脂多糖诱导星形胶质细胞炎性反应的机制研究

目的 探讨脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞产生炎性反应及其可能机制.方法 原代培养并鉴定C57BL/6小鼠大脑皮质星形胶质细胞,GFAP免疫荧光染色进行鉴定,1μg/mL LPS刺激第2代星形胶质细胞,正常组细胞作为对照,Griess法检测NO的释放,ELISA检测细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平,免疫荧...     

雷公藤甲素通过调控NLRP3通路抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞炎性反应

目的 基于炎症小体（NLRP3）通路探讨雷公藤甲素（Triptolide TP）抑制小胶质细胞炎性反应的机制。方法 脂多糖（LPS）刺激BV2小胶质细胞促细胞炎症损伤,建立体外模型,观察TP对LPS刺激的小胶质细胞的影响。BV2小胶质细胞分为对照组、LPS诱导的模型组(1 mg/L LPS)、TP组(1 nmol/L TP+1 mg/L LPS)。对照组不做处理,其它组药物作用24 h,镜下观察药物组细胞发生的形态变化并和对照组比较;细胞上清液用Griess法测定一氧化氮(NO)的释放量;免疫荧光染色和Western blot法检测各组细胞间炎症小体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-1）和白细胞介素-18(IL-18)的水平差别。结果 LPS诱导BV2细胞炎性活化,形态呈阿米巴样,降低细胞活性,促进NO的释放。TP作用后降低NO水平,使NLRP3炎性小体激活受到抑制,NLRP3、ASC、caspase-1和IL-18表达水平低下。结论 TP对小胶质细胞炎性反应有抑制作用,发挥了TP的抗炎作用,抑制了NLRP3炎性小体的活化和表达...     

黄芪多糖对脂多糖诱导肠上皮细胞IPEC-J2氧化应激和炎症反应的缓解作用

为探究黄芪多糖对脂多糖诱导IPEC-J2细胞炎症反应的影响.将IPEC-J2细胞分为对照组、LPS处理组、ASP处理组和ASP+LPS处理组,分别检测各组细胞活力、抗氧化指数、相关炎症因子含量和mRNA表达水平.结果表明当10 mg/L LPS作用细胞12 h后,显著降低了细胞活力.当100 mg/L ASP预处理细胞4 h后显著提高了细胞的存活率.与对照组相比,LPS组显著提高了MDA含量并降低了SOD,CAT酶活力,显著上调细胞上清液中IL-6,IL-8和TNF-α的含量以及细胞内三者基因mRNA的表达水平,显著下调了IL-10基因mRNA的表达.而采用ASP预处理4 h后可显著降低细胞内MDA含量及提高SOD和CAT酶活力,且显著下调IL-6,IL-8和TNF-α的含量和细胞内三者基因mRNA的表达及显著上调IL-10基因的表达.试验表明ASP可缓解LPS引起的氧化应激和炎症反应,抑制IL-6,IL-8和TNF-α含量及其基因表达,促进IL-10基因表达,从而发挥抗氧化和抗炎作用.     

17β-雌二醇抑制高同型半胱氨酸诱导破骨细胞Raw 264.7激活的作用研究

 探讨17-β雌二醇(17β-Estradiol,17β-E₂)对高同型半胱氨酸(High Homocystine,HHcy)诱导的破骨前体细胞株Raw 264.7炎性因子释放的抑制作用.用同型半胱氨酸(Homocystine,Hcy)刺激Raw264.7细胞构建炎症模型,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测17β-E₂对Raw 264.7细胞的活力影响,免疫荧光双标和RT-PCR方法检测不同浓度17β-E₂(1,10 nmol/L和1μmol/L)对环氧合酶-2(COX-2)和细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)、炎性信号蛋白核因子-κB(NF-κB)蛋白与mRNA的表达变化.结果发现:不同浓度的17β-E₂在翻译水平和转录水平上明显抑制了Hcy诱导的细胞炎性蛋白酶COX-2和iNOS,细胞炎性因子TNF-α和IL-1β与炎性信号蛋白NF-κB的上调,并且COX-2和IL-1β蛋白和mRNA的表达呈剂量依赖性.上述结果表明17β-E₂可通过调控Hcy诱导的破骨前体细胞株Raw264.7细胞炎性因子释放从而抑制破骨激活,发挥抗骨质疏松的作用.     

