硫酸软骨素测定方法的研究进展

硫酸软骨素的测定方法按其测定指标主要分为软骨素二糖、氨基己糖、葡萄糖醛酸、硫酸基和阴性基团5类.比较这5种指标认为:软骨素二糖是硫酸软骨素的组成单位,与硫酸软骨素含量的相关性最高;氨基己糖和葡萄糖醛酸是组成软骨素二糖的单糖,与硫酸软骨素含量的相关性较高;硫酸基受软骨素二糖硫酸化程度影响大,与硫酸软骨素含量相关性低;阳离子染料对硫酸软骨素分子上阴性基团的选择专一性不强,阴性基团与硫酸软骨素含量的相关性很低.从准确度看,以软骨素二糖为测定指标的高效液相色谱法准确度最高,适于质量控制和微量分析;分别以氨基己糖和葡萄糖醛酸为测定基础的Elson-Morgan法和咔唑法准确度相对较高,适于一般分析;而以硫酸基和阴性基团为基础的方法准确度相对偏低.     

西归多糖含量测定方法的比较

目的：测定西归中多糖的含量。方法：用蒽酮-硫酸法及苯酚-硫酸法对西归中的多糖含量进行测定,并对两种方法的结果进行比较。结果：蒽酮-硫酸法平均加样回收率为86.6%,RSD=2.50%（n=6）。苯酚-硫酸法平均加样回收率为101.0%,RSD=2.63%（n=6）。结论：苯酚-硫酸法优于蒽酮硫酸法。     

猪鼻软骨硫酸软骨素双酶法提取工艺研究

以猪鼻软骨为原料,用双酶法提取硫酸软骨素。用酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、2号酶、脂肪酶分别与胰酶组合提取硫酸软骨素,分析不同种类酶对硫酸软骨素提取的影响。通过正交试验得到的最佳提取工艺为：料液比1：1.5,第1类酶使用碱性蛋白酶,用量为2.5%,第2类酶（胰酶）用量为1.2%,成品收率达到16.740%。     

蒽酮—硫酸法测定板栗多糖含量

采用蒽酮—硫酸法测定板栗多糖含量并对其测定条件进行优化。结果表明,蒽酮—硫酸法测定板栗多糖的适宜操作条件为:加入2g/L蒽酮—硫酸溶液4mL,在沸水浴中加热3min,自来水冷却40min后在10min内于波长600nm下读取吸光度。蒽酮—硫酸溶液需要现配现用。多糖含量控制在0.02～0.06g/L之间为宜。蒽酮—硫酸法测定板栗多糖含量的精密度实验RSD值为0.792%,平均加样回收率为107.2%,RSD值为4.6%。用本方法测定板栗中多糖含量为12.67%。     

超滤法分离浮萍多糖的工艺

探索超滤法分离浮萍中免疫活性成分浮萍多糖的工艺.通过煎煮、超滤、脱蛋白、乙醇沉淀等步骤对浮萍多糖进行提取分离,硫酸-苯酚法和硫酸-蒽酮法测定提取液和样品中的总糖含量,考马斯亮蓝G250比色法测定其蛋白质含量.得到浅褐色粉末,纯度53.5%,蛋白质含量1.2%,收率6.43%.该方法可以简单、快速、有效地对浮萍多糖进行分离.     

苜蓿芽多糖含量不同测定方法的比较研究

在食品科学领域测定多糖的方法一般为苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法两种,而对苜蓿芽中多糖含量的研究报道很少。本文就这两种方法在测定苜蓿芽多糖中的优缺点作一比较。结果表明两种方法各有优缺点,但测定结果间没有显著差异(P>0.05)。     

硫酸软骨素快速测定方法的研究

利用硫酸软骨素与氯化十六烷基吡啶结合生成稳定乳浊液 ,建立了硫酸软骨素含量的快速测定方法。在波长 680nm处测定硫酸软骨素在 0～ 6.2 5× 10 - 2 g/L范围内具有良好的线性关系 ,r=0 .9998,方法回收率为 98.4 9% ,RSD为 1.11%。该测定方法与氨基己糖法相比简便快速 ,重现性好     

