MS-275为阳性对照药物,测试8个目标化合物对人乳腺癌细胞MCF-7和人肺癌细胞A549的体外抗肿瘤细胞增殖活性,结果显示,合成的8个目标化合物中有6个化合物表现出较好的抑制肿瘤的活性,尤其是化合物5a与7b对肿瘤细胞的体外抑制活性与MS-275相比有较为显著地提高,可为进一步研究提供参考。     

组蛋白修饰组合模式研究进展

核小体是染色质的基本结构单位,核小体组蛋白N末端尾部可以发生甲基化、乙酰化等多种共价修饰.组蛋白密码假设多种组蛋白修饰以组合方式发挥作用.自组蛋白密码假设被提出后,组蛋白修饰组合模式成为表观遗传学领域的重要研究内容.在染色质免疫沉淀基因芯片和免疫沉淀高通量测序等相关实验数据的基础上,多种算法被用于研究组蛋白修饰的组合.文章介绍了组蛋白修饰的发生、位点、相关修饰酶以及生物学功能,对组蛋白修饰组合以及与基因表达关系的研究进行了总结,同时对组蛋白修饰组合模式一些适用的研究方法做了概述和分析.     

Histone H2AX-dependent GABA(A) receptor regulation of stem cell proliferation

Stem cell self-renewal implies proliferation under continued maintenance of multipotency. Small changes in numbers of stem cells may lead to large differences in differentiated cell numbers, resulting in significant physiological consequences. Proliferation is typically regulated in the G1 phase, which is associated with differentiation and cell cycle arrest. However, embryonic stem (ES) cells may lack a G1 checkpoint. Regulation of proliferation in the 'DNA damage' S/G2 cell cycle checkpoint pathway is known for its role in the maintenance of chromatin structural integrity. Here we show that autocrine/paracrine gamma-aminobutyric acid (GABA) signalling by means of GABA(A) receptors negatively controls ES cell and peripheral neural crest stem (NCS) cell proliferation, preimplantation embryonic growth and proliferation in the boundary-cap stem cell niche, resulting in an attenuation of neuronal progenies from this stem cell niche. Activation of GABA(A) receptors leads to hyperpolarization, increased cell volume and accumulation of stem cells in S phase, thereby causing a rapid decrease in cell proliferation. GABA(A) receptors signal through S-phase checkpoint kinases of the phosphatidylinositol-3-OH kinase-related kinase family and the histone variant H2AX. This signalling pathway critically regulates proliferation independently of differentiation, apoptosis and overt damage to DNA. These results indicate the presence of a fundamentally different mechanism of proliferation control in these stem cells, in comparison with most somatic cells, involving proteins in the DNA damage checkpoint pathway.     

组蛋白甲基化修饰在小鼠早期胚胎发育中的建立与调控

 组蛋白修饰作为重要的表观遗传修饰,在调控胚胎基因表达、胚胎细胞的命运决定及胚胎基因组的稳定性等方面均起了很重要的作用。微量测序技术的发展使从全基因组水平上检测植入前胚胎的组蛋白修饰成为可能。综述了近年来利用该技术对小鼠早期胚胎发育过程中的组蛋白甲基化修饰研究的最新进展,总结了在胚胎基因激活及第一次细胞分化过程中组蛋白H3K4me3和H3K27me3修饰不同的建立和动态变化趋势,这些研究为探索胚胎发育和细胞分化的表观调控机制奠定了基础。     

结核分枝杆菌单克隆抗体与自身抗原组蛋自的免疫交叉反应研究

WesternBlot实验证实了结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）H37Ra的单克隆抗体与自身抗原组蛋白发生免疫交叉反应．利用计算机软件对交叉反应的分子生物学基础进行了分析,发现结核分枝杆菌H37Ra的蛋白与组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4各有一个包含3个或4个氨基酸的序列同源区域．