葛根黄酮提取物诱导HL-60细胞凋亡调控研究

用RT-PCR技术和蛋白质免疫印迹技术,检测caspase-8和caspase-3基因转录和蛋白质翻译水平的变化,以探讨葛根黄酮提取物诱导HL-60细胞凋亡的调控途径。结果表明,50μg/mL葛根总黄酮提取物可以上调caspase-8和caspase-3基因转录和蛋白质翻译水平,且其能力分别强于葛根素和大豆甙元单体;说明葛根黄酮提取物诱导HL-60细胞凋亡可能通过经F as死亡受体和/或线粒体途径共同介导执行,葛根黄酮提取物抑制诱导凋亡能力强于葛根素和大豆甙元单体。     

岗松总黄酮对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的影响

为探讨岗松总黄酮（GSH）的抗炎活性机制,通过NF-κB信号通路,研究脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症的保护作用。实验采用噻唑蓝（MTT）法检测GSH对RAW264.7细胞增殖活性的影响,采用酶联免疫法（ELISA）检测GSH对白介素（IL-1β、IL-8）及转换生长因子β （TGF-β）的影响,采用蛋白印迹法（WB）检测细胞中IκBα蛋白相对表达,采用实时定量基因扩增荧光检测法（QPCR）检测细胞中NF-κB p65的mRNA基因表达。研究结果表明, GSH处理细胞后,可促进RAW264.7细胞增殖（P<0.05）,抑制IL-1β、IL-8、TGF-β含量（P<0.01）,上调IκBα蛋白的相对表达（P<0.05或P<0.01）,抑制NF-κB p65的mRNA基因表达（P<0.01）。推测岗松总黄酮抑制NF-κB信号通路可能是其抗炎活性作用机制之一。     

马钱子苷对小胶质细胞活化的抑制作用

为探讨不同浓度的马钱子苷对小胶质细胞活化的抑制作用及其相关分子机制,分离培养了小鼠原代小胶质细胞,用不同浓度的马钱子苷（50、100、200 μmol/L）预处理后,利用脂多糖（lipopolysacharide,LPS）诱导其活化。观察马钱子苷对LPS诱导的小胶质细胞活化、炎症因子释放以及NF-κB信号通路的影响。结果显示:与对照组相比,LPS组小胶质细胞胞体膨大,分泌大量炎症细胞因子,且NF-κB核转移程度增加（P<0.05）,小胶质细胞呈明显的M1型活化状态;低、中、高浓度的马钱子苷干预后,小胶质细胞的细胞总面积和细胞核面积显著减少（P<0.05）;中、高浓度的马钱子苷能使TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平降低（P<0.05）;中浓度的马钱子苷下调TNF-α和IL-1β的蛋白质水平（P<0.05）;此外低、中、高浓度的马钱子苷可以抑制小胶质细胞内iNOS表达和NF-κB信号通路激活。上述结果表明,马钱子苷可明显抑制小胶质细胞活化,减少炎症因子释放,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。这为马钱子苷应用于神经炎症的预防和治疗奠定了理论基础。     

黄酮衍生物的设计、合成及细胞抑制活性评价

为了研究黄酮衍生物的生物活性,以黄酮为母核、对二氯苄和氨基小分子为修饰基团设计并合成系列新型的黄酮衍生物,目标化合物的结构经¹HMNR、¹³CMNR等确证。体外测试发现,目标化合物对A549细胞呈现一定的活性,其中化合物W₂显示出最好的抗增殖活性,其IC₅₀为15.860μmol/L。在细胞凋亡实验中发现W₂可以通过依赖剂量的方式促进A549细胞凋亡。     

艾拉莫德对脂多糖诱导的小鼠系统性炎症的保护作用

研究艾拉莫德对脂多糖(LPS)诱导的小鼠系统性炎症和多器官损伤的保护作用。小鼠腹腔注射LPS 5 mg/kg建立系统性炎症和多器官损伤模型。试验结果显示,与模型组相比,阳性药强的松组(prednisone)和T614中高剂量组动物死亡率、临床症状、脏器系数及组织病理学结果均显著改善;同时血液生化指标(ALT、AST、ALP、BUN、CREA和UA)显著降低(均P0.01),血液学指标(WBC、RBC、PLT和RET)均与空白对照组动物水平相当。试验结果表明T614对LPS诱导的小鼠系统性炎症和多器官损伤具有保护作用。     