标准曲线法对灵杆菌素测定方法的研究

灵杆菌素是从革兰氏阴性菌的细胞壁中提取的细菌性脂多糖,是目前已知的最具潜力的免疫促进剂。本实验以酚水法提取得到的灵杆菌多糖作为研究对象,应用苯酚—硫酸法、蒽酮—硫酸法、测定其多糖含量,并通过多次实验对各种方法测定糖含量的条件进行筛选。     

琼枝和异枝麒麟菜中硫酸酯基多糖不同提取方法的化学分析比较

采用“直接水提法”以及“KCl分级法”来提取琼枝和异枝麒麟菜中的多糖．分别用蒽酮-硫酸法、间苯二酚法、明胶-BaCl2分光光度法测定多糖样品的总糖质量分数、3,6-内醚半乳糖质量分数、总硫酸基质量分数;用凝胶色谱法测定各多糖样品的相对分子质量分布情况：用GCMS测定麒麟菜硫酸酯基多糖的单糖种类及含量．结果显示采用“直接水提法”以及“KCl分级法”比传统的“碱处理法”产率高,而且硫酸基质量分数也明显增高．两种麒麟菜多糖均为硫酸酯基多糖,大部分都属于k-卡拉胶类．各多糖样品的相对分子质量分布在10^5左右．麒麟菜多糖主要是由半乳糖和3,6-内醚半乳糖组成,此外还含有少量的葡萄糖、木糖、塔罗糖和艾杜糖等,不同方法提取的多糖样品其单糖种类基本一致．     

浮萍多糖总糖含量测定与评价

草本植物浮萍中提取的多糖类化合物经实验证明具有免疫增强活性.探索浮萍多糖提取物总糖含量的测定方法并对该方法进行评价,同时将其用于浮萍多糖生产制备中的质量控制.采用分光光度法,分别经苯酚-硫酸和蒽酮-硫酸显色,测定浮萍多糖提取物中的总糖含量,并通过线性和范围、精密度、稳定性和准确度等指标评价该方法.实验结果显示苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法测浮萍多糖所需设备简单、操作快速、结果稳定、灵敏度高,可将其作为浮萍多糖提取物中总糖含量测定的有效方法.     

硫酸软骨素提取方法研究

系统介绍了采用降解法提取硫酸软骨素的方法——中性盐法、碱提取法、酶提取法、超声波法和乙酸抽提法的工艺路线及其优缺点.     

硫酸软骨素生产新工艺

提出了双酶生产硫酸软骨素的新工艺,使质量稳定和得率提高。与传统生产法相比,得率可提高1％－2％,产品洁白,生产周期缩短1／3,生产成本降低5％。     

硫酸软骨素酶的分离纯化及部分性质

通过细胞破碎、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose FF和Sephacryl S-200柱层析，首次从粘质沙雷氏菌中提取出硫酸软骨素酶.纯化倍数11.46,比活为81.23 U/mg蛋白.提取液经PAGE和SDS-PAGE检测，呈现一条带.该酶相对分子质量为71.2 KD,亚基分子质量为35 KD,该酶为2个相同亚基组成.等电点为7.19，最适pH值7.5，最适温度为40 ℃，以4-硫酸软骨素为底物测得Km值为3.98×10^-4 mol/L.     

反相高效液相色谱法测定硫酸软骨素的含量

硫酸软骨素是从生物体内提取出来的一种天然药物 .本文采用反相高效液相色谱法 ,利用外标法定量 ,测定了硫酸软骨素的含量 .色谱柱为ZORBAX—ODS( 4 .6mm× 150mm ) ,流动相为水∶甲醇∶0 .0 1mol/磷酸盐缓冲液 ( pH4 ) =4 70∶2 0∶10 ,检测波长 2 0 0nm ,平均回收率为 98.2 6% ,RSD为1.0 5% (n =5) .本法具有快速、简便、灵敏、准确等优点     

硫酸软骨素对应激性胃溃疡模型小鼠的影响

观察了硫酸软骨素对应激性胃溃疡模型小鼠的疗效，以不同剂量浓度（100mg／kg、200mg／kg、300mg／kg）的经稀碱-酶解法从鸡胸软骨中提取硫酸软骨素，灌喂以饥饿与紧张双重作用下建立小鼠活动-紧张溃疡模型．结果发现，对照组小鼠生长状况良好，没有出现胃溃疡，模型组小鼠溃疡状况最严重，与模型组小鼠相比，药物组小鼠的胃溃疡指数明显降低，各药物组之间以及药物组与模型组的溃疡指数差异达到极显著水平（P〈0．01）．     

硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌的筛选及酶学性质的初步研究

从成都市井研县生猪屠宰厂等地采集的样品中筛选出一株高产、稳定的硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌株GT38，初步鉴定为彭氏变形杆菌(P．penneri)，其酶活力单位高达112U／L．酶学性质经初步研究表明：该酶的最适反应pH值为7．0，最适反应温度为30℃，在pH值6～8之间较稳定，温度在30℃～45℃较稳定，金属离子对酶活力影响不大．     

糖类油田化学品中多糖的定量分析

为定量分析糖类油田化学品中多糖的含量,采用苯酚-硫酸比色法进行测量,探讨波长、显色温度、显色时间、溶液稀释倍数等因素对检测结果的影响,分析线性区域并评价此方法的稳定性、精确度与重现性,并与蒽酮比色法进行对比.实验结果表明:采用苯酚-硫酸比色法,杂多糖苷KD-03溶液质量浓度在20～200mg/L之间、显色时间30min、波长为485nm时,吸光度与质量浓度呈良好的线性关系,稳定性好,精确度与重现性实验RSD值分别为0.76%和2.42%.对比蒽酮比色法,苯酚-硫酸比色法精确度与重现性分别提高了1.19%和3.04%.为油气田定量分析糖类材料中多糖含量找到一种新方法.     

CS结构修饰及其与AA相互作用的空间位阻效应

为从分子水平探讨硫酸化多糖与小分子相互作用机理,本文采用氯磺酸-吡啶法(Wolfrom法)对硫酸软骨素(CS)进行结构修饰,制得了不同硫取代度的CS样品.应用光谱法研究了天青A(AA)与CS相互作用的吸收光谱,考察了硫取代度对CS抗凝血活性及AA与CS相互作用的影响,应用建立的酸性多糖与生物探针相互作用数学模型,测得AA与不同硫取代度的CS最大结合数分别为151,215,211和204,认为AA与CS相互作用具有空间位阻效应.     

硫酸软骨素提取工艺优化及抑菌活性研究

实验以硫酸软骨素得率为指标选择超声波提取时间、碱质量浓度、碱性蛋白酶添加量和胰蛋白酶添加量4个因素结合响应曲面优化设计最佳提取方案,并选取大肠杆菌、枯草芽孢杆菌进行抑菌实验,采用平板计数法,确定其抑菌效果以及最低抑菌浓度.研究结果显示,超声波辅助碱-双酶法提取硫酸软骨素的最佳工艺条件为:料液比为1∶15(g/m L),碱添加量为30 g/L,提取温度50℃,超声时间为40.6 min、碱性蛋白酶添加量为3.01‰、胰蛋白酶添加量为3.53‰,硫酸软骨素得率为18.88%.抑菌实验表明硫酸软骨素对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌有抑制作用,最低抑菌浓度均为200 mg/m L.     

硫酸皮肤素寡糖的分离与制备

利用软骨素酶ABC（Chondroitinase ABC,EC4.2.2.4)对硫酸皮肤素（Dermatan Sulfate,DS)进行控制降解。对得到的混合寡糖首先采用低压凝胶渗透色谱（LPGPC）进行分级,然后对每一组分再利用强阴离子交换高压液相色谱（SAX－HPLC）进行分离,最终制备出聚合度为2,4,6,8,10,12的寡糖纯品。寡糖纯度采用SAX－HPLC,毛细管电泳（CE）以及聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进行检验,结构采用电喷雾离子化质谱（ESI－MS）以及核磁共振波谱（NMR）技术确定。