缺氧胁迫小细胞团法选育高产黄酮苷悬浮细胞系

以银杏优良品种的种苗诱导愈伤组织,考察了B5,sH,MS,White4种培养基对银杏愈伤组织生长性状和黄酮苷合成能力的影响,采用缺氧胁迫小细胞团法从愈伤组织中筛选高产黄酮苷的细胞系,并对细胞系在悬浮培养时的条件进行了优化.结果表明TZG-1培养周期18d,生长指数为4.12,黄酮苷含量为1.25％,比愈伤组织提高了257.1％;Ms培养基有利于形成质地松软的愈伤组织,当培养基中NH4+与NO3-的浓度比为20.3/39.4或10.3/29.1,蔗糖质量浓度为30g/L或40g/L,pH值为5.6～6.0时,有利于细胞生长和黄酮苷合成.     

响应面法优化金叶银杏落叶总黄酮提取工艺

优化金叶银杏落叶中总黄酮的提取工艺.分别研究单因素液固比、丙酮水比、提取温度、提取时间对总黄酮含量的影响,然后在单因素实验基础之上利用响应面法确定优化金叶银杏落叶中总黄酮的最佳条件.结果显示最优提取工艺为:液固比13.52m L·g~(-1)、丙酮-水比71:29、提取温度54.82℃、提取时间2.97 h.     

聚花过路黄总黄酮提取工艺

以总黄酮为指标,优化聚花过路黄醇提取工艺条件,采用正交设计法进行试验;结果表明:过路黄的乙醇回流提取最佳工艺条件为乙醇体积浓度的55%左右,提取次数为3次,溶剂用量为投料量的8倍,提取时间为每次2 h;按优化条件测定的重庆产聚花过路黄总黄酮的质量分数为10.980 6 mg/g。     

金荞麦愈伤组织诱导及其总黄酮含量测定方法的建立

金荞麦是蓼科(Polygonaceae)荞麦属(Fagopyrum Mill.)一种营养丰富并具有重要药用价值的多年生草本植物, 其块根活性提取物(其成分同悬浮培养的次生代谢产物即黄酮类化合物)是多种重要的抗癌药物和癌预防药物的主要成分之一. 利用金荞麦腋芽的叶片和茎段进行愈伤组织的诱导, 筛选出最适合愈伤组织生长的培养基为1/2MS+6-BA 2.0mg/L +NAA 0.3mg/L(或IBA 0.3mg/L)+2,4-D 0.1mg/L. 并在借鉴其他物种利用分光光度法测定总黄酮含量的基础上,对金荞麦愈伤组织的显色时间等条件进行了优化, 得到了一种适合金荞麦愈伤组织总黄酮含量测定的方法. 该方法简单易行, 为悬浮培养和其工厂化生产黄酮类化合物时总黄酮含量的测定奠定了基础.     

银杏叶中有效成分的微波提取及抗氧化活性研究

用正交试验设计优选出银杏叶黄酮类化合物的微波提取工艺,并采用化学发光法对银杏叶的粗提物、正丁醇萃取物及其余水层清除自由基和抗氧化性能进行了研究.结果表明:当固液比(m/m)为1∶30,微波中档400 W浸提时间为1 h,然后70℃水浴浸提1 h,黄酮的提取率最高.3种提取物均有较强的抗氧化活性.其中粗提物的抗氧化活性比正丁醇萃取物好,同时发现萃取后的水层部分虽然黄酮类化合物含量很低,但也有较强的抗氧化活性.证明银杏叶提取物是一组复杂的、而又有相互协同增效作用的混合物,进一步分离纯化可能对提高其抗氧化活性作用不显著.     

中国生漆多糖结构的NMR研究

本文利用1DNMR和2DNMR方法对两种来源不同的中国生漆多糖的结构进行了研究。NMR分析证明了多糖的异头碳的构型，给出了（1→6）和（1→3）连接方式的比例并首次发现生漆多糖中除了含有甲氧基外还含有乙氧基。NMR数据同时还表明生漆多糖是一种具有多层分枝、结构复杂的酸性杂多糖，它的化学成份及化学结构与其来源有关。     

辣木叶总黄酮提取方法的优化研究

采用正交实验的方法,以辣木叶总黄酮含量为考察指标,探讨了乙醇浓度、乙醇用量、提取温度、提取时间、提取次数对辣木叶中总黄酮提取效果的影响,并在单因素试验的基础上对提取方法进行了优化。结果表明,辣木叶总黄酮提取的最佳实验条件为：用70%的乙醇作为提取溶剂,提取温度80℃,乙醇用量20倍,提取时间1.5h,提取次数3次,在此条件下,辣木叶总黄酮含量为6.593%.     

LBP基因沉默对LPS诱导水牛单核巨噬细胞炎症相关基因表达的影响

为了探讨抑制脂多糖结合蛋白（LBP）基因表达对水牛单核巨噬细胞在内毒素（LPS）诱导下炎症相关基因的表达,首先采用三质粒慢病毒包装系统包装LBP基因shRNA重组质粒pSicoR-GFP-shLBP774.利用病毒颗粒感染水牛单核巨噬细胞,进行荧光定量qRT-PCR及ELISA检测.结果显示,单核巨噬细胞在用5×10⁸ IU/mL滴度的LBP-shRNA774慢病毒颗粒,感染指数（MOI）为300、感染7 d的条件下,感染效率超过50%.qRT-PCR检测结果显示,与LPS对照组相比,shLBP774感染组可极显著抑制LBP基因的表达（p<0.01）,CD14,TLR4,TNF-α,IL-1β,IL-8等基因表达显著降低（p<0.05）.ELISA检测结果发现,与对照组相比,细胞分泌的TNF-α,IL-1β蛋白量显著降低（p<0.05）.以上结果表明,抑制LBP基因表达可以有效降低LPS诱导下单核巨噬细胞炎症相关基因的表达,进而调控LPS引发的炎症反应,提示可将LBP作为靶基因深入研究水牛单核巨噬细胞免疫功能和LPS致炎信号传导分子机制.     

胡椒碱对脂多糖和金黄色葡萄球菌抑制人结肠腺癌细胞系表达防御素的拮抗作用

目的:研究胡椒碱(piperine,PIP)对脂多糖(LPS)和灭活金黄色葡萄球菌(SAC)菌体抑制人结肠腺癌HT-29和Caco-2细胞表达防御素(Defensin)的影响.方法:WST-1法检测PIP对HT-29和Caco-2细胞增殖的作用;定量PCR(qRT-PCR)检测人α防御素DEFA5(HD5)和DEFA6(HD6),人β防御素HBD-1以及胰岛再生源蛋白(Reg)Reg IIIγ等mRNA的表达水平.结果:PIP处理可剂量依赖性地抑制HT-29和Caco-2细胞的增殖,半数抑制浓度IC50分别为328.5μmol/L和155.1μmol/L,表明PIP对细胞的毒性较小;定量PCR检测显示,PIP处理对LPS或SAC下调HT-29和Caco-2细胞DEFA5和DEFA6 mRNA表达水平具有显著的拮抗作用,对DEFB1和Reg IIIγmRNA的表达没有明显影响.结论:胡椒碱可能通过拮抗病原体诱导细胞表达防御素的抑制作用,进而发挥其抗肠炎作用.     

泡沫浮选萃取分离回收废水中铜锌

在内循环浮选柱中,采用泡沫浮选萃取法对模拟废水中的铜锌离子进行了分离回收实验,研究了废水pH值、浮选时间、气速、环烷酸浓度等对分离效果的影响.结果表明,利用皂化环烷酸作为浮选萃取剂,两段浮选萃取,第一阶段在pH=2.7时优先浮选萃取铜,回收率达95%,而锌的回收率约为10%;然后在第二阶段升高残液pH值至7.9浮选萃取锌,可完全除去锌离子,残留废水达到排放标准.确定了泡沫浮选萃取分离回收铜锌的工艺路线,并制得工业纯硫酸铜和硫酸锌产